c-erb B-2、bcl-2和nm23蛋白在结肠癌组织中的表达及意义

高 艳 张险峰

(1黄石理工学院医学院,湖北黄石 435003; 2黄石市中心医院消化内科,湖北黄石 435000)

结肠癌是消化道常见恶性肿瘤,主要死亡原因是肿瘤的浸润和转移。结肠癌的侵袭和转移的发生是一个多基因、多因子共同作用的结果,主要涉及多种相关癌基因的激活和(或)转移抑制相关基因的失活。本实验采用免疫组化法检测c-erb B-2、bcl-2和nm23蛋白在结肠癌组织中的表达,并分析其与结肠癌各临床病理参数的关系,以期阐述其在结肠癌的发生发展和浸润转移中的作用。

1 材料与方法

1.1 资料

1.1.1 标本

收集 2007年 -2010年黄石市中心医院 45例结肠癌患者行根治手术切除获得的结肠癌组织标本。45例结肠癌患者中男 27例,女 18例,年龄(47.5±16.2)岁;TMN分期采用美国癌症联合委员会标准。本组病例术前均未行化疗和放疗;所获标本均经 10%甲醛固定,石蜡包埋,4μm连续切片,HE染色证实为结肠癌。

1.1.2 主要试剂

兔抗c-erb B-2单克隆抗体购自Santa-Cruz Biotechnology公司,bcl-2抗体购自福建迈新生物公司,nm 23抗体购自博士德公司, S-P试剂盒、DAB试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。

1.2 方法

采用免疫组化S-P法检测45例结肠癌组织中c-erb B-2、bcl-2和nm 23蛋白的表达,实验步骤严格按照说明书进行。并用已知结肠癌标本作阳性对照,以PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断

c-erb B-2以细胞膜或细胞浆呈棕色颗粒为表达阳性,bcl-2以细胞浆或细胞膜染成棕黄色为阳性,nm 23蛋白染色均以细胞质内呈棕黄色或黄色颗粒且明显高于背景者为阳性。采用双评分半定量法评分:＜25%细胞阳性为 0分,25% ～50%细胞阳性为 1分, 51%～75%细胞阳性为 2分,＞75%细胞阳性为 3分。显色度按细胞显色的有无及深浅评分:细胞无显色为 0分,浅黄色为 1分,棕黄色为 2分,棕褐色为 3分。然后根据 2项之和判断结果,0～2分为(-),3～4分为(+),5～6分为(++)。

1.4 统计学处理

采用SPSS16.0统计软件进行统计分析,计数资料比较采用 χ2检验,相关性分析采用Spearman相关分析,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 c-erb B-2、bcl-2和nm23蛋白在结肠癌组织中的表达

c-erb B-2、bcl-2及nm23蛋白在结肠癌组织中的阳性表达分别为 20、30、27例,阳性率分别为44.4%、66.7%、60%。c-erb B -2在结肠癌中表达,细胞浆呈棕色颗粒(图1);bcl-2在结肠癌中表达,细胞浆呈棕色颗粒(图2);nm 23蛋白在结肠癌中表达,细胞浆呈棕色颗粒(图3)。

图1 c-erb B-2在结肠癌中表达,细胞浆呈棕色颗粒(200×)

图2 bcl-2在结肠癌中表达,细胞浆呈棕色颗粒(200×)

图3 nm23蛋白在结肠癌中表达,细胞浆呈棕色颗粒(200×)

2.2 c-erb B-2、bcl-2和nm23蛋白在结肠癌组织中表达的意义

c-erb B-2、bcl-2及nm23蛋白在结肠癌组织中的表达及其与各临床病理参数之间的关系见表1。bcl-2、nm23蛋白的表达与结肠癌肿块大小无关(P＞0.05),c-erb B-2的表达与结肠癌肿块大小相关(P＜0.01);c -erb B-2、bcl-2与分化程度相关,nm23蛋白表达与肿瘤分化程度无关(P＞0.05);cerb B-2、bcl-2、nm23蛋白表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和远隔转移有关。

表1 结肠癌中c-erb B-2、bcl-2及nm23蛋白的表达与各临床病理参数的关系

3 讨论

原癌基因c-erb B-2位于常染色体17q21,其基因编码产物为一跨细胞膜蛋白P185,它同表皮生长因子 EGFR具有高度同源性,并具有酪氨酸激酶活性,肿瘤细胞中 cerb B-2的扩增和表达提示预后不良。Lee等报道c-erb B-2表达与临床病理有密切关系[1];Kay等发现在乳腺癌、宫颈癌、胃癌中 c -erb B-2表达与预后不良有关[2];Yang等发现结肠癌肝转移患者c-erb B-2蛋白表达升高[3]。乳腺癌、结肠癌、小细胞肺癌中 c-erb B-2已成为标志物[4-5]。本实验发现 c-erb B-2表达率为 44.4%,且大部分肿瘤直径大于5 cm,有淋巴转移者及远隔转移者表达率更高,与分化程度相关。提示c-erb B-2与结肠癌转移预后有关。

原癌Bcl-2基因是最早发现的细胞凋亡抑制基因,一旦Bcl-2基因被激活,导致Bcl -2蛋白过度表达,抑制细胞凋亡,延长细胞的生存期,为细胞癌变提供机会。Bcl-2蛋白主要定位于细胞膜的线粒体和粗面内质网上,其生物学功能为延长细胞的生命周期并增强细胞对凋亡刺激因素的耐受性而达到抗凋亡的作用,是较肯定的细胞凋亡调控基因[6]。它在体内以二聚体形式发挥作用,若形成同聚体则抑制细胞凋亡。近来研究发现,Bcl-2本身既无增殖作用,也无促进细胞恶性转化作用,但它可以在无生长因子作用下延长细胞存活时间,增加细胞染色体畸变和病毒感染的机会,导致细胞恶变和肿瘤形成[7]。本实验发现Bcl-2表达率与肿瘤直径、性别及年龄不相关,但与浸润程度、淋巴转移者及远隔转移者相关。

nm 23基因是Steeg等[8]于1988年首次从小鼠黑色素瘤 K-1735细胞株中用消减杂交法分离出来的能抑制肺癌转移的相关基因,是一种肿瘤抑制基因。人类 nm 23基因定位于17号染色体的 q22区,现已鉴定出 3种亚型: nm232H1、nm232H2、nm232H3。其中,发挥基因调控作用的主要是 nm 232H 1,其表达与多种恶性肿瘤的浸润和转移有关。大量研究表明,nm23蛋白表达水平与肿瘤细胞转移呈显著负相关,nm232H 1基因在癌细胞内具有等位基因缺失及基因突变的遗传学特征[9]。本实验发现,nm23蛋白的表达与肿瘤大小、分化程度、性别及年龄不相关。随结肠癌浸润的加深,其阳性表达逐渐降低,有淋巴结转移者的阳性表达较无淋巴结转移者显著降低,提示nm23基因的缺失和突变与结肠癌转移有关, nm 23在结肠癌转移中发挥负性调节作用。有研究表明在有淋巴结转移的结直肠癌中, nm23与c-erb B-2的表达呈负相关,提示c -erb B-2和nm 23基因蛋白异常表达在结直肠癌的发生发展和淋巴结转移中起重要作用。

总之,c-erb B-2、Bcl-2及nm23蛋白的异常表达与结肠癌的发生发展和浸润转移有关,联合检测c-erb B-2、Bcl-2及nm23对判断结肠癌患者预后和转移有一定的价值。

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