硫酸软骨素双酶法生产新工艺

刘宪锋，王 贞，李稳强

（华懋双汇实业〈集团〉有限公司生物化学制药厂，河南 漯河 462000）

硫酸软骨素（chondroitin sulfate，CHS）是一类动物性黏多糖，由动物喉骨、鼻软骨、气管或骨腱、韧带等含硫酸软骨素的软骨组织制取而成。在软骨中，硫酸软骨素与蛋白质（如胶原蛋白）结合在一起，以蛋白多糖的形式存在[1]。现行硫酸软骨素生产工艺大部分是先碱解，然后用胰脏（胰酶）和碱性蛋白酶进行酶解，最终使硫酸软骨素从蛋白多糖中释放出来。但碱提过程中会使提取液颜色加深，后期除蛋白困难，严重影响产品色泽和质量，需要在后道工序进行氧化脱色处理。笔者采用双酶法新工艺，通过引入新型复合蛋白酶，去掉碱提、氧化步骤，显著缩短了生产周期，在保证产品质量基础上降低了物料消耗，简化了操作，使得新工艺更稳定。现报道如下。

1 仪器与试药

702光度滴定仪（瑞士万通公司）；TU－1901型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）。新鲜冷冻猪喉软骨（双汇集团股份屠宰厂）。复合蛋白酶（天津诺奥科技公司）；碱性蛋白酶（北京东华强盛公司）；乙醇（食用级）；氢氧化钠（食用级）；盐酸（食用级）；硫酸软骨素标准品（美国Sigma公司）；其他试剂均为国产分析纯。

2 方法与结果

2.1 制备工艺

现行工艺：见图1。

图1 硫酸软骨素现行制备工艺流程图

双酶法新工艺：见图2。

图2 硫酸软骨素双酶法新工艺流程图

2.2 理化分析

澄清度和蛋白质均参照美国药典31版测定。硫酸软骨素含量参照美国药典31版硫酸软骨素钠盐项下的氯化十六烷吡啶（cetylpyridinium chloride，CPC）测定法测定。结果见表1。生产同期与投入辅助用量比较结果见表2。

3 讨论

按照上述2种工艺生产的产品，澄清度和蛋白质均合格，而双酶法新工艺在指标上要优于现行工艺。这与复合蛋白酶自身的特点有关，其酶系中主要含有胶原蛋白酶，同时含有脂肪酶、糖元酶、核酸酶等，在硫酸软骨素提取过程中能彻底水解胶原蛋白、脂肪和糖元。

表1 2种硫酸软骨素工艺产品理化分析结果

表2 2种硫酸软骨素工艺生产周期和投入辅料比较结果

按照上述2种工艺生产的产品，硫酸软骨素含量均超过了90％。双酶法新工艺虽然去掉碱提这一步，但由于引进新型复合酶，在两种酶的合理使用上进行了改进，有着同样的结果。

双酶法新工艺在生产周期上，每批缩短14h，在实际生产中有着重要意义，在同样的厂房和设备下，能够增加批次，提高产量。在生产用辅料上，每批可节省氢氧化钠90 kg、盐酸324 L、双氧水50 L，具有降低成本，提高产品市场竞争力的现实意义。

双酶法新工艺具有操作方便、易控制等特点，且提取条件范围广（pH为6.5～9.0，温度50～56℃），反应温和，过滤速度快，工艺操作方便，易于控制。

[1]奚 俊，张有森.对硫酸软骨素传统提取方法的改进[J].生物学杂志，2000，17（6）：33－34.