铜绿假单胞菌超广谱β－内酰胺酶、ＡｍｐＣ酶检测意义

杨　威　袁　峰　全慧荣

[关键词]铜绿假单胞菌;β-内酰胺酶;AmpC酶;检测

[中图分类号]R378.99+1 [文献标识码] A [文章编号]1004-8650(2009)10-029-02

近年来,随着抗生素的大量应用,细菌耐药菌株大量产生,越来越多医务工作者来研究超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrum beta-lactamase,ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC),因此,产超广谱β-内酰胺酶(SSBL)菌株即细菌同时产ESBLs和质粒型头孢菌素酶(AmpC)的菌株耐药性更强,治疗更为棘手,该酶常见于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌等菌株,对所有的青霉素类药物、Ⅰ-Ⅳ代头孢菌素、氨曲南、所有的β-内酰胺类抗生素均耐药。此酶在铜绿假单胞菌耐药机制中起非常重要的作用,由此引起的耐药给临床治疗也带来了极大困难,这就迫切需要临床实验室能够将这两类酶的产生以及产酶菌的药敏情况报告给临床医生,指导临床合理用药,也就需要临床实验室能够及时鉴别出产酶株的表型。而且前美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)仅规定了检测肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs的表型鉴定方法,对铜绿假单胞菌和其他革兰阴性杆菌检ESBLs的检测及对产AmpC酶铜绿假单胞菌表型检测尚无统一标准。所以我们根据国际上已有的标准及国内外学者的研究结果检测产ESBLs、AmpC酶铜绿假单胞菌的表型,从而阐述铜绿假单胞菌的耐药机制,以提高临床铜绿假单胞菌AmpC感染的治愈率。

本实验室收集自2003年至今的所有住院及门诊患者各种标本中分离的铜绿假单胞菌74株无重复株,质控菌株为大肠埃希菌标准菌株ATCC25922和铜绿假单胞菌ACTT27853做阴性对照;肺炎克雷伯菌标准菌株ACTT700603(产ESBLs)和阴沟肠杆菌的标准菌株E.Cloacae029(产AmpC)作阳性对照。

药敏纸片:头孢西丁(CFX,30μg)、头孢他啶(CAZ,30μg)、头孢噻肟(CTX,30μg)、头孢曲松(CRO,30μg)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP,100/10μg)、头孢哌酮/舒巴坦(SCF,30/15μg)、阿米卡星(AN,30μg)、亚胺培南(IPM,10μg)、美洛培南(MEM,10μg)纸片均为美国Oxiod公司产品。

氯唑西林(CLO)中国药品生物鉴定所提供,克拉维酸(CLA)进口分装。由纸片协同实验进行筛选,通过双纸片扩散法或三维试验方法进行确认。

ESBLs的检测结果,74株铜绿假单胞菌共检出6株产ESBLs株,占(8.1%)。AmpC酶的检出结果为50株,占(67.6%)。即产ESBLs又产AmpC酶1株,占(1.4%)。

铜绿假单胞菌具有多重耐药性,耐药机制复杂,近年来的研究表明主要与细菌外膜的低渗透性、生物膜的形成、多耐药泵出系统及β-内酰胺酶的产生因素有关。Β-内酰胺酶对铜绿假单胞菌的耐药起重要作用。ESBLs和AmpC酶是近来国际上研究较为活跃的两类酶。ESBLs由质粒介导,ESBLs又产AmpC酶能够使氧亚氨基β-内酰胺类抗生素失活。因此,对三代头孢菌素和氨曲南均有不同程度的耐药性。但对碳青霉烯类和头霉素敏感。铜绿假单胞菌的AmpC酶是由染色体介导,可水解三代头孢菌素和头霉素,对酶抑制剂稳定;但对碳青霉烯类和Ⅳ代头孢菌素敏感,可被低浓度的氨曲南和氯唑西林抑制。有文献报道在铜绿假单胞菌中尚未发现有质粒介导的AmpC酶产生。 AmpC酶又称诱导酶,通常情况下其表达水平较低,且无临床意义,但在β-内酰胺类抗生素等诱导剂的作用下则大量产生,导致其对多种β-内酰胺胺类抗生素的耐药。我们在实验室中以IPM为诱导剂,以CTX、CTX/CLA、CAZ、CAZ/CLA为靶目标物,共检测出产AmpC酶的铜绿假单胞菌株50株,占67.6%,这与有关文献报道的铜绿假单胞菌AmpC酶的检出率接近。铜绿假单胞菌AmpC酶的发生率之所以这么高,不仅与诱导耐药有关,而且这些菌株还有较高频率(10-5-10-7)的自发突变,常发生于AmpD基因,可使细菌去阻碍持续高产的AmpC酶,从而水解包括第三代头孢菌素在内的多种抗生素,导致临床治疗失败。 通过试验,我们发现铜绿假单胞菌AmpC酶的检出率明显高于ESBLs的检出率,其差别有显著性。所以我们认为铜绿假单胞菌AmpC酶的产生是导致β-内酰胺类抗生素治疗失败的主要原因。故对于铜绿假单胞菌AmpC酶的产生在其耐药机理的形成中更具意义。但我们应重视同时产生AmpC和ESBLs的菌株,我们在试验中检出1株此菌,其耐药性更为严重,值得我们医务工作者的共同努力,合理应用抗生素,减少耐药菌株的产生,不断提高临床治愈率。

(收稿日期2009-07-27)