李宝聚博士诊病手记（二十）如何利用显微镜简易诊断蔬菜细菌病害

张珊珊 李宝聚 王相晶 谢学文 石延霞

在生产实践中，基层农民和相关从业人员，对蔬菜细菌病害的田间识别主要是通过发病症状进行诊断，但植物病害的发生是致病菌、寄主和环境共同作用的产物，土壤、温湿度、轮作物等环境条件的差别可能导致病原物积累、发病症状甚至致病菌自身发生变化，这样，一种病害表现的症状就不一而足。单是凭借症状识别细菌病害不准确，容易误诊。在很多时候，人们的传统认识还拘泥在病斑水浸状、流脓、腐烂等就是细菌病害的固定模式中，实际上，这种认识是不科学的。我们在广泛采集标本镜检、鉴定的基础上发现，很多生理性病害也会有细菌病害的常见症状，比较可靠的方法是利用显微镜对病部进行显微诊断，根据有无病原细菌菌体溢出（简称菌溢，切开感病组织后，组织液中大量繁殖的细菌溢出）来判别细菌病害，这是比较科学的方法，也很简单易行。

在蔬菜生产中，茄果类青枯病、瓜类细菌性果腐病、十字花科软腐病及马铃薯环腐病都是常见的为害性很强的细菌病害，也是世界性的重要病害，造成了巨大的经济损失。仅2009年8、9月发生在贵州省修文县的番茄溃疡病造成的番茄绝产就达66.7 hm2。所以，在农业生产中，对细菌病害的正确识别尤为重要，早期发现、对症下药，可减少一定的经济损失。

细菌病害主要侵染植株的叶片、果实和根茎部等器官。我们以小白菜黑腐病〔由油菜黄单胞菌油菜致病变种Xanthomonas campestris pv.campestris（Pammel）Dowson.引起〕病叶和番茄青枯病〔由青枯假单胞杆菌Pseudomonas solanacearum（Smith）Smith引起〕病茎为例，来具体介绍如何对病叶和病茎切片显微观察菌溢。

1 叶部细菌病害显微观察

1.1 切片的制作 采集新鲜的植物感病叶片（彩色图版1）。取一块干净的载玻片，在中间滴1滴清水（最好是饮用纯净水），不宜过多，1滴即可。在病健交界处（发病组织和健康组织的交界处），用干净（纱布擦拭即可，没有纱布，面巾纸擦拭也可以）的刀片（我们用的是实验室专用切片刀片，用男士双面刮胡刀片也可，注意防止划伤手指）切取大约5 mm见方的组织（彩色图版2）。在载玻片的干燥处，用刀片将切下的组织按“十”字形划成4小块（彩色图版3），以破坏被侵染组织，使其中的细菌大量释放（经我们的研究证明，真正由细菌引起的病害感病组织中定会有大量的细菌存在，破坏组织可使其快速溢出）。可用刀尖蘸少量水粘附小的切片组织蘸入水滴中（彩色图版4）。先将盖玻片的一侧触到水滴（彩色图版5），轻轻盖上盖玻片，注意避免气泡的产生。使清水在盖玻片下充分展开（彩色图版6）。用吸水纸吸干多余的水。

1.2 显微镜观察 把做好的切片放在低倍显微镜下观察（物镜10倍即可），将切片上的感病组织置于光源投射的中心，调节粗准焦螺旋直到切片与目镜的距离最近，缓慢调节细准焦螺旋，使载物台缓慢下降，视野中若有物质一晃而过时即停止调节，调回原来的位置，移动到病组织边缘，可见溢出的大量云雾状细菌菌体（彩色图版7）。灯光不宜过亮，视野调暗更易观察。若想观察更清楚，可转换到高倍镜下观察，适当调亮视野。

感病组织菌溢非常明显时，可把做好的切片对准灯光，或放在黑色背景下，肉眼即可见白色向外扩展的细菌菌溢（彩色图版8）。

2 根茎部细菌病害显微观察（以茎部病害为例）

2.1 切片的制作 采集一段新鲜的植物感病茎部。取一块干净的载玻片，在中间滴1滴清水。找到茎表皮的感病处（内部一般有病灶），用无菌的双面刀片（茎组织内部包含韧皮部和木质部，排列比较紧密，需用锋利的刀片，注意防止划伤手指）纵剖，可见感病变色的木质部或韧皮部，纵向切取薄薄的一小片感病的内部组织（彩色图版9）。在载玻片的干燥处，用刀片把切片中健康的部分（主要是白色没有病变的组织）除去，将感病组织切成几块。可用刀尖蘸少量水将小的切片组织蘸入水滴中。先将盖玻片的一侧触到水滴，轻轻盖上盖玻片，注意避免气泡的产生。因为茎部组织较厚实，1滴水可能无法完全浸润感病组织，可从盖玻片边缘酌量滴入少许水，使感病组织在盖玻片下充分展开浸润。用吸水纸吸干多余的水。

2.2 显微镜观察 观察方法同叶部细菌病害。

3 生理病害与细菌病害显微诊断区别

在生产中，有些生理性病害也有水渍状、流脓、腐烂等症状，如常见的黄瓜泡状斑点病（彩色图版10）、辣椒脐腐病等，都很容易与细菌病害发生混淆。为了便于大家更好的识别细菌病害，我们以黄瓜泡状斑点病为例，将镜检制片结果与被病原细菌侵染的感病组织进行对比，便于大家进一步了解如何正确的诊断和区别细菌病害与生理病害。

发生黄瓜泡状斑点病的病叶正面有黄白色小泡状凸起，叶背面病斑周围水浸状（彩色图版11），所以生产中很容易被误认为细菌病害。通过病组织切片显微观察，确认其没有菌溢（彩色图版12），与细菌病害病组织切片对比观察，区别更为明显。这也充分说明对蔬菜细菌病害的简易诊断，显微观察是真正科学和有效的方法。