一种经济可行的鉴定葡萄球菌的方法

许渊

(上海市闸北区彭浦新村街道社区卫生服务中心检验科 上海 200435)

葡萄球菌是引起人类各种感染的常见病原菌之一。以往只认为金黄色葡萄球菌是致病的,而其它凝固酶阴性的葡萄球菌(coaglualase negative Staphylococcus CNS)是人类及动物皮肤与粘膜上正常菌群之一。但近年来这些葡萄球菌又成为尿路感染,菌血症或败血症,心瓣膜修复术、长期流动性腹膜析等重要医源性感染的病原菌[1～5]。因此,有必要对所有的葡萄球菌都进行准确的鉴定。鉴定葡萄球菌的方法较多,目前应用较多的是Kloos 1982和1985年[7～8]提出的方案生产的各种试剂盒,但进口试剂盒价格昂贵,鉴定值也不算高,给病人加重了负担。因此,本文为寻找一种价格远低于进口试剂盒,而鉴定值又比较高的适合我国国情的简单快速的方法进行了尝试,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 菌株来源

我们挑选了中山医院近期临床分离出的93株的葡萄球菌及上海市第一人民医院提供的由Vitek鉴定出的5株菌。

1.2 方法

根据Manual of Cl inical Microbiology1995年版上提供的鉴定葡萄球菌的试验,再结合API、Vitek等我们从中挑选了针对性和特异性较高的20种反应,制成微量生化反应板条,同时用氧化酶、葡萄糖发酵、触酶、凝固酶、菌落色素、溶血情况为补充试验。

表1 试验方法的生化反应

表2 98株菌的鉴定值分布

表3 试验结果

表4 试验方法与API的比较结果

上表中(表1),1～2及23～26不放在板条上,分开做,3～22一共20种反应按照一定配方配制后,加入20孔的塑料板条,每孔100uL,冰冻保存。使用时,每孔加入浓度相当于0.5McFar land的待测菌悬液100uL,其中精氨酸、鸟氨酸、尿素滴加石蜡油以提供厌氧环境,放入35℃温箱18～24h后即可读结果。其中VP与硝酸盐还原需滴加试剂后10min内读结果。板条上20孔的反应结果与氧化酶、葡萄糖发酵、及凝固酶触酶、色素、溶血得到一个9位号码,(氧化酶和葡萄糖发酵组成一个号码,其它24个反应每3个组成一个号码),将号码输入已设计的软件中,即可得到鉴定结果及其鉴定值。

1.3 比较试验

挑选出其中的20株菌,同时做现在临床应用较多API Staph。

2 结果

我们对98株菌鉴定出的结果,发现其中60.7%的菌株鉴定值>80%,但也有11.8的菌株鉴定值较低<60%。鉴定值特别低的菌株多为一些较少分离出的菌株,如海葡萄球菌,中间型葡萄球菌等,可能为非对人致病菌,详见表2。

对其中25株鉴定值较高的菌株API作对照的结果详见表2,表4。

从上面的结果对比可看出,该方法对金葡,表葡的鉴定值比较高,与API的一致性也较高(金黄色葡萄球菌的一致性可达100%,表皮葡萄球菌也达到了85.7%,因为其中有1株表皮葡萄球菌API没有鉴定出来)。但对其它CNS的鉴定值比较低,与API的一致性也只有50%。

3 讨论

从以上试验结果可看出,我们所正在研究的方法与API 对20株葡萄球菌的鉴定一致性达到了80%,金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌还要高。从中也可以发现API Staph仍然对一部分葡萄球菌未能鉴定出结果来。相信经过不断的摸索与改进,该方法一定能够更加成熟与完善,能够造福于更多的病人。

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