erbB4及 Endoglin在皮肤鳞癌中的表达

朱 桢 曹海鹏 富学东 张素华 (唐山市协和医院皮肤科,河北 唐山 063000)

erbB4基因是近年来新发现的基因,是表皮生长因子受体(EGFR)家族中的新成员。近年来发现在宫颈癌〔1〕、乳腺癌〔2〕中均有 erbB4的高表达。新生血管的形成为恶性肿瘤细胞的快速增殖及局部浸润破坏提供了高效的灌注效应,为肿瘤细胞的扩散提供了基础〔3〕。 Endoglin〔4〕是一种内皮细胞增殖的标志物,主要表达于肿瘤组织内增殖旺盛的新生毛细血管。研究发现在胃癌〔5〕等多种肿瘤中 Endoglin的表达升高。本文旨在探讨 erbB4和Endoglin在皮肤鳞癌的发生及浸润扩散中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本 52例皮肤鳞癌标本随机取自唐山市协和医院2005年 ～2008年期间经手术后病理证实的患者。其中男 29例,女 23例;17例 ≤60岁,35例 ＞60岁;年龄 34～ 94〔平均(66.98±31.26)〕岁;病程 ＜1年者 9例,≥ 1年者 43例;肿瘤直径 ＜2 cm者 22例,≥ 2 cm者 30例;发生于曝光部位者 35例,非曝光部位者 17例。所有病例术前均未行放、化疗、未应用免疫抑制剂、冷冻、激光等治疗。52例鳞癌中高分化鳞癌 14例,中～低分化鳞癌 38例;11例伴有淋巴结转移,41例无转移。对照组选自外科手术切除的正常皮肤 10例。上述标本均为临床资料完整的病理科存档蜡块。

1.1.2 试剂 浓缩型兔抗人单克隆抗体 erbB4(克隆号:bs-1085R),购自北京博奥森生物生物技术有限公司。即用型鼠抗人 Endoglin(CD105)单克隆抗体(克隆号:SN6h),购自北京中山金桥生物技术有限公司。即用型 ElivisionTMplus免疫组化检测试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒,购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.2 免疫组化方法检测 erbB4、Endoglin蛋白 采用 EliVision法染色。erbB 4蛋白标记呈黄色或棕黄色颗粒,定位于实质细胞的胞浆及胞膜。每张切片观察 5个高倍镜视野。结果判断标准为:细胞未着色者为(-);着色细胞≤25%为(+);25%～50%者为(⧺);＞50%者为(⧺)。Endoglin蛋白标记呈黄色或棕黄色颗粒,定位于内皮细胞的胞浆及胞膜。先用低倍镜(×40)扫视整个切片,寻找高血管密度区,即“热点”。再在100倍镜下取 3个视野分别计算所有染色的微血管,取 3个测定值的平均数为该病例的微血管密度(MVD)值。在计数微血管时,任何一个染成棕褐色或棕黄色的内皮细胞簇或微血管,作为一个血管计数,只要结构不相连,其分支结构也作为一个血管计数。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行分析,数据以±s表示,两样本率的比较采用四格表资料的 χ2检验,并行Fisher精确概率法计算;对计量资料采用 t检验;资料的相关性分析采用 Spearman相关分析。

2 结 果

2.1 皮肤标本中erbB4的蛋白表达情况 39例(75%)皮肤鳞癌的 erbB4蛋白呈阳性表达,阳性率为 75%;对照正常皮肤阳性表达为 1例(10%),两组差异有统计学意义(P=0.000)。与对照组相比,鳞癌组 erbB4蛋白染色强度评分无明显变化(P=1.00)。见图 1。

2.2 皮肤标本中 Endoglin的蛋白表达情况 52例皮肤鳞癌中,Endoglin-MVD(Endoglin标记的 MVD)为 30.56±6.41,正常对照组为 3.00±1.63,两组之间差异有统计学意义(t=13.42,P＜0.001)。见图 1。

2.3 皮肤鳞癌erbB4及Endoglin-MVD在相关临床与病理状况的蛋白表达 erbB4蛋白在高分化鳞癌组的阳性表达率与中 ～低分化组差异无显著性。erbB4蛋白在伴有淋巴结转移组的阳性表达率与无转移组差异具有统计学意义。Endoglin-MVD在高和中 ～低分化组,在淋巴结转移组及无转移组,各组间差异均有显著的统计学意义。皮肤鳞癌组 erbB4蛋白及 Endoglin-MVD的表达与年龄、性别、病程、曝光与否及肿物大小之间均无明显相关性(P＞0.05)。见表 1。

图1 各组 erbB 4、Endoglin蛋白表达

表1 皮肤鳞癌 erbB 4蛋白及 Endoglin-MVD在相关病理情况下的表达

2.4 erbB4与 Endoglin相关性 52例皮肤鳞癌中,erbB4蛋白表达阳性的病例中,Endoglin-MVD为 31.79±6.24,erbB4蛋白表达阴性的病例中,MVD为 26.85±5.61。两者差异有显著性意义(t=2.54,P=0.014)。Spearman相关分析提示二者呈正相关(r=0.362)。

3 讨 论

erbB4参与了多种恶性肿瘤的发生,Zaichun等〔6〕在对非小细胞肺癌的研究中发现,癌组织 erbB 4的阳性表达率可高达91.4%,并且与淋巴结转移,肿瘤的 TNM分期及预后相关。Ben-Yosef等〔7〕在对一组咽喉部黏膜鳞癌的研究发现,erbB4的蛋白表达率为 51%,对照组为28%。本研究与上述鳞癌的结果类似。细胞学的结果发现〔8〕:erbB4可通过 PI3K/AKT途径促进小鼠结肠黏膜上皮细胞株(YAMC)细胞的增殖。在应用RNA干扰技术抑制erbB4在食管癌细胞系Eca-109中的表达的试验中发现〔9〕,干扰后 Eca-109细胞的迁移能力降低。在肿瘤微血管形成机制的研究中发现,PI3K对于肿瘤中的血管形成有重要作用,用 LY 294002抑制 PI3K的活性可以降低前列腺癌(PC-3)细胞诱导的血管生成〔10〕。上述研究提示 erbB4蛋白的高表达与恶性肿瘤的发生与侵袭转移有关。

Zvrko〔11〕研究发现 Endoglin-MVD与喉癌分级,转移及复发相关。Ying-juan〔12〕的研究提示:大肠癌组织浸润越深、伴有淋巴结转移以及Dukes分期较高者,其Endoglin-MVD也越高。本文结果也提供了相应的数据,提示Endoglin参与了肿瘤内大量血管的新生。Endoglin-MVD与皮肤鳞癌的形成、分化、侵袭和淋巴结转移有关。

Endoglin作为肿瘤新生血管的标志物已由众多学者的研究得以证实。肿瘤在生长过程中可以通过分泌多种细胞因子促进血管的形成。Sopel等〔13〕在对乳腺癌的研究中发现 erbB2与CD31标记的微血管密度显著正相关,提示肿瘤血管的生成与EGFR家族有关。本实验显示,Endoglin-MVD在 erbB4阳性呈正相关。但是二者之间互相调控的具体途径目前尚未知晓。

1 李仁忠,郑全庆,李燕琴 .宫颈癌组织中 erbB3、erbB4的表达及意义〔J〕.西安交通大学学报(医学版),2003;24(2):157-9.

2 杨慧玲,师秀琴,吕新全,等 .维吾尔族和汉族乳腺浸润性导管癌中CD44v5、HER4表达的差异〔J〕.中国老年学杂志,2006;26(5):589-90.

3 Hillen F,Griffioen AW.Tumour vascularization:sprouting angiogenesis and beyond〔J〕.Cancer Metastasis,2007;26(3):489-502.

4 Weinberg RA.癌生物学〔M〕.北京:科学出版社,2009:552-8.

5 刘爱东,庞久玲,刘士生 .胃癌中基质金属蛋白酶-9和 CD105表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志,2009;29(7):886-7.

6 Zaichun D,Wenying Y,Guoping H,et al.A study on the expression of erbB4/HER4 in non-small cell lung cancer〔J〕.Chinese-German J Clinical Oncol,2008;7(2):75-7.

7 Ben-Yosef R,Marmor S,Starr A,et al.ErbB4expression in squamous cell carcinoma of the head and neck〔J〕.Targeted Oncol,2006;1(4):181-5.

8 Frey MR,Edelblum KL,Mullane MT,et al.The ErbB4 growth factor receptor isrequired for colon epithelial cell survival in the presence of TNF〔J〕.Gastroenterology,2009;136(1):217-26.

9 逄旭光,范 虹,葛 棣 .HER4基因抑制对食管癌细胞 Eca-109迁移和侵袭能力的影响〔J〕.复旦学报(医学版),2008;35(4):521-7.

10 Fang J,Ding M,Yang L,et al.PI3K/PTEN/AKT signaling regulates prostate tumor angiogenesis〔J〕.Cell Signal,2007;19(12):2487-97.

11 Zvrko E,Mikic A,Vuckovic L,et al.Prognostic relevance of CD105-assessed microvessel density in laryngeal carcinoma〔J〕.Otolaryngol Head Neck Surg,2009;141(4):478-3.

12 封英娟,阳学凤.Survivin、VEGF及 CD105在结肠癌中的表达及其意义〔J〕.南华大学学报(医学版),2009;37(5):528-31.

13 Sopel M,Kasprzyk I,Berdowska I.Maspin and c-erbB-2 expression in correlation with microvessel density in invasive ductal breast cancer〔J〕.Folia Histochem Cytobiol,2005;43(2):109-16.〔2010-02-05收稿 2010-10-18修回〕