HPLC法测定逍遥丸（浓缩丸）中芍药苷的含量

梁晓东，时秀英

（1.河北神威药业有限公司，河北 廊坊 065201；2.神威药业有限公司，河北 石家庄 051430）

逍遥丸（浓缩丸）收载于《中药部颁标准》（第十一册，标准号为：WS3－B－2220－96），由柴胡、当归、白芍、白术（炒）、炙甘草、茯苓、薄荷、生姜八味药组成，具有疏肝健脾、养血调经的功效，用于肝气不舒、胸胁胀痛、头晕目眩、食欲减退、月经不调。我们对逍遥丸依照新药质量标准研究的技术要求，在中药部颁标准逍遥丸（浓缩丸）标准的基础上，对生产的样品进行了质量研究，根据研究结果并参考相关资料，制定了逍遥丸生产用质量标准草案。其中白芍中所含芍药苷为本制剂活性成分之一，采用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷的含量，从而控制产品质量。

1 实验依据及仪器试药

实验方法：所有试验均参照《中国部颁标准》和《中国药典》一部的有关规定进行。①供试品：逍遥丸（浓缩丸）：神威药业有限公司生产，批号：051105－1、051105－2、051109－1；②对照品及对照药材：芍药苷：中国药品生物制品检定所，批号：110736－200422；③仪器与试剂：Waters 2695液相色谱仪，Waters 2996紫外检测器，UV－2550紫外－可见分光光度计，JCX－250W（250W，50kHz）超声波提取器，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水。

2 试验内容和结果

逍遥丸（浓缩丸）收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中成药分册》第11册，原标准尚无含量测定项，为提高本品质量，加强控制，采用有关文献［1］，用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，具体操作如下：

2.1 色谱条件

仪器与试药：Waters 2695液相色谱仪，Waters 2996紫外检测器，固定相：C18色谱柱（Waters symmetry C18，5μm，3.9 mm×150mm），流动相：乙腈－0.01%磷酸溶液（15：85）。

2.2 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1mL含89.7μg的溶液，即得。

2.3 测定波长的选择

取芍药苷对照品溶液用UV－2550分光光度计扫描，结果芍药苷对照品在230nm处有最大吸收，故确定色谱条件中，检测波长为230nm。紫外扫描图谱见图1。

图1 芍药苷对照品紫外扫描图谱

图2 芍药苷对照品 溶液HPLC色谱

2.4 供试品溶液的制备及色谱条件的选择

由于芍药苷易溶于稀乙醇，参照药典及有关资料，选用稀乙醇超声处理，制备供试品溶液，固定相选用C18色谱柱，流动相采用乙腈－0.01%磷酸溶液（15：85），结果色谱分离度较好，并考察不同超声时间对提取效果的影响，结果见表1。对照品及样品色谱图见图2和图3。

图3 逍遥丸（浓缩丸）供试品溶液HPLC色谱

图4 白芍阴性HPLC色谱

表1 提取条件的选择

结果表明，提取30min即可提取完全，故确定提取方法为：取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25mL，密塞，称定重量，超声（功率250W，频率50kHz）处理30min，放至室温，再称定重量，加稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.5 阴性对照溶液的制备

依本品制备工艺及供试品处理方法，依法制备出白芍阴性对照溶液，注入高效液相色谱仪，结果，在对照品的同一保留时间处，无吸收峰，故可确定本品白芍阴性无干扰（见图4）。

2.6 线性关系考察

取芍药苷对照品溶液（0.0897mg／mL），依上述色谱分别进样5、10、12、15、20μL，测定峰面积积分值，以进样量x（μL）为横坐标，峰面积积分值y为纵坐标，绘制标准曲线，在0.44～1.79μg／mL范围内呈良好线形关系。结果见表2。线性关系见图5。

图5 线性关系

表2 线性关系测定结果

2.7 精密度试验

精密量取同一供试品（批号：051105－1）溶液，连续进样6次，依法测定峰面积，结果见表3。

表3 精密度试验结果

2.8 供试品溶液稳定性试验

取同一样品溶液（样品批号为：051105－1）按标准所述方法制备供试品溶液，隔一段时间测定其含量，结果见表4。

表4 溶液稳定试验结果

由表4可知，供试品溶液在24h内稳定。

2.9 重现性考察

取同一样品（批号：051105－1）6份，按标准所述方法制备供试品溶液，测定，结果见表5。

由表5可知，本方法重现性良好。

2.10 回收率试验

取6份逍遥丸样品（批号：051105－1；含量：7.28mg／g）粉末适量，精密称定，分别精密加入芍药苷对照品溶液（0.0897mg／mL）16mL、16mL、20mL、20mL、24mL、24mL，按供试品溶液的制备方法制备，测定其含量，结果见表6。

表5 重现性考察结果

表6 回收率试验结果

由表6可知，平均回收率为99.7%，在95%～105%范围内。

2.11 含量测定结果

依法测定各批次逍遥丸（浓缩丸）中芍药苷的含量，结果见表7。

表7 10批样品测定结果

由表7可得，10批样品中的含量平均值为1.24mg／丸，根据白芍药材芍药苷含量不得少于1.6%折算，故可初步定为本品中芍药苷的含量不得少于0.9mg／丸。

3 与上市药品的质量对比

为充分说明我公司产品质量，按照拟定的生产用药品标准草案，对我公司生产的逍遥丸（浓缩丸）（批号：051105－1、051105－2、051109－1）与河南宛西制药股份有限公司生产的逍遥丸（浓缩丸）（批号：060308）进行了质量比较，结果见表8。

由表8可知，我公司研制的逍遥丸（浓缩丸）和已上市样品质量基本相同，验证了我公司制定的质量标准合理可行，能够控制逍遥丸中的芍药苷含量。同时证明了工艺稳定、含量可控，弥补了现行逍遥丸（浓缩丸）质量标准没有含量测定的不足。

表8 质量对比

［1］庄秋虹.高效液相干色谱法测定逍遥丸中芍药苷的含量［J］.海峡药学，2004，16（2）：50－52.