中国人群 ALOX5AP基因 SG13S114A/T多态性与缺血性卒中相关性的 Meta分析

徐佳亮, 蔺慕会, 陈晓虹, 何志义, 白 璇, 吕 姣

缺血性卒中(ischemic stroke,IS)是一个复杂性状的多基因遗传病,遗传变异决定了其遗传易感性,但其确切的遗传机制尚不清楚[1]。近年来,IS在遗传学方面新的进展主要集中在一个新的炎症相关基因,即 ALOX5AP基因的研究上。ALOX5AP基因作为 IS的易感基因,是 2004年 DECODE[2]研究组首先鉴定出来的,此后 ALOX5AP基因遗传变异与 IS的相关性在其他人群中也得到了验证。国内的研究显示 ALOX5AP基因第 1内含子 SG13S114A/T多态性位点,A等位基因与 IS的发病密切相关,但另一部分研究结果则不一致。推测这种相互矛盾结果的得出与样本含量不足有关。为此,本研究采用 Meta分析的方法,对目前国内进行的相关研究进汇总分析,以期更有效地评价两者之间的关系,提供循证医学资料。

1 资料与方法

1.1 研究对象 通过收集公开发表的有关中国人群 ALOX5AP基因 SG13S114A/T多态性与 IS相关性的病例-对照研究资料,以其中的 IS患者为研究病例,以健康人群为对照组,观察指标为两组基因型频数为优势比值(OR),及等位基因频数的 OR值。

1.2 资料来源 以缺血性卒中或脑梗死、5脂氧合酶激活蛋白基因或 ALOX5AP基因为主题词,联合检索 2004年至今的中国生物医学文献数据库,中国学术期刊全文数据库,万方数据库,及谷歌学术搜索引擎获得全部中文文献。并检索同期 Medline在外文期刊发表的中国人资料,同时对万方资料库博士和硕士学位论文进行检索,将未公开发表的学位论资料纳入本研究范围。为避免上述电子数据库未收录和未发表的文献资料,还对国内一些大型学术会议的论文汇编进行检索。通过以上方法获得有关中国人群 ALOX5AP基因 SG13S114A/T多态性与IS相关性的病例-对照研究文献。

1.3 纳入标准及研究质量控制 由神经内科医师和流行病学工作者采用盲法独立进行文献提取工作,并共同对文献进行质量评估取得一致性意见:(1)研究对象均为汉族人或以汉族人为主体,不包括少数民族为主体的研究;(2)均为独立的研究,同一组资料重复报道者,取其资料完整的文献;(3)各文献研究方法、诊断标准及对照组人群的纳入标准相同;(4)符合 Hardy-Weinberg(H-W)遗传平衡定律。

1.4 数据处理与统计 (1)对纳入研究的基因型分布进行 H-W平衡检验;(2)应用漏斗图初步分析纳入的文献是否存在明显的发表偏倚,然后根据Egger法进行偏倚检验[3];(3)应用 RVEMAN4.2(国际循证医学协会组提供)统计软件计算各个研究的SG13S114位点(AA+AT)/TT的 OR值,等位基因频数 A/T的 OR值,及其 95%CI;(4)以 Q检验对各研究结果进行同质性检验,若无异质性,则采用 Peto固定效应模型进行数据合并,计算总 OR值,若存在显著异质性,则采用 D-L随机效应模型法进行数据合并,检验水准取 0.05。

2 结 果

2.1 文献检索结果 共检出 10篇文献,有 4篇文献是同组资料的重复性研究,取其中一篇资料完整的文献,其他 3篇被剔除;另有 2篇文献报道的多态性位点为 SG13S100,也被剔除。最后纳入本研究的为 5篇文献,包括 2篇学位论文,其余 3篇发表于中国科技核心期刊。5项研究中,IS组为 2620例,对照组为 2411例;所有入选病例均符合国际疾病分类第 9版(ICD9)的诊断标准,且都符合 H-W遗传平衡定律;有 4个研究结果显示 SG13S114A/T多态性与 IS具有相关性,1个研究结果显示没有相关性。入选文献的资料及基因型分布情况见表1,等位基因频数分布见表2。

表1 入选文献一般情况及 SG13S114A/T基因型分布

2.2 入选文献的发表偏倚 对漏斗图目测结果显示,未见明显偏倚(见图1,图2)。按 Egger法,(AA+AT)/TT的 OR值除以其标准误与标准误倒数所建立的直线回归方程的 Y轴截距别为 0.042,95%CI为-2.248～2.333,包含 0,P=0.957;A/T的OR值除以其标准误与标准误倒数所建立的直线回归方程的 Y轴截距别为-0.273,95%CI为-3.225～2.697,包含 0,P=0.788,因此可以认为没有显著性偏倚存在。

表2 入选文献SG13S114A/T等位基因频数分布

图1 SG13S114A/T基因型(AA+AT)/TT漏斗图,横轴为 OR值,纵轴为 OR值自然对数的标准误

图2 SG13S114A/T等位基因 A/T漏斗图,横轴为 OR值,纵轴为 OR值自然对数的标准误

2.3 异质性评估 同质性检验显示,SG13S114A/T位点基因型(AA+AT)/TT的 OR值统计量 χ2=1.00,P=0.91;等位基因频数 A/T的OR值统计量 χ2=8.18,P=0.09,按照 α=0.05水准认为各研究的基因型结果和等位基因频数结果之间的一致性均好。

2.4 研究对象基因型分析 根据同质性检验结果,应用 Peto固定模型模型法合并数据,计算 OR值,并绘制森林图。5个研究合并后,SG13S114A/T位点(AA+AT)/TT合并的 OR值为 1.22,95%CI为1.09～1.36,OR值显著性检验 Z值为 3.5,P＜0.05(见图3);等位基因频数 A/T的 OR值为 1.05,95%CI为 0.96～1.14,OR值显著性检验 Z值为 1.09,P=0.28(见图4)。

3 讨 论

目前针对 IS遗传易感性独立的关联性研究均存在样本量不足,统计校能低的缺点。通过 Meta分析,可以利用现有研究的数据弥补样本量的不足提高统计效力,鉴定 IS有效的易感基因,同时也可以对 IS的遗传危险因素行定量地研究。Meta分析中存在着各种偏倚,但以发表偏倚最为常见。漏斗形图是初步判断发表偏倚简便易行的方法,但其缺点是只能对结果作定性的判断。而 Egger法[3]可对发表偏倚作定量的评估,是漏斗形图有效的补充。目前多将两者联合应用检验发表偏倚。本研究结果所示,根据 Egger的线性回归法,所建立的基因型和等位基因频数统计效应量的线性回归方程 Y轴截距的95%CI均包含 0,且 P＞0.1,结合漏斗图的目测结果,可以认为没有明显的发表偏倚。

ALOX5AP基因编码的产物是 5-脂氧合激活蛋白(5-Lipoxygenase activiting protein,FLAP),5-脂氧合酶(5-Lipoxygenase,5-LO)被 FLAP激活后可以将花生四烯酸转化成白三烯(leukotriene,LT),LT被认为是典型的炎症细胞因子,因此 ALOX5AP基因也可以被为是炎症因子的关键调控基因。2004年 DECODE研究组通过应用全基因组扫描的方法发现ALOX5AP基因 HapA单倍型可以明显增加北欧人群IS的遗传易感性。这一结果引起了各国学者的极大关注,我国学者也相继开展了 ALOX5AP基因多态性与 IS相关性的研究,但研究结果并不一致。

本研究在入选的有关第 1内含子 SG13S114A/T多态性与中国人 IS相关性的 5个病例对照组比较中,4项研究报告该位点的遗传变异与 IS密切相关,Meta分析数据合并后结果显示 SG13S114A/T位点AA基因型可以显著增加我国人群 IS的遗传易感性。该位点多态性增加 IS易感性的机制目前尚未完全明确,但多数研究提示,ALOX5AP基因在转录过程中 SG13S114位点的变异可能具有某种基因调控作用,导致 FLAP产生增多从而上调 LT活性,从而加重动脉粥样硬化的炎症反应导致 IS的形成[9]。针对A等位基因研究显示,4个独立的研究均发现A等位基因与 IS存在相关性,但数据合并后,A/T的OR值为 1.05,P=0.28,没有发现相关性。究其原因可能是:(1)SG13S114A等位基因在人群中出现的频率较低,而且纳入本研究的文献较少;(2)纳入文献的样本量较小,导致 Meta分析统计校能较低;(3)在 ALOX5AP基因中存在其他的导致 IS易感性增加的遗传变异。一项由 Zintzaras等[10]进行的 Meta分析结果显示,SG13S114A/T位点合并的 OR值为1.03,P=0.39与 IS无相关性,而 SG13S89G/A位点合并的 OR值为 1.25,P＜0.01与 IS相关。导致这种差异的形成,可能与人群遗传背景的不同,研究方法,入选对象入选标准,及性别构成等有关。

图3 SG13S114A/T基因型(AA+AT)/TT森林图

图4 SG13S114A/T等位基因频数A/T森林图

Meta分析作为一种现代科学研究中定量的文献分析方法,在 IS遗传学研究中的应用越来越广泛。相信随着 ALOX5AP基因多态性和 IS相关性研究的深入和研究资料的积累,我们可以通过 Meta分析进一步明确 ALOX5AP基因的遗传变异对 IS发病机制的影响,及为 IS的早期诊断和综合预防提供更多的依据。

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