调宁蛋白表达水平与慢性乙型肝炎患者肝脏微循环障碍的关系

2010-03-14 11:27代雪枫严家春李峻峰徐长江袁苏娜
实用肝脏病杂志 2010年2期
关键词:毛细血管小叶肌纤维

代雪枫 严家春 李峻峰 徐长江 袁苏娜

调宁蛋白(Calponin,CaP)是平滑肌所特有的重要调控蛋白。研究显示,它具有调节平滑肌收缩、抑制细胞增殖及参与细胞骨架的维持等作用[1~3]。慢性乙型肝炎(CHB)的一个重要病理变化就是肝脏微循环障碍。基于肝脏组织血液供应的特殊性,有必要对CaP在CHB患者肝脏血管改建中的作用进行研究。我们对200例CHB患者肝活检组织进行了CaP检测,以探讨它们之间的关系。

材料与方法

一、材料与分组 收集2004年1月至2007年12月我院200例CHB肝活检组织,男143例,女57例,年龄15~57岁(平均年龄29.5±8.5岁)。按照国内诊断标准[4],包括 CHB 轻度(G1~G2)、CHB 中度(G3)和CHB重度(G4)及肝硬化(LC)各50例。经免疫组化检测,患者肝组织HBsAg皆阳性。另选10例肝组织HBsAg阴性,肝组织学大致正常者作对照。

二、肝组织学检查 采用16号肝活检针抽取2条肝组织,其长度≥1.5cm。其中一份用10%福尔马林固定,常规制片,备HE及免疫组化染色;另一份按照电镜技术制样,备电镜观察。根据肝窦Ⅳ型胶原分布范围,将肝窦毛细血管化定为轻(占肝小叶≥1%)、中(占肝小叶≥33%)、重型(占肝小叶或假小叶≥60%)。

三、肝组织CaP免疫组化检测 采用S-P法检测肝组织CaP的表达。抗CaP单克隆抗体及免疫组化试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。判断标准:阴性(-):无明显阳性细胞;阳性(+):显棕黄色,肝细胞质膜散在表达,肝窦及毛细血管灶性或断续表达,其表达范围均占所观察视野的10%~30%;强阳性(++):显深棕黄色或黄褐色,肝细胞、肝窦壁内皮细胞、胆管细胞、成肌纤维细胞、血管纤维间隔及炎症区的梭形细胞等均有表达,表达范围占所观察视野的30%以上。

四、统计学处理 数据采用x2检验,P<0.05认为有显著性差异。

结 果

一、调宁蛋白在CHB肝组织的定位 在对照组,CaP仅在汇管区的血管及胆管壁有弱表达,其余肝组织无表达;而在CHB组,CaP在肝实质及肝间质细胞均有表达。在CHB肝组织,CaP表达主要分布于肝细胞(图1)、小胆管或胆管样细胞(图2)、肝窦壁内皮细胞(图3)、肌纤维带(图4)、毛细血管增生区域(图5)、贮脂细胞及成肌纤维细胞(图6)。免疫组化染色提示,CaP表达变化有以下特点:A:有肝窦扩张或阻塞的内皮细胞及贮脂细胞示阳性表达,纤维带内的小血管及其周边的肝细胞、炎症区域周围的肝细胞、假小叶的肝细胞则示强阳性表达;B:纤维瘢痕组织中的胆管或胆管样细胞及成肌纤维细胞示阳性表达;C:肝窦毛细血管化及肝窦扩张的内皮细胞、增生的血管内皮细胞及其肌纤维带则示强阳性表达(图4);D:异型增生的肝细胞示阳性表达(图7)。

图1 肝细胞CaP强阳性(SP×400)

图2 胆管细胞CaP阳性(SP×400)

图3 肝窦及血管内细胞CaP表达(SP×400)

图4 肌纤维束CaP表达(SP×400)

图5 毛细血管增生区CaP表达(SP×400)

图6 贮脂及成肌纤维细胞CaP表达(SP×400)

图7 异型增生肝细胞CaP表达(SP×400)

二、调宁蛋白表达与CHB肝内病变的关系 本组资料提示,CaP表达与CHB肝内病变的轻重程度有关:在CHB轻度组,少数病例(24%)肝组织CaP表达,与对照组相似,且强阳性表达少见(6%);而在CHB重度组,肝组织中CaP表达阳性占33%,强阳性占67%(P<0.01);在LC组,除假小叶内的肝细胞CaP示弥漫性强阳性表达外,纤维组织内的小胆管上皮细胞、扩张的毛细血管内皮细胞、成肌纤维细胞及平滑肌纤维带(图4)皆表达上调,与上述组间有极显著性差异(P<0.01)。肝组织CaP表达及组织定位与CHB肝内病变的关系见表1。

表1 CaP在肝组织的表达变化及定位

三、调宁蛋白表达与肝窦毛细血管化的关系 本组伴肝窦毛细血管化者161例(81%)。资料显示,在CHB重度肝组织同时发生肝窦闭塞及扩张改变,肝窦毛细血管化病变也较重,CaP表达范围广,显色深;而在CHB轻度组,则肝细胞示浊肿,肝窦狭窄多见,肝窦扩张罕见,肝窦毛细血管化也较轻,CaP表达范围小,显色弱,提示CaP表达变化与肝窦毛细血管化的轻重程度同步(表2)。

表2 调宁蛋白表达与CHB肝窦毛细血管化的关系

讨 论

本研究发现,①CaP在对照组肝组织定位于血管及胆管,其余组织无表达;②在CHB肝组织,则肝细胞、贮脂细胞、成肌纤维细胞、肝窦内皮及毛细血管化的内皮细胞、小胆管上皮细胞、平滑肌纤维带等组织均有CaP表达;③CaP表达随CHB肝组织的变性坏死、炎细胞浸润程度的加重而表达上调;④伴随肝窦扩张、血管增生、肝窦毛细血管化及纤维化,CaP强阳性表达率增加,提示CaP表达调节受CHB肝脏微循环障碍状态的影响。

CaP主要生理功能是调节平滑肌的收缩和舒张[5,6]。正常生理情况下,平滑肌受到外界刺激时,通过Ca2和磷脂激活蛋白激酶C,导致CaP磷酸化,不再抑制肌球蛋白ATP酶活性,平滑肌收缩;反之则平滑肌舒张[7,8]。本研究发现,CaP表达变化与CHB肝微循环障碍有关。资料显示,在肝内病变较轻时,汇管区血管炎症虽较明显,但血管破坏及阻塞的范围较局限,肝界板完整或轻微破坏,肝细胞水肿及肝窦狭窄是局限的,中央静脉完整,表明其有局限性血供输入不良。而在肝内病变较重时,不仅肝实质伴随显著的血管增生及肝窦毛细血管化,而且这些增生的血管可形成汇管与汇管、汇管与中央静脉甚至跨小叶连通,即构成所谓的桥形坏死或纤维化,导致肝小叶严重紊乱,在LC组肝细胞被血管间隔分隔为大小不同的团块(假小叶),因其无中央静脉,加之肝细胞水肿引起肝窦闭塞,故导致肝小叶血液输入和输出障碍。在这样的病理状况下,可能反馈地引起CaP合成分泌增加,也可能引起Ca2+的变化,以改变ATP酶活性方式使CaP磷酸化或脱磷酸化,加速肝组织血液的输入和输出,以调整不利的病理环境。

本资料证实,CaP在CHB肝组织合成分泌是增加的。CaP分泌上调应增强血管的收缩[9,10],这与CHB轻度组肝窦闭锁,毛细血管化的血管多闭合较一致。然而,在本组肝病重度组,CaP在肝组织表达虽然增加,但多数肝窦及血管则示扩张改变。我们认为,肝窦及血管扩张表明肝内压力增加,系门脉高压所致,而CaP除了可启动肌球蛋白轻链磷酸化,促进肌动蛋白与肌球蛋白结合及ATP酶活性,增加肌丝滑行及平滑肌收缩外[11,12],尚有抑制ATP酶活性,减少肌动蛋白运动的功能,从而使平滑肌舒张,在门脉高压下而引起肝窦毛细血管扩张。

[1]高炬,方邦江,朱培庭,等.调宁蛋白在胆固醇结石形成中的表达及养肝柔肝中药的干预作用[J].上海中医药大学学报,2008,22(3):55-57.

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