P53蛋白在食管癌中的表达和临床意义

黄俊辉 蒋义贵

食管癌(esophageal cancer，EC)是人类消化道的常见肿瘤，也是世界最常见的十种恶性肿瘤之一，位居我国肿瘤死亡的第四位。近期报道，每年新增患者超过300000人，并且大多发生在发展中国家［1］。当前临床就诊的病例多属于中晚期，其中能够行根治性切除术者只有1/3，且手术切除的5年存活率仅25%左右［2］。因此，就目前的状况来看，降低食管癌患者死亡率的关键是早期发现、早期诊断和早期治疗。食管癌的发生和发展是一个涉及多因素、多阶段、多基因变异积累及相互作用的复杂过程。在分子水平上涉及多个原癌基因、抑癌基因以及蛋白质的改变。所以，分子生物学方法现已成为EC早期诊断、判断预后、治疗及预防的重要手段和途径。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2006～2007在我院行食管癌手术的62例患者，其中男42例，女20例，年龄34～76岁，平均56岁，术后病理检查结果均为鳞癌。其中高、中分化48例，低分化14例，伴有淋巴结转移的患者38例，无淋巴结转移的患者24例，癌浸润至黏膜下层3例，肌层23例，全层36例，所有病例术前均未经放化疗。

1.2 实验材料和方法 SP试剂盒、抗p53单克隆抗体购自福州迈新生物技术公司。免疫组织化学染色：常规切片，脱蜡水化。3%H20。溶液作用5 min，微波炉抗原修复。加10%正常山羊血清，室温下孵育5 min。倾去血清，加入P53单克隆抗体工作液，置于4度冰箱中过夜。PBS液洗片后加入二抗，37度恒温箱中孵育20 min。洗片后加入LSAB复合物，37度恒温箱中孵育20 min。PBS液洗片，配制DAB显色液，加入切片中显色，封片。

1.3 免疫组化结果判断 P53基因蛋白阳性表达呈棕褐色颗粒定位于细胞核内，阳性细胞＜25%为(-)，25% ～50%为(+)，50% ～75%为(++)，＞75%为(+++)。

1.4 统计学处理 采用spss 13.0统计，各项目内的计数资料采用卡方检验，P＜0.05为差异有显著性。

2 结果

p53蛋白在62例食管癌组织中表达的阳性率为48.4%。在男性和女性患者分别为50.0%和45.0%(P＞0.05);低于60岁年龄组和高于60岁年龄组分别为46.9%和50.0%(P＞0.05)：高、中分化组和低分化组分别为47.6%和50.0%(P＞0.05);肿瘤浸润黏膜及肌层的患者表达阳性率为61.1%，浸润全层时为30.8%(P＜0.05);有淋巴结转移为65.8%，无淋巴结转移组为20.8%(P＜0.05)，即p53的阳性表达率与性别、年龄、及肿瘤的分化程度无显著差异，而与细胞浸润深度和淋巴瘤转移状态具有统计学意义。

3 讨论

肿瘤的发生和演进过程中，细胞将发生一系列遗传学的改变，如一些癌基因激活和抑癌基因失活，而其中某些基因的分子遗传学改变可能就是细胞癌变的标志。P53基因是一个肿瘤高度相关的基因，是一种重要的抑癌基因，定位于染色体17p13上，基因全长大约16～20kb，由11个外显子和10个内含子组成，编码393个氨基酸。参与细胞增殖和分化，与细胞周期的调控密切相关。其主要生物学功能是引起细胞周期阻滞于G1/G2期，诱导细胞凋亡而发挥抑瘤作用。根据功能的不同可分为野生型和突变型。野生型p53基因具有抑制细胞增殖和转化的作用，正常细胞中野生型p53基因参与细胞周期的调控，可以阻止细胞于G1/S期，其半衰期短，含量低，用免疫组化方法无法检测到。突变型p53是一种促癌基因，是P53基因突变的产物。研究表明，在人类恶性病变的发展过程中，常出现p53的突变，突变型p53蛋白不仅失去对细胞异常增殖的抑制作用，从而促进细胞异常增殖，最终使细胞全部表型出现恶性化［3］。同时，这些突变引起氨基酸的取代，出现蛋白质结构的变化，所表达的蛋白质半衰期较长，且突变型P53蛋白具有癌蛋白活性且稳定性增高，因此可以检测出来，即提示利用免疫组化检测p53基因蛋白表达是突变型［4］。在食管癌中，有30% ～50%的患者存在P53基因的突变。P53基因突变可能是食管细胞癌变的一个早期事件，这在早期的研究中已经被证实。目前开展了多项针对P53基因的靶向治疗的研究［5］。(食管癌组织和癌旁组织)

国外有学者研究证实，P53基因突变与肺癌易发生局部淋巴结转移、预后差有关J［6］，就其在食管癌中的研究鲜有报道。本研究结果显示的P53基因蛋白表达与肿瘤的浸润深度和淋巴结转移状态有关，而后者已经证实食管癌预后不良主要因素，因此本结果提示P53蛋白的表达可能食管癌预后不良指标之一。

表1 p53蛋白表达与病理特点关系(例，%)

［1］Parkin D M .Global cancer statistics in the year2000.Lancet Oneol，2001，2(9)：533-543.

［2］黄诗良，孟祥中.早期食管癌的诊断.现代使用医学，2005，9(17).

［3］李辉，阎天生，张晓娜.食管癌早期诊断的研究进展 .河北医药，2006，28(8)：755-757.

［4］苗战会，路平，陆志红，李荣.p 5 3蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床病理参数关系 .Medical Information Medicine＆Surgery，2009，22(8)：696-797

［5］HoshinoI，Matsubara H，AkutsuY，et al.Roleof histone deacetylaseinhibitor i n adenovirus-mediated p53 gene therapy in esophageal cancer.Anticancer Res，2008，28(2A)：665-671.

［6］MishinaT，Dosaka A H，HommuraF，et al.Cy clin E express，apotentialprognostic marker for non-small cell lung Cancer.Clin Cancer Res，2006，12：11-16.