三白草中槲皮素的薄层色谱鉴别

王晓飞 于 玲 杜华霜 汪 杰

中国人民武装警察部队药品仪器检验所，北京 102613

三白草为三白草科植物三白草Saururus chinensis(Lour.)Baill.的干燥地上部分［1］，生长在沟旁、沼泽等低湿低湿及近水的地方。主要分布于河北、山东、安徽、江苏、浙江、广东、湖南、湖北、江西、四川等地。槲皮素主要存在于三白草叶中，是一种重要的黄酮类化合物，有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突变等多种功能［2］，具有很高药用价值。本试验考察了不同溶剂、不同提取方法提取槲皮素，并尝试不同展开剂比较，最终确定了用于三白草中槲皮素的简捷、快速、分离效果好的薄层色谱鉴别方案，为三白草的质量控制提供了可靠依据。

1 仪器与材料

三白草 (中国生物制品检定所提供);槲皮素对照品(中国生物制品检定所，批号:100081－200907);电子天平 (梅特勒－托利多仪器上海有限公司，AL204);超声波清洗机 (昆山检测仪器厂，KA－500B);硅胶G薄层色谱板 (青岛海洋化工厂);薄层分析仪 (瑞士华嘉机械有限公司，scanner 3);玻璃仪器均为天津玻璃仪器厂生产;试剂均为北京市化学试剂公司生产分析纯。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 供试品溶液制备

取三白草药材，过三号筛，取粉末1.5g，加甲醇:25%盐酸 (4:1)溶液30mL，超声处理60min，滤过，滤液加水20mL，振摇后，加乙酸乙酯振摇提取3次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加甲醇0.5mL，作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液制备

取槲皮素对照品适量，用甲醇溶解制成每1mL含0.2mg槲皮素的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 色谱方法

照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，分别吸取上述2种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸 (5∶4∶1)，用盐酸饱和后作为展开剂展开［3］，取出，晾干，分别在日光及365nm紫外光灯下检视。

2.2 结果

供试品色谱在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。点样量及TLC色谱图见图1、图2。最终确定对照品溶液点样量为2μL，样品溶液点样量为4μL时效果最佳。《中国药典》2010年版未对三白草中槲皮素的鉴定进行记载，本文方法方便、快捷，斑点清晰、丰富，分离效果佳，可作为三白草中槲皮素的鉴别方法。

3 讨论

3.1 提取方法的比较

本试验尝试了多种提取方法，并进行比较:①以甲醇为溶剂超声处理60min，滤过，滤液浓缩。②以甲醇为溶剂超声处理20min，滤过，滤液浓缩，过中性氧化铝柱，用甲醇洗脱，蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解。③以80%甲醇为溶剂，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，加水，用乙醚提取，乙醚层蒸干，加甲醇使溶解。④以乙醇为溶剂超声处理60min，滤过，滤液浓缩。⑤以甲醇:25%盐酸(4:1)溶液为溶剂，超声处理60min，滤过，滤液加水20mL，振摇后，加乙酸乙酯振摇提取3次，合并乙酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解。比较上述五种提取方法，以方法⑤所得色谱图斑点清晰，指纹斑点最丰富，且色素斑点较少。

3.2 展开剂的比较

试验用不同展开剂展开，对结果进行比较:①以石油醚 (60～90℃):丙酮 (5:2)为展开剂展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热。②甲苯:乙酸乙酯:甲酸 (5:2:1)上层溶液为展开剂展开，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，365nm下检视。③以正己烷:乙酸乙酯:甲酸 (7:5:0.8)为展开剂展开，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，105℃加热，分别置日光和紫外光365nm下检视。④以甲苯－乙酸乙酯－甲酸 (5:4:1)为展开剂，在盐酸饱和下展开，分别在日光及365nm紫外光灯下检视。比较上述四种展开剂的展开结果，以方法④的分离效果最佳。除此，试验还曾用方法④同时分离槲皮素与山柰素两种黄酮类对照品溶液，分离效果佳，TLC色谱图见图3，由于三白草中未提取出山柰素成分，故未作深入研究。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典，一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:12.

［2］俞一心，戈升荣，王桂珍.槲皮素及其衍生物的药理作用研究进展［J］.中药材，2003，26(l2):902.

［3］王祥培，许士娜，吴红梅等.天胡荽药材中槲皮素的薄层鉴别与含量测定［J］.时珍国医国药2010，21(1):44.