藕节炭的TLC鉴别和浸出物含量测定Δ

刘善新，靳光乾，郭承军，刘欣欣（.山东省中医药研究院，济南市 5004；.山东中医药大学，济南市 50355）

藕节为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥根茎节部，具有止血、祛瘀的作用，用于治疗吐血、咳血、尿血、衄血、崩漏。2005年版《中国药典》（一部）记载藕节的加工炮制方法为加工制成藕节炭，但藕节炭的质量标准比较简单，仅有加工程度描述，缺乏鉴别、浸出物、含量测定等项[1]。为此，笔者对不同地区市售藕节炭的鉴别及浸出物进行了研究，旨在为制定藕节炭的质量标准提供参考依据。

1 仪器与试药

BP211D型电子天平（德国Sartorius公司）。3-表白桦脂酸标准品（笔者从藕节炭中提取分离制得，纯度：98.57%）；β-谷甾醇对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号：110851-200202）；乙酸乙酯、乙醇等试剂均为分析纯。藕节炭为购于全国不同地区的市售品，粉碎过50目筛，备用；生藕节购于济南建联药材公司，经山东中医药研究院钟方晓研究员鉴定为真品，炒制成藕节炭，粉碎过50目筛，备用。

2 方法与结果

2.1 藕节炭鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备：取各地市售藕节炭样品1.0 g，分别加入乙酸乙酯50 mL，回流提取0.5 h，过滤，滤液浓缩至约2 mL，转移至5 mL量瓶中，以乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 标准、对照品溶液的制备：（1）3-表白桦脂酸标准品溶液的制备：称取3-表白桦脂酸标准品4.21 mg，置2 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，制成每1 mL含2.11 mg的3-表白桦脂酸标准品溶液。（2）β-谷甾醇对照品溶液的制备：称取β-谷甾醇对照品2.46 mg，置2 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，制成每1 mL含1.23 mg的β-谷甾醇对照品溶液。

2.1.3 薄层层析：照薄层色谱（TLC）法[1]试验。精密吸取供试品溶液、3-表白桦脂酸标准品溶液各5µL，分别点于同一以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，以10%硫酸乙醇喷雾，105℃加热显色至斑点清晰，自然光下检视，供试品色谱中在与标准品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；365 nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与标准品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。所得TLC见图1。

精密吸取供试品溶液、3-表白桦脂酸标准品溶液、β-谷甾醇对照品溶液各5µL，分别点于同一以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（8∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，以10%硫酸乙醇喷雾，105℃加热显色至斑点清晰，自然光下检视，供试品色谱中在与标准、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；365 nm紫外光灯下检视，供试品色谱中在与标准、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。所得TLC见图2。

2.2 浸出物测定

2.2.1 提取溶剂乙醇百分数的确定：取自制藕节炭样品2.0 g，精密称定，分别精密加入95%、85%、75%、65%、55%乙醇50 mL，按2005年版《中国药典》（一部）浸出物测定法项下热浸法[1]操作，结果见表1。

图1 藕节炭的TLC（以3-表白桦脂酸为对照）Fig 1 TLC of charred N.nucifera（3-epibetulinic as reference substance）

图2 藕节炭的TLC（以3-表白桦脂酸、β-谷甾醇为对照）Fig 2 TLC of charred N.nucifera（3-epibetulinic and β-sitosterol as reference substance）

表1 不同浓度乙醇浸出物测定结果（n＝3）Tab 1 Result of determination of the extract under different alcohol concentration（n＝3）

由表1可见，55%乙醇不易过滤，95%、85%、75%乙醇虽然易于过滤，但其对应的浸出物含量偏低。结合藕节炭活性部位筛选情况，确定采用65%乙醇作为溶剂进行浸出物测定。

2.2.2 浸出物含量测定：取各地市售藕节炭样品2.0 g，精密称定，分别加入65%乙醇50 mL，按2005年版《中国药典》（一部）浸出物测定法项下热浸法[1]操作，测定各地藕节炭的浸出物含量，结果见表2。

表2 藕节炭浸出物含量测定结果Tab 2 Determination of the extract of charred N.nucifera

3 讨论

文献报道生藕节中含有3-表白桦脂酸[2]。目前，藕节、藕节炭止血有效成分尚不明确。笔者从藕节炭的乙酸乙酯提取部位中分离出3-表白桦脂酸、β-谷甾醇，并以3-表白桦脂酸、β-谷甾醇为对照鉴别藕节炭。结果表明，9个市售藕节炭样品在与标准、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，而福州藕节炭斑点不明显，扩大点样量斑点亦不清晰；这是否与加工工艺有关有待研究，因为其它藕节炭样品均为原药材直接炒制而成，而福州藕节炭为藕节切成片状后的加工品。

对自制藕节炭样品采用毛细管凝血法进行止血活性部位筛选，结果乙酸乙酯、水提取物部位均具有止血活性。笔者在试验中曾拟以乙酸乙酯、水为溶剂，取藕节炭2.0 g，按2005年版《中国药典》（一部）浸出物测定法项下热浸法[1]操作，分别测定藕节炭的乙酸乙酯、水浸出物。结果，乙酸乙酯浸出物含量太低，测定误差较大；水浸出物测定时过滤困难，不便于操作。因此，考察了系列乙醇百分数为溶媒，其浸出物的测定过程及结果，最后采用65%乙醇为溶剂测定藕节炭的浸出物。

测定结果表明，不同市售地藕节炭65%乙醇浸出物含量差异较大，为10.91%～20.88%。

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：264～265，附录38、56.

[2]周军平，王爱兰，潘仁满.藕节中3-表白桦脂酸的分离与鉴定[J].同济医科大学学报，1995，24（1）：52.