高效液相色谱法同时测定乳及乳制品中防腐剂和甜味剂

王淼，黄晓林

（东北农业大学 黑龙江省乳品工业技术开发中心，黑龙江 哈尔滨 150086）

高效液相色谱法同时测定乳及乳制品中防腐剂和甜味剂

王淼，黄晓林

（东北农业大学 黑龙江省乳品工业技术开发中心，黑龙江 哈尔滨 150086）

建立了高效液相色谱法同时测定乳及乳制品中苯甲酸、山梨酸、安赛蜜和糖精钠的方法。通过加入适量沉淀剂除去样品中绝大部分蛋白质后，采用C18色谱柱，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，用紫外检测器于230 nm波长处检测。回收率在95.0%～103.0%，精密度（RSD）为1.70%～2.03%，检出限分别为1.5，1.5，1.5，2.5 μg/g。该方法可用于乳及乳制品中这4种添加剂的同时测定。

苯甲酸；山梨酸；安赛蜜；糖精钠；乳及乳制品

0 引 言

近年来,食品添加剂的使用越来越受到人们的重视，已经广泛的应用于食品加工业中，包括乳及乳制品。国家卫生部对防腐剂和甜味剂的加入量有严格规定[1]，也出台了相应的检测标准[2-4]。在市售的乳制产品中，尤其是调味奶、酸奶、乳饮料、冰激淋和雪糕中，同时添加了好几种添加剂，为了方便乳及乳制品中添加剂的日常监测，需要建立能够同时测定多种添加剂的快速简单的检测方法。已有文献报道有关检测的方法[5-7]，但方法的重复性差，灵敏度低，而且不适用于乳及乳制品中防腐剂和甜味剂的测定，不是针对乳及乳制品进行测定研究，满足不了对乳及乳制品中的苯甲酸、山梨酸、安赛蜜和糖精钠的同时检测。

本方法通过沉淀样品中的蛋白质和脂肪等干扰物质，合理的流动相配制和波长控制，一次分析可同时得到乳及乳制品中的苯甲酸、山梨酸、安赛蜜和糖精钠4种添加剂的检测结果，灵敏度高，重现性好。

1 实 验

1.1 仪器设备

Waters1525高效液相色谱仪配Waters2487紫外检测器,QL-901型振荡器。

1.2 材料试剂

苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准溶液（质量浓度1.000g/L）；安赛蜜标准物质（≥99%）；亚铁氰化钾水溶液（质量浓度109g/L）；乙酸锌水溶液（质量浓度219 g/L）；磷酸二氢钾水溶液（浓度0.05 mol/L，pH值为3.5）。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil-C18柱（250 mm×4.6mm，5 μm），柱温为20℃；检测器为紫外检测器；测定波长为230 nm；流动相：浓度为0.05 mol/L磷酸二氢钾水溶液+甲醇（95+5）；流速为1.0 mL/min。

1.3.2 样品处理

调味奶、酸奶和乳饮料：直接吸取20 mL移入150 mL三角瓶中称量；雪糕、冰激淋和乳粉：称量5.0000 g移入三角瓶中，加入40℃左右水20 mL溶解。然后向样品中加入5.0 mL亚铁氰化钾溶液，混匀，再加入5.0 mL乙酸锌溶液（如有色素,则加入聚酰胺粉约1 g,摇匀）,用振荡器振荡使其充分混匀后，洗入漏斗中过滤，用50 mL容量瓶收集滤液，用蒸馏水定容，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤,供分析测定。

1.3.3 定量测定

标样与加标样品测定的色谱如图1和图2所示。按照出峰的顺序，色谱峰依次为安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠。

2 结果与分析

2.1 波长的选择

通过二极管阵列检测器获得的光谱图，在190～400 nm范围内对分析物进行紫外波长扫描，结果发现,在流动相中4个组分的最大吸收波长分别是安赛蜜228 nm、糖精钠206 nm、苯甲酸226 nm、山梨酸256 nm,为兼顾各组分的灵敏度，故选择230 nm为检测波长。

2.2 流动相的优化

通过对不同流动相的试验研究，在满足分离效果，达到待测物质与杂质基本分离的条件下，应选择能改善待测物质的响应，提高灵敏度的流动相。经过实验，结果表明选甲醇作为流动相的组分时，待测物质的响应值和灵敏度比用乙腈为流动相的组分时高，而且对苯甲酸和山梨酸的洗脱能力强，分离效果好，在满足分离要求的条件下，能缩短分析时间。实验还考察了乙酸铵、硫酸铵和柠檬酸铵等溶液作为缓冲溶液时对分离测定的影响，结果显示，甲醇-磷酸二氢钾溶液的洗脱效果最好，分析时间最短，待测物质的响应值和灵敏度最高。

表2 方法的回收率（n=3）

通过试验改变流动相中缓冲溶液的浓度与pH值和组成比例对待测物质色谱峰和分离测定的影响，确定流动相的缓冲溶液的浓度与pH值和组成比例。当磷酸二氢钾的浓度为分别为0.01，0.02，0.05，0.10 mol/L时，对分离影响不大，但随着磷酸二氢钾浓度的增加，待测物质的出峰时间愈稳定，考虑到缓冲盐浓度增大，对色谱柱及系统管路造成的损害也会加大，所以选择浓度为0.05 mol/L的磷酸二氢钾作为缓冲溶液。

调节浓度为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液pH值分别为5.0、4.5、4.0、3.5、3.0,随着磷酸二氢钾溶液pH的降低，峰形越来越对称而且尖锐，重复性也越来越好，考虑到色谱柱的耐酸程度，调节浓度为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液pH值为3.5较为合适。

流动相配比对分离效果的影响实验结果表明：甲醇的体积分数大于20%时，山梨酸和糖精钠的色谱峰重叠，甲醇的体积分数为10%时,几种化合物均可实现基线分离,但检测样品时，糖精钠的色谱峰附近有杂质干扰。当甲醇的比例调整为5%，几种化合物均可实现完全分离，而且检测样品时，无杂质干扰。

2.3 沉淀剂的选用和用量

通过试验，用亚铁氰化钾和乙酸锌作复合沉淀剂，可除去样品中绝大部分蛋白质和脂肪，效果要比调节酸碱沉淀、加入碱和硫酸铜沉淀等其他方法好。但如果沉淀剂加入的少，蛋白沉淀不完全会影响过滤，加的过多会给测定带来干扰甚至会导致被测物的损失。经过试验确定了沉淀剂的用量，能保证初滤液能轻易通过微孔滤膜过滤，而且在进样测定时不给检测带来干扰和导致被测物的损失。

2.4 标准曲线和检出限

分别配制不同浓度的标准混合溶液，在最佳色谱条件下，进行了标准曲线的测定，4种化合物的回归方程及线性相关系数、线性范围，并以3倍信噪比时的进样浓度计算出了检出限见表1。

表1 线性关系与检出限

2.5 回收率实验

以同一个样品为实验材料，加入一定量的苯甲酸、山梨酸、安赛蜜和糖精钠标准溶液,进行加标实验，平行测定3次，以平均测定值计算回收率，结果见表2。

2.6 精密度实验

称取同一个空白样品，加入一定量的安赛蜜、苯甲酸、糖精钠和山梨酸标准溶液，进行实验，平行测定8次,计算测定值的相对标准偏差（RSD），结果如表3所示。由表3可以看出，测定结果的较为稳定，方法的重复性较好。

表3 方法的精密度

3 结 论

本文重点研究了流动相和沉淀剂及其用量对分析测定的影响，建立了高效液相色谱法同时测定乳及乳制品中苯甲酸、山梨酸、安赛蜜和糖精钠的方法。该方法测定结果重现性好，准确度高，简单易操作，适合乳及乳制品中防腐剂和甜味剂的日常检测。

[1]GB2760-2007食品添加剂使用卫生标准[S].北京：中国标准出版社,2007.

[2]GB/T23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定[S].北京：中国标准出版社,2009..

[3]GB/T21703-2008乳及乳制品中苯甲酸、山梨酸的测定[S].北京：中国标准出版社,2008.

[4]GB/T5009.140-2003饮料中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的测定[S].北京：中国标准出版社,2004.

[5]徐烨,李丽君,王乃芝，等.高效液相色谱法测定饮料中防腐剂和甜味剂[J].食品科学,2008,29（6）：339-341.

[6]刘泰然,赵海燕,张楠.反相高效液相色谱法测定食品中防腐剂和甜味剂[J].理化检验-化学分册,2008,44（3）：252-254.

[7]汪辉,曹小彦,陈利国，等.高效液相色谱法同时测定蜜饯中5种常见食品添加剂[J].分析试验室,2007,26（11）：119-122.

Simultaneous determination of Aseptic and sweeteners in milk and dairy products by high-performance liquid chromatography

WANG Miao,HUANG Xiao-lin
（National Dairy Testing Center,Northeast Agriculture University,Harbin 150086,China）

A method for Simultaneous determination of benzoic acid,sorbic acid,acesulfame,sodium saccharin in milk and dairy products by high-performance liquid chromatography（HPLC）was reported.Protein in milk and dairy products were mostly eliminated by the precipitators,and then separated on C18 column with a mixed solution of methanol-0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate as mobile phase,and detected at 230 nm with a ultraviolet detector.The recovery were 95.0%～103.0%,the relative standard deviations（RSD）were 1.70%～2.03%,the minimum detectable values were 1.5,1.5,1.5,2.5 μg/g.This method can be used for the routine analysis of these additives in milk and dairy products.

Benzoic acid;Sorbic acid;Acesulfame;Saccharin sodium;Milk and dairy products

TS252.7

A

1001-2230（2010）11-0041-02

2010-04-15

王淼（1981-），男，助理工程师，从事乳制品检测与研究。