HPLC法快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素B1

曹红，王浩

（国家食品质量安全监督检验中心，北京 100094）

HPLC法快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素B1

曹红，王浩

（国家食品质量安全监督检验中心，北京 100094）

建立了快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素B1的高效液相色谱测定法。采用Zorbax XDB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm i.d）反相色谱柱，以浓度为0.05 mol/L乙酸钠水溶液与甲醇比为65︰35（体积比，调pH值为4.5）为流动相，流速为1.0 mL/min，进样量20μL。方法定量限为0.5 mg/kg，加标回收率92.1%～103.8%，线性范围0.00～1.00 mg/L，相对标准偏差为4.34%。该法具有样品预处理简单,灵敏度高,分析时间短等优点,适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B1的快速测定。

高效液相色谱仪；婴幼儿配方奶粉；维生素B1

0 引 言

维生素B1又称硫胺素或抗神经炎素。由嘧啶环和噻唑环结合而成的一种B族维生素。其在体内的含量虽然很少，但在人体生长、代谢、发育过程中却发挥着重要的作用,因而成为婴儿配方奶粉的重要组成部分。

目前测定食品中维生素B1的方法主要有：荧光分光光度法、液相色谱法[1，2]。其中，婴儿配方奶粉中维生素B1的国标测定方法（GB/T5413.11-2010）为液相色谱法,该法样品需要在稀盐酸环境水解，酶解过夜，费时，回收率偏低。本文将样品经酸沉蛋白后直接用碱性铁氰化钾衍生，正定醇萃取，HPLC法进行直接测定,获得较满意的结果。

1 材料与方法

1.1 材料

仪器：Agilent1100型高效液相色谱仪，配置自动进样器，G1321A荧光检测器。

试剂：甲醇，冰醋酸，盐酸，氢氧化钠，乙酸钠，铁氰化钾。以上均为分析纯。维生素B1。

样品为婴幼儿配方奶粉。

1.2 色谱条件

色谱柱：反相Zorbax XDB-C18色谱柱；流速为1.0 mL/min；柱温为25℃；激发波长375 nm，发射波长435 nm；进样量为20 μL；流动相：0.05 mol/L乙酸钠比甲醇为65︰35（体积比，调pH值为4.5）。

1.3 样品处理

准确称取5 g样品，用25.0 mL 50℃热水溶解，超声10 min，用浓度为5 mol/L盐酸溶液调节pH值至1.7，放置2 min后，再用浓度为2.5 mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值至4.5。将样品溶液移至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度后，倒入漏斗用快速定性滤纸自然过滤，弃去最初滤液，在50 mL锥形瓶中收集滤液，并充分混匀，待用；取上述滤液10.0 mL于25 mL具塞比色管中，加10.0 mL正丁醇，强烈振荡后静置约10 min，充分分层，吸取正丁醇于5000 r/min离心5 min，取上清液用0.45 μm滤膜将样液过滤，进样20 μL进行色谱分析。

1.4 定性定量方法

采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定性，采用外标法以峰面积计算定量，依次配制不同浓度的标准溶液进样分析,以质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

2 结果与讨论

2.1 前处理方法的优化

维生素B1为水溶性物质，而婴儿配方奶粉中蛋白质含量较高，因此，本方法先用50℃热水超声提取，再经酸沉蛋白后直接用碱性铁氰化钾衍生，正定醇萃取待测液中的维生素B1；国标测定方法（GB/T5413.11-2010）样品需要在121℃下保持30 min,待冷却至40℃再酶解过夜，其后同本法。经过加标对比实验，国标测定方法平均回收率小于80%，而本法平均回收率大于92.0%，其原因可能为在维生素B1在121℃高温下可能会有所损失，造成国标测定方法平均回收率偏低。

2.1 色谱条件的优化

据文献报道，可用于分离维生素B1的色谱柱主要包括C18和C8柱。本文分别采用上述两种色谱柱进行分离试验，发现Zorbax XDB-C18柱对维生素B1具有较好的分离效果；维生素B1属于强极性化合物，在反相色谱柱上保留较弱，为了有利于色谱峰的分离及峰形的改善，选用以浓度为0.05 mol/L乙酸钠与甲醇比65︰35（体积比，调pH值为4.5）为流动相；对维生素B1标准溶液分别用激发波长为280，310，370，490 nm；发射波长为380，400，435，500 nm进行测定；发现激发波长为375 nm，发射波长为435 nm时，维生素B1标准溶液的响应值最大；通过不同体积进样量比较,发现进样量20 μL时,峰形较好，响应值比较理想。综合以上色谱条件的测定结果令人满意（如图1所示）。

2.2 标准曲线线性范围和方法检测限

将逐级稀释的标准工作液分别进样20 μL，测定结果经线性回归，线性范围为0.00～1.00 mg/L；线性相关系数为0.99999；回归方程为

式中：y为峰面积；x为质量浓度。

进空白样,以基线3倍噪声值在标准曲线查得结果计算,按测定方法计算,本方法最低检出量为0.5 mg/kg。

2.3 方法的回收率和精密度

称取已知含量的同一样品6份,每份5.00 g,添加维生素B1标准品0.03 mg,按供试品制备方法处理后,进行测定,结果如表1所示。从表中可看出,样品加标回收率92.1%～103.8%,平均相对标准偏差为4.34%（n=6）。

表1 加标样品回收率与相对标准偏差

3 结 论

建立了快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素B1的高效液相色谱测定方法。该法样品经酸沉蛋白后直接用碱性铁氰化钾衍生，正定醇萃取，HPLC法进行直接测定,样品加标回收率92.1%～103.8%,平均相对标准偏差为4.34%（n=6）,适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B1的快速测定。

[1]常相娜，黄荣清，王正平，等.B族维生素测定方法研究进展[J].科学技术与工程,2004,4（4）：312-315.

[2]崔蓉，李皎，王洪玮.水溶性维生素的高效液相色谱测定方法的研究[J].中国卫生检验杂志，2005，15（1）：55-57.

Study on rapid detection of Vitamin B1 in infant milk powder by HPLC

CAO Hong，WANG Hao
（Nation Food Quality&Safety Supervision and Inspection Center,Beijing 100094，China）

This thesis developed a HPLC method for rapid determination of Vitamin B1 in infant milk powder.In the method,the analysis column is revered-phase column of Zorbax XDB-C18（5μm，4.6 mm×250 mm i.d）.the mobile phase is 0.05mol/L CH3COONa water solution：Methanol（65：35,V/V,pH4.5）,the flow is 1.0 mL/min,and the injection volume is 20 μL.The limit of t quantitation was 0.5 mg/kg,The linear plots were obtained between 00.0 μg/mL and 1.00 μg/mL.Overall recoveries were between 92.1%and 103.8%,and RSD（n=6）value were between 4.34%.The results showed that the method was sensitive,accurate,convenient and quick,which can be used to detect Vitamin B1 in infant milk powder.

HPLC；infant milk powder；Vitamin B1

TS252.7

A

1001-2230（2010）11-0046-02

2010-08-30

曹红（1951-），女，高级工程师,从事食品安全与营养检验的研究工作。

王浩