肾脏肿瘤中突变型p53和CD44v6基因产物的表达分析

耿娟娟

[摘要] 目的 探讨肾脏肿瘤临床特征与突变型p53以及CD44v6基因表达产物的关系。 方法 选择79例肾脏肿瘤患者的临床资料进行回顾性分析，所有患者均手术治疗，测定肿瘤组织突变型p53及CD44v6基因表达产物，并随访患者5年的生存率，分析突变型p53及CD44v6基因表达产物与患者临床特征、生存率的关系。 结果 良性肿瘤与恶性肿瘤P53蛋白、CD44v6蛋白的阳性率比较，差异有统计学意义（P<0.05），阴性及阳性表达患者5年生存率比较存在显著差异（P<0.05）。CD44v6蛋白在Ⅲ～Ⅳ期以及G3级的阳性表达率显著升高（P<0.01）。 结论 肾脏肿瘤中突变型p53和CD44v6基因产物的表达与患者的5年生存率具有相关性，而CD44v6蛋白与病理分期以及病理分级具有相关性。

[关键词] 肾脏肿瘤；突变型；p53；CD44v6；基因产物

Analysis of mutant p53 and CD44v6 gene products expression in kidney cancer

GENG Juanjuan

Special Wards， Southern Medical University Affiliated People's Hospital of Zhengzhou， Zhengzhou 450000， China

[Abstract] Objective To discuss mutant p53 and CD44v6 gene products expression in kidney cancer. Methods Clinical data of 79 cases of kidney cancer patients were selected for retrospectively analysis. All cases were treated by operation. Mutant p53 and CD44v6 gene product expression were detected and 5-year survival rates of patients were followed up. Results The positive rates of P53 protein and CD44v6 protein in benign and malignant tumors showed significant difference （P<0.05）， and 5-year survival rates of negative and positive expression groups showed significant difference （P<0.05）. The positive rate of CD44v6 protein in Ⅲ to Ⅳ and G3 were significantly higher （P<0.01）. Conclusion Mutant p53 and CD44v6 gene products expressions in kidney tumors are relevant with the 5-year survival rates. The CD44v6 protein expressions is correlated with pathological stage and histological grade.

[Key words] Kidney cancer； Mutant； p53； CD44v6； Gene product

肾细胞癌在泌尿生殖系恶性肿瘤中居第二位，仅次于膀胱癌，属于实性恶性肿瘤。是否发生转移以及肿瘤细胞的分化程度与患者的预后具有密切的关系，而肿瘤细胞某些基因的突变与肿瘤细胞的发生、发展、侵袭以及转移密切相关[1]。p53基因属于抑癌基因，而CD44v6在多种癌症细胞中呈高表达[2，3]。本研究通过对79例肾细胞癌患者癌细胞中突变型p53基因及CD44v6表达产物的检测，分析其与肾细胞癌临床特征及患者生存率的关系。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2000年1月～2005年12月在我院手术治疗肾脏肿瘤患者79例的临床资料，所有患者病理诊断支持肾脏肿瘤诊断，均经手术治疗，留有石蜡包埋的癌组织标本，且随访5年以上，有完整的随访资料。其中男61例，女18例，年龄30～67岁，平均（52.1±10.5）岁。其中肾细胞癌72例，错构瘤7例。其中72例肾细胞癌患者的病理分型：45例为透明细胞癌，15例为乳头状细胞癌，7例为嫌色细胞癌，5例集合管癌；Robson分期：7例为Ⅰ期，45例为Ⅱ期，20例为Ⅲ～Ⅳ期；WHO病理分级：G1级11例，G2级26例，G3级35例。

1.2检测指标

检测癌细胞中突变型p53以及CD44v6基因产物的表达，采用免疫组化SP法进行检测。一抗鼠抗人P53单克隆抗体、鼠抗人CD44v6单克隆抗体。癌旁正常组织为阴性对照，PBS代替一抗为空白对照。突变型P53蛋白阳性表达细胞：细胞核呈棕黄色，或者核内有棕黄色颗粒；CD44v6蛋白阳性表达细胞：细胞膜呈棕黄色。

1.3研究方法

回顾性分析患者的临床资料，统计患者分级、分期、5年生存率等情况。分析p53以及CD44v6基因产物的表达与患者分级、分期以及5年生存率的关系。

1.4统计学处理

采用SPSS 12.0统计学软件对数据进行分析，计数资料采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1突变型p53基因表达产物P53蛋白与患者肿瘤分期、分级以及5年生存率的关系

P53蛋白阳性表达：肾错构瘤无阳性表达，肾细胞癌患者72例中29例为阳性，占40.3%，肾良性肿瘤与恶性肿瘤P53蛋白的阳性率比较，差异显著（P<0.05）。不同分期的阳性表达：Ⅰ期2例（28.6%，2/7），Ⅱ期17例（37.8%，17/45），Ⅲ～Ⅳ期10例（50.0%，10/20）。不同病理分级阳性表达：G1级 4例（36.4%，4/11），G2 级8例（30.8%，8/26），G3级17例（48.6%，17/35）。72例肾癌患者中，P53蛋白阳性表达患者29例，5年生存率为31.03%（9/29），阴性表达患者43例，5年生存率为67.44%（29/43）。阴性及阳性表达患者5年生存率比较存在显著差异（P<0.05）。见表1、图1。

表1 P53蛋白阳性表达与肿瘤分期、分级以及5年生存率的关系

图1 突变型P53蛋白阳性表达细胞，细胞核呈棕黄色，或者核内有棕黄色颗粒（×400）

2.2 CD44v6蛋白表达与分期、分级及5年生存率的关系

CD44v6蛋白阳性表达：肾错构瘤无阳性表达，肾恶性肿瘤患者72例中28例为阳性，占38.9%，肾良性肿瘤与恶性肿瘤CD44v6蛋白的阳性率比较，差异显著（P<0.05）。不同分期的阳性表达：Ⅰ期1例（14.3%，1/7），Ⅱ期12例（26.7%，12/45），Ⅲ～Ⅳ期15例（75.0%，15/20）。不同病理分级阳性表达：G1级 1例（9.1%，1/11），G2 级7例（26.9%，7/26），G3级20例（48.6%，17/35）。72例肾癌患者中，CD44v6蛋白阳性表达患者28例，5年生存率为25.00%（7/28），阴性表达患者44例，5年生存率为70.45%（31/44）。阴性及阳性表达患者5年生存率比较存在显著差异（P<0.05）。见表2、图2。

表2 CD44v6蛋白表达与分期、分级以及5年生存率的关系

图2 CD44v6蛋白阳性表达细胞，细胞膜呈棕黄色（×400）

3讨论

恶性肿瘤的发生与基因突变具有密切的关系，主要是抑癌基因发生失活或癌基因被激活。抑癌基因对细胞增殖、分化具有重要的调控作用。p53基因是人体的抑癌基因，其编码分子量为53kDa的蛋白质，因此被命名为p53基因。p53失活对肿瘤的发生和发展具有重要的作用。p53作为抗癌基因，其导致癌细胞自杀，从而防止癌变的发生，同时还帮助细胞基因修复缺陷[4]。但是这种功能也会帮助受到化疗药物损伤的癌细胞发挥修复作用，使被修复的癌细胞形成新肿瘤。50%的恶性肿瘤存在p53基因突变。p53基因编码的蛋白质是转录因子，控制细胞周期启动，发送许多关于细胞健康的信号，决定是否开始细胞分裂。当细胞受损后，又不能得以修复，则P53蛋白参与启动，促使细胞凋亡。p53基因突变的细胞失去这种控制，甚至会在不利的条件下发生继续分裂。在正常情况下p53基因可延缓或监视细胞分裂，可判断DNA变异的程度，对变异较小者可促使细胞自我修复，对变异较大者，可诱导细胞发生凋亡。p53基因发生突变后，其空间构象改变，失去调控细胞生长、凋亡以及修复DNA的作用，突变后的p53基因转变为了癌基因[5，6]。在本次研究中，通过对突变后p53基因表达的P53蛋白进行检测，判断肾脏肿瘤组织中p53基因的突变情况，结果显示，恶性肿瘤P53阳性表达率显著高于良性肿瘤，这提示p53基因的突变参与了肾脏恶性肿瘤的发生和发展过程。在对5年生存率的随访中，P53蛋白阳性表达的患者其5年生存率显著低于阴性表达的患者，提示p53基因突变与患者5年生存率具有相关性。

CD44是广泛分布在细胞表面的一种跨膜糖蛋白，属于细胞黏附分子，基因在11号染色体的短臂上，根据外显子选择性剪接结果分为标准型CD44（CD44S）和变异型（CD44v）。1991年在大鼠转移性胰腺癌细胞中发现了一种CD44的变异体，其在大鼠CD44S蛋白第223～247位氨基酸残基间插入了含162个氨基酸的片段，该片段中含有4个O-糖基化位点以及3个N-糖基化位点，后来证实该片段含v6外显子编码。CD44具有介导细胞间的黏附作用，其作为淋巴细胞的“归巢”受体参与了淋巴细胞归位到淋巴组织的过程，其还具有活化T细胞的作用，并参与细胞内信号传递过程，调节淋巴细胞的再循环，介导淋巴细胞与内皮细胞黏附，参与免疫调节及肿瘤细胞的生长、增殖、转移[7]。在恶性肿瘤中，CD44v6的表达情况并不一致，对于阳性表达的肿瘤组织，更容易发生浸润和转移，并且阳性表达的患者5年生存率较低，预后较差。在正常组织中，CD44v6不表达或呈低表达，该基因处于失活或者休眠的状态，但是在恶性肿瘤中，其由标准型经过一系列的修饰，从而发挥改变肿瘤细胞粘附的作用，增加其黏附能力而促使肿瘤细胞局部侵袭浸润[8]。CD44v6蛋白是透明质酸酶的跨膜糖蛋白受体，可以连接基质中的多种相关蛋白，使其结合透明质酸，形成癌细胞的伪足，使肿瘤细胞形态发生改变，为癌细胞的游走、迁徙提供条件，促使肿瘤细胞的浸润以及转移。CD44v6是淋巴细胞的归巢受体，能够激活淋巴细胞，促使淋巴细胞发育，导致细胞极性发生改变，加强恶性肿瘤的生物活性，具有淋巴细胞相似的活动性，使其更容易进入淋巴系统而发生远处转移。另外，血管中的配体也可结合发生了改变的癌细胞，促使转移的肿瘤细胞在此处寄宿生长。在本次研究中，CD44v6蛋白在肾脏恶性肿瘤中的阳性表达率显高于良性肿瘤组织，进一步分析显示，肿瘤病例分期及分级越高，CD44v6蛋白的阳性表达率也越高，这也证实了以上结论，CD44v6蛋白参与了肿瘤细胞的局部浸润、远处转移。对患者5年生存率进行随访，结果显示CD44v6蛋白阳性表达的患者其5年生存率显著较低。这可能是因为CD44v6蛋白促使了肿瘤细胞的远处转移，患者病例分级和分期均较高，预后也往往较差。

综上所述，突变型p53和CD44v6基因产物在恶性肾脏肿瘤组织中呈高表达，并且与患者5年生存率具有相关性，而CD44v6基因蛋白与恶性肿瘤的病理分级和病理分期均具有相关性，分期和分级越高，其阳性表达率也越高。

[参考文献]

[1] 张宁，龚侃，果宏峰，等. von Hipple-Lindau基因突变与散发性肾透明细胞癌患者预后的关系[J]. 中华泌尿外科杂志，2008，29（11）： 740-743.

[2] 王冰涛，尚宏清，李伟，等. ER，PR，Ki67，p53表达与乳腺癌淋巴结转移相关性研究和临床意义[J]. 中国医药导刊，2014，25（2）：231-232，234.

[3] 祁秀敏，张熔熔，吕慧. 大肠癌组织CD44V6与多药耐药相关基因表达的相关性及其预后意义[J]. 广东医学，2014，35（6）：867-870.

[4] Levine A J，Oren M. The first 30 years of p53： Growing ever more complex[J]. Nat Rev Cancer，2009，9（10）：749-758.

[5] 孙连桃，勾宏娜，马淑一. p53异构体在肾癌中表达的研究[J]. 现代预防医学，2013，40（17）：3325-3326，3331.

[6] Ebrahimi M，Boldrup L，Coates P，et al. Expression of novel p53 isoforms in oral lichen planus[J]. Oral Oncol，2008，44（2）：156-161.

[7] 蒋悦. E-Cadherin、CD44v6在肾脏恶性肿瘤中的表达及意义[J]. 中国现代医生，2013，51（8）：14-16.

[8] 张俭. 肾癌组织中E-钙黏素和CD44v6的表达及意义[J].山东医药，2011，51（10）：81-82.