沉香化滞丸质量标准研究

郭巧技，肖丽和，熊 英（深圳市药品检验所，深圳市 518029）

沉香化滞丸为沉香、牵牛子、枳实等15味药材组成的成方制剂[1]，具有理气化滞的功效，用于由饮食停滞引起的胸膈胀满、消化不良、吞酸嘈杂、腹中胀满。原标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂》（第九册）[1]，但仅收载了丸剂的通则检查。为了提高中成药的检测标准，本研究增加木香、香附、山楂、大黄、厚朴、牵牛子的薄层色谱（TLC）鉴别及橙皮苷的高效液相色谱（HPLC）含量测定。

1 材料

1.1 仪器

P680A型HPLC仪、PDA-100型检测器（美国戴安公司）；CP224S型电子天平（德国Sartorias公司）；XS205型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；AS20500A型超声波清洗仪（天津奥特恩斯仪器有限公司，功率500 W，频率40 kHz）。

1.2 试药

去氢木香内酯（批号：1525-200001）、木香烃内酯（批号：1524-200101）、α-香附酮（批号：748-200406）、熊果酸（批号：110742-200314）、大黄酚(批号：0796-200311)、大黄酸（批号：0757-9703）、大黄素（批号：10756-200110）、厚朴酚（批号：0709-200006）、咖啡酸（批号 ：0885-200102）、橙 皮苷（721-200211）对照品及木香（批号：120921-200405）、香附（批号：1059-9801）、山楂（批号：121138-200403）、大黄（批号：120902-200408）对照药材均由中国药品生物制品检定所提供；沉香化滞丸（批号：060801、060802、060803，规格：每袋6 g）由甘肃省河西制药有限公司提供，处方中的15味中药由河北安国药业集团有限公司提供；水为超纯水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 木香、香附、山楂的鉴别 （1）供试品溶液的制备：取本品6 g，研细，加乙醚30 mL，超声处理20 min，滤过，滤渣备用，滤液挥干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。（2）对照品溶液的制备：取去氢木香内酯、木香烃内酯、α-香附酮、熊果酸对照品，分别加无水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。（3）对照药材溶液的制备：取木香对照药材0.2 g，香附、山楂对照药材各0.5 g，同法制成对照药材溶液。（4）阴性对照溶液的制备：按处方及制法，分别制成缺木香、香附、山楂的阴性样品，取相当于样品的量，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。（5）木香的TLC测定：吸取上述相应溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视（见图1）。（6）香附的TLC测定：吸取上述相应溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上使成条状，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，日光下检视（见图2）。（7）山楂的TLC测定：吸取上述相应溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视（见图3）。

2.1.2 大黄、厚朴、牵牛子的鉴别 （1）供试品溶液的制备：取“2.1.1（1）”项下的备用药渣，挥干，加甲醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。（2）对照品溶液的制备：取大黄酚、大黄酸、大黄素、厚朴酚、咖啡酸对照品，分别加无水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。（3）对照药材溶液的制备：取大黄对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。（4）阴性对照溶液的制备：按处方及制法，分别制成缺大黄、厚朴、牵牛子的阴性样品，取相当于样品的量，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。（5）大黄、厚朴的TLC测定：吸取上述相应溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视（鉴别大黄，见图4A）。再喷以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视（鉴别厚朴，见图4B）。（6）牵牛子的TLC测定：吸取上述4种溶液各6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上使成条状，以二氯甲烷-甲醇-甲酸（100∶9∶4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸无水乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视（见图5）。

图1 木香的TLCFig 1 TLC ofA.lappa

图2 香附的TLCFig 2 TLC of C.rotun

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Shim-Pack CLC-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（21∶79）；检测波长：283 nm。理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000。

2.2.2 对照品溶液的制备 取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备[2]取本品适量，研细，取约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称重，置水浴上加热回流1 h，取出，放冷，再称重，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取不同浓度的橙皮苷对照品溶液各10µL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝344.37X－1.553 4（r＝0.999 4）。结果表明，橙皮苷对照品浓度在0.024 2～0.483 2 mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.5 专属性考察 精密吸取橙皮苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10µL，分别注入液相色谱仪，按含量测定方法测定。结果，阴性对照溶液对试验无干扰。色谱见图6。

图3 山楂的TLCFig 3 TLC of C.pinnati fida

图4 大黄、厚朴的TLCFig 4 TLC of R.palmatum and M.officinalis

2.2.6 重复性试验 取同一批样品6份，按含量测定方法测定。结果，橙皮苷平均含量为15.4 mg·g-1，RSD＝0.8%，表明方法重复性良好。

2.2.7 加样回收率试验 取同一批已知含量的样品6份，分别精密加入一定量的橙皮苷对照品，按含量测定方法测定，结果见表1。

2.2.8 稳定性试验 取同一份供试品溶液，自制备后按含量测定方法分别于 0、2、5、9、11 h 进样测定。结果，橙皮苷峰面积的RSD＝0.7%，表明供试品溶液自制备后11 h内基本稳定。

2.2.9 样品含量测定 取本品3批，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，结果见表2。

图5 牵牛子的TLCFig 5 TLC of P.nil

3 讨论

笔者采用TLC法对木香、香附、山楂、大黄、厚朴和牵牛子进行定性鉴别，结果表明阴性对照无干扰、专属性强，色谱清晰，特征斑点分离良好，斑点无拖尾现象，可以作为制剂定性鉴别的指标。笔者还考察了不同色谱条件下莪术、三菱的TLC，结果均存在阴性干扰，因此未收载莪术、三菱的TLC鉴别。

图6 高效液相色谱图Fig 6 HPLC chromatogram

表1 橙皮苷的加样回收率试验结果Tab 1 Results of recovery test of hesperidin

表2 样品含量测定结果（n＝4）Tab 2Results of content determination（n＝4）

香附的TLC鉴别试验过程中，考虑到α-香附酮具有挥发性，因此供试品溶液的制备过程中经乙醚超声处理的时间不宜过长，20 min即可，且滤过后滤液应室温挥干。试验过程中还发现，若点状点样，供试品溶液中α-香附酮的斑点较为扩散，不易于观察；尤其是喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，需要观察斑点是否渐变为橙红色时，则更加难以准确判断。因此，确定加大点样量，且必须条状点样。

笔者曾分别考察超声和加热回流2种提取方式，提取时间考察了30、45、60、90 min。结果显示，加热回流60 min的提取效率最高。

在流动相方面，笔者考察了甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）[3]，分离效果不好；改用乙腈-水（21∶79），供试品色谱中橙皮苷峰与其它色谱峰能达到基线分离，保留时间适中，理论塔板数为6 727。

综上，所建标准可用于沉香化滞丸的质量控制。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂（第九册）[S].1995：87.

[2]钱 妍，赵春景.反相高效液相色谱法测定胃舒颗粒中橙皮苷的含量[J].中国药房，2005，16（2）：140.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：132．