细叶桉叶超临界CO2萃取挥发油的GC-MS分析Δ

周燕园，朱小勇，钟振国，贺海东（广西中医学院，南宁市 530001）

细叶桉又名小叶桉、柳叶桉[1]、褐桉树[2]、羊草果树[3]。细叶桉叶为桃金娘科桉属植物细叶桉Eucalyptus tereticornis Smith.的叶。原产澳大利亚，我国福建、广东、广西有栽培[4，5]。细叶桉叶味辛，微苦，性平，具有宣肺发表、理气活血、解毒杀虫之功效，用于治疗感冒发热、咳喘痰嗽、脘腹胀痛、泻痢、钩端螺旋体病、跌打损伤、疮疡、丹毒、乳痈、疥疮、癣痒等病[3]。现代研究表明细叶桉叶挥发油具有较强的抑菌活性[6]。超临界流体萃取（Supercritical fluid extraction，SFE）技术是近年来迅速发展被人们所认知的一种新型“绿色分离”技术。超临界流体兼有液体和气体双重特性，密度与液体相近，渗透性好，扩散系数为液体的10～100倍，故能对多种物质进行溶解和浸取，减压后溶解能力又大大降低，整个过程兼具提取和蒸馏双重作用。因此，SFE技术应用于天然产物方面的研究日趋活跃[7，8]。目前，国内、外对SFE-CO2法提取细叶桉叶挥发油成分的研究尚未见报道。本试验利用SFE-CO2技术提取广西细叶桉叶中挥发油成分，应用气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术分析提取物成分，为细叶桉叶的进一步开发利用提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器

5973N-6890型GC-MS联用仪（美国Agilent公司）；HL-（5+1）/50MPa-ⅡAQ型SFE-CO2仪（杭州华黎公司）；LG16-W型高速微量离心机（北京医用离心机厂）。

1.2 试药

乙醚（分析纯，北京化工厂）；无水硫酸钠（分析纯，上海化学试剂公司）；CO2（纯度≥99.5%，广西南宁蓝天医用气体有限责任公司）。细叶桉叶采自广西南宁市高峰林场，经广西中医学院刘寿养副教授鉴定为桃金娘科植物细叶桉E.tereticornis Smith.的叶，样品经自然阴干后备用，标本存于广西中医学院药学中心实验室。

2 方法与结果

2.1 细叶桉叶萃取方法及条件

取细叶桉叶适量，粉碎，过10目筛，取120 g，采用SFECO2技术萃取挥发油等成分。本试验以挥发油得率为指标，考察不同萃取釜、分离釜1、分离釜2的压力和温度，萃取时间，CO2流量对挥发油得率的影响，比较最佳萃取条件。最终筛选并确定SFE-CO2法萃取细叶桉叶挥发油的最优化工艺条件：萃取釜压力28 MPa（温度51℃），分离釜1压力5.5 MPa（温度40 ℃），分离釜2压力7 MPa（温度30 ℃），CO2流量9.0 kg·h-1，萃取时间100 min。从分离釜收集得棕黄色萃取物共0.69 g，得率0.58%。取适量萃取物，加重蒸乙醚溶解并稀释10倍，用无水硫酸钠除去水分，离心后取上清液1 μL注入GC-MS联用仪进行分析。

2.2 细叶桉叶萃取物GC-MS分析

2.2.1 GC条件 色谱柱：HP-5MS毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；程序升温：初始温度70℃保持3 min，以3 ℃·min-1升至85℃，保持5 min，再以3℃·min-1升至135℃，保持5 min，以5℃·min-1升至160℃，保持1 min，最后升温至260℃，溶剂延迟3.0 min；进样口温度：250℃；载气：高纯氦；载气流量：1.0 mL·min-1；进样量：1 μL；无分流比。

2.2.2 MS条件 接口温度：280℃；电离方式：EI；电子能量：70 eV；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；倍增器电压：1247 V；扫描范围：45～550 amu；扫描间歇：2.94 次·s-1。

2.2.3 细叶桉叶萃取物分析 经GC-MS分析后得到总离子流图，见图1。

图1 细叶桉叶挥发油总离子流图Fig 1 Total ions current chromatogram of E.tereticornis

对总离子流图中的各峰经MS扫描后得MS图，经NIST02/WILEY275标准谱图库进行检索，人工谱图解析，并查对有关资料，从基峰相对丰度等几个方面进行比较，从而确定出细叶桉叶挥发油中的化学成分；再按照峰面积归一化法计算各成分的相对含量。结果，共鉴定出28个化合物，占色谱峰总面积的88.13%，其中以桉油精（33.99%）、冰片（8.88%）、α-蒎烯（5.39%）、石竹烯（4.51%）、（+）-4-蒈烯（4.19%）为主。SFE-CO2法萃取细叶桉叶挥发油的化学成分分析结果见表1。

3 讨论

在本文试验条件下，采用SFE-CO2技术所得萃取物主要为单萜和倍半萜类化合物及其衍生物。这些萜类化合物具有止血、抗炎、止痛、消肿、健胃、清热、解毒等多种功效，这与细叶桉叶的药效基本一致；而且其多数具有较强的香气和生物活性，是医药、食品、化妆品工业的重要原料。尤其是单环单萜类化合物桉油精（33.99%），含量高，且萃取时间短。可见，SFE技术适合广西细叶桉叶中桉油精的提取，该法具有提取率高、产品纯度好、流程简单、工艺稳定、耗能低、无有机溶剂残留的特点。

表1 SFE-CO2萃取细叶桉叶挥发油的化学成分分析结果Tab 1 Component analysis of essential oil extracted with supercritical CO2from E.tereticornis

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（第五册）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：638.

[2]江苏新医学院.中药大辞典（上册）[M].上海：上海科学技术出版社，1977：1482.

[3]《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编（下）[M].北京：人民卫生出版社，1978：753.

[4]中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴（第二册）[M].北京：科学出版社，1972：998.

[5]刘玉明，李素芳，吴玉田.桉属药用植物资源调查[J].中草药，2003，34（10）：957.

[6]叶 舟.林木精油对几种植物病原菌抑制作用的初步研究[J].江西农业大学学报，2007，29（6）：928.

[7]弥 宏，曲莉莉，任玉林，等.超临界萃取中药白芷的化学成分的气相色谱-质谱分析[J].分析化学，2005，33（3）：366.

[8]陈振德，李澎灏，谢 立，等.超临界CO2流体萃取榧树假种皮挥发油化学成分的研究[J].中国药房，2003，14（9）：525.