高效液相色谱法测定润肺止咳胶囊中黄芩苷的含量

张月梅

吉林省长春市儿童医院，吉林 长春 130061

润肺止咳胶囊具有养阴清热，润肺止咳的功效。。临床用来治疗肺热燥咳，或热病伤阴所致咳嗽，该药由百部(蜜炙)、生地黄、麦冬、芦根、黄芩、苦杏仁、枇杷叶(蜜炙)、桔梗、浙贝母、甘草十味中药提取、精制加工而制成的胶囊剂。

按照中药新药研究的有关技术要求，为了更好的控制润肺止咳胶囊的质量，参照润肺止咳胶囊标准WS－10130(ZD－0130) －2002及相关文献的检验方法［1－4］，参照润肺止咳胶囊质量标准，选择黄芩中含有的有效成分黄芩苷［5－8］作为含量测定成分，并采用高效液相色谱法测定制剂中黄芩苷的含量，为控制产品质量建立一套科学有效的方法。

1 仪器与试剂

岛津LC－2010A高效液相色谱仪，色谱工作站:2010色谱工作站，润肺止咳胶囊由青海大地药业有限公司提供(批号:091108、091109、091110)，黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所。甲醇 (天津市四友生物医学技术有限公司)，水 (二次重蒸水，自制)，磷酸 (北京化工厂)，流动相所用的试剂为色谱纯，其他试剂、试药均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及测定波长的选定 色谱条件:色谱柱:Inertsil ODS－3(250mm×4.6mm，5μl);用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸溶液 (0.1%)—甲醇 (54∶46)为流动相;理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2500，检测温度为室温，流速为1.0ml/min。检测波长:取黄芩苷对照品适量，用甲醇溶解，配置成适合浓度的供试液，用紫外风光光度仪，在200nm～400nm光谱扫描，其最大吸收波长为274nm，故选定274nm为其测定波长。

2.2 溶液配制与测定方法 对照品溶液的制备:对照品溶液取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶解并配制成每1ml含0.2mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备:取重量差异合格的润肺止咳胶囊10粒，精密称定，倒出内容物，研细，取0.64g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理 (功率160W，频率40kHz)20min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性考察 取缺黄芩的阴性对照样品，制备阴性对照样品溶液，按上述色谱条件，测得黄芩苷对照品、供试品溶液和阴性对照溶液的色谱图，结果在与黄芩苷对照品相同保留时间处，供试品溶液出现黄芩苷色谱峰，阴性对照样品此保留时间处无杂质峰出现，表明阴性对照无干扰。见图1－图3。

2.3.2 标准曲线的制备

称取黄芩苷对照品适量，精密称定，配制成一系列浓度的溶液，按拟定的色谱条件进样，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，黄芩苷浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程:C=7×106A+3.6162，r=0.9999。结果表明，在51.2μg/ml～818.4μg/ml范围内，黄芩苷浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验

精密吸取供试品溶液20μl，重复进样5次测定黄芩苷峰面积计算相对标准偏差。见表2。

表2 精密度试验结果

结果表明:本法精密度符合规定。

2.3.4 稳定性试验

分别取同一份供试品溶液20μl，按上述色谱条件每隔一定时间进样，记录峰面积，考察样品溶液的稳定性，计算相对标准偏差。见表3。

表3 稳定性试验结果

结果表明，供试品溶液中黄芩苷的含量在8小时内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验

精密称取样品适量，由同一人制成六份供试品溶液，精密吸取20μl注入色谱仪，按拟定的色谱条件测定峰面积，计算相对标准偏差。见表4。

表4 重复性试验结果

结果表明，本方法重现性良好。

2.3.6 中间精密度试验

精密称取样品适量，由不同人在不同时间制成六份供试品溶液，精密吸取20μl注入色谱仪，按拟定的色谱条件测定峰面积，计算相对标准偏差。见表5。

表5 中间精密度试验结果

结果表明，本方法中间精密度良好。

2.3.7 回收率试验

采用加样回收法，取已知含量的润肺止咳胶囊剂6份，内容物研成细粉，分别添加黄芩苷对照品适量，制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，以下式计算回收率。见表6。

表6 回收率试验结果

结果表明，本法具有良好的回收率。

3 讨论

我们的国家是天然药物的故乡，有方剂九万余首，中成药五千余种、中药剂型三十五大类四十三种、药材一万两千八百零七种。我们有雄厚的中医药理论和丰富的临床用药经验，但在目前植物药的大市场中我国仅占3%～5%的份额。相反，日本、韩国的汉方药制剂却占领了绝大部分国际药物市场，欧美植物药的发展势头亦对益强劲。我国中药产品缺少竞争力的主要原因之一在于现行的中药质量控制方法不能全面地反映中药制剂的质量，对其内在成分的稳定性、一致性和相对可控性分析不移，直接导致临床疗效的不确定。这一切都严重地限碍了我国中药及其制剂的发展，也成为阻碍我国中药参与国际市场中竞争的主要因素。因此，提高中药的质量是实现中药现代化的迫切需要。中药特别是中药复方，包含成百个化学成分，其物质基础是有效化合物群。无沦是单味中药还是复方，其化学物质在类型和数量等方面都各异。正是这种多样性和复杂性构成了单味中药或复方中药的复杂体系。如何应用现代仪器和手段研究中药及其复方的治病物质基础—化学成分，是建立符合中医药质量标准体系的关健。它的出版必将有助于推动中药质长标准体系约研究。

随着中药现代化的不断深入，HPLC法在中药成分分析方面应用日趋广泛，已成为控制中药质量的重要手段之一，本文采用HPLC法，为控制产品质量，我们参照润肺止咳胶囊标准，对方中黄芩所含有效成分黄芩苷进行了含量测定。实验证明，本方法灵敏度高，专属性强、稳定可靠，适用于润肺止咳胶囊中黄芩苷的含量测定。

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