共转染
- 长链非编码RNA PCAT19对胰腺癌细胞增殖与侵袭的影响及其作用机制
PCAT19(共转染组),并分成si-PCAT19组、si-NC组及共转染组,待各组细胞系培养至对数期后行后续实验。1.3 RNA提取和qRT-PCR使用TRIzol 试剂从细胞系中提取总RNA。用逆转录酶将分离的RNA转录成互补DNA(cDNA)。使用 SYBR Green实时聚合酶链式反应扩增成cDNA产物。使用 SYBR Green RT-PCR检测PCAT19及miR-195-5p的表达。PCAT19的表达以GAPDH为内参,标准化为GAPDH的对
中国普通外科杂志 2023年9期2023-11-02
- lncRNA SNHG1靶向miR-145-5p/PDCD4轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响
5pmimic共转染于H9c2细胞,48 h后观察荧光素酶活性变化。分别构建PDCD4野生型质粒 (PDCD4-WT) 和突变型质粒 (PDCD4-MUT),将PDCD4-WT和PDCD4-MUT分别与mimic NC或miR-145-5pmimic共转染于H9c2细胞,48 h后观察荧光素酶活性变化。1.3 统计学分析采用SPSS 22.0软件处理数据。计量资料以x-±s表示,多组数据的比较采用单因素方差分析,进一步2组数据的比较采用SNK-q检验。P<
中国医科大学学报 2023年10期2023-11-01
- LncRNA NORAD通过miR-199a-3p调控ZNF217对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响
or NC组(共转染si-NORAD和inhibitor NC)、si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组(共转染si-NORAD和miR-199a-3p inhibitor),各组加入2 μg/mL的DDP处理24 h,进行后续实验。1.6 CCK-8法检测细胞增殖 将各组H460/DDP细胞接种于96孔板中,按照1.5中分组处理,培养48 h,每孔各加入10 μL CCK-8溶液,37oC孵育30 min,酶标仪测量各孔的吸光度(
中国肺癌杂志 2023年7期2023-09-04
- lncRNA HCG18靶向miR-34b-5p/FOXP1轴促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究
b-5p组)、共转染si-HCG18与anti-miR-NC(si-HCG18+anti-miR-NC组)、si-HCG18与anti-miR-34b-5p(si-HCG18+anti-miR-34b-5p组)、miR-34b-5p mimics与pcDNA(miR-34b-5p+pcDNA组)、miR-34b-5p mimics与pcDNA-FOXP1(miR-34b-5p+pcDNA-FOXP1组)。转染12 h后,更换为含10% FBS的RPMI 1
蚌埠医学院学报 2023年6期2023-08-02
- LncRNA XIST调节miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞增殖、迁移及成骨分化的影响
和miR-NC共转染)、pcDNA-XIST+ miR-545-3p mimic组(pcDNA3.1-XIST和 miR-545-3p mimic共转染)。对hOB细胞先进行上述转染24 h,再在分化培养基中进行诱导分化培养7 d,然后进行后续实验。1.5 qRT-PCR检测XIST、miR-545-3p表达 使用Trizol试剂提取细胞中的总RNA,将RNA逆转录为cDNA后,以cDNA为模板进行荧光定量PCR扩增。分别以GAPDH、U6为内参,使用2-
河北医药 2023年4期2023-04-08
- LINC00342调控miR-384对肺鳞癌细胞增殖侵袭迁移的影响研究
itor-NC共转染)、si-LINC00342+ miR-384 inhibitor组(si-LINC00342和 miR-384 inhibitor共转染)。转染严格按照LipofectamineTM2000 Transfection Reagent操作步骤进行。1.3.3RT-qPCR法检测LINC00342、miR-384表达:使用Trizol提取各组细胞中的总RNA,将RNA逆转录为cDNA后,以cDNA为模板上RT-qPCR仪进行扩增。LINC
河北医学 2023年2期2023-03-13
- circ-BRWD1靶向调控作用miR-132-3p介导FOXO1成骨
-132-3p共转染入BMSCs后检测FOXO1的表达水平:RT-qPCR分析检测control、agomiR-NC、agomiR-132-3p、agomiR-132-3p+pcDNA3.1、agomiR-132-3p+pc-circ-BRWD1转染的BMSCs细胞中FOXO1的相对表达。将pc-circ-BRWD1与agomiR-132-3p或sh-FOXO1共转染BMSCs后检测特异性成骨分化相关因子Runx2的表达水平:RT-qPCR检测在contr
医学理论与实践 2023年2期2023-02-04
- 长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响△
gomir组、共转染组、共转染阴性对照组,每组分配12只大鼠,再取12只大鼠按照10 mL·kg-1剂量自腹腔注入0.1 mol·L-1柠檬酸缓冲液,作为对照组。1.2.2 大鼠分组给药及视网膜血管通透性检测参照文献[11] 给予大鼠药物:LncRNA MEG3过表达组大鼠玻璃体内注射LncRNA MEG3过表达质粒(浓度参照说明书设定);miR-145-5p agomir组大鼠玻璃体内注射miR-145-5p agomir(浓度参照说明书设定);共转染组
眼科新进展 2023年1期2023-02-01
- 缺氧诱导因子-1α、Notch1和Jagged1共转染对急性心肌梗死模型大鼠心功能的改善作用
鼠分为模型组、共转染组和对照组,每组10只。①模型组:通过腹腔注射40 mg/kg 1%戊巴比妥钠对大鼠进行麻醉。气管插管后,所有大鼠使用小动物呼吸机接受正压有氧通气,并在左侧第4肋间打开胸部,切开心包后将心脏外化。使用6-0丝线缝合冠状动脉左前降支,距主动脉根部约3~5 mm。通过梗死区域的局部发绀验证AMI模型的制备成功。②共转染组:在冠状动脉左前降支结扎过程中将HIF-1α、Notch1、Jagged1共转染慢病毒注射到大鼠心脏的胸前组织中,即在梗死
陕西医学杂志 2022年11期2022-11-11
- lncRNA FOXD2-AS1对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的机制研究
位点(表3)。共转染 WT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-331-3p mimics的细胞荧光素酶活性较共转染WT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-NC的 细 胞 低(0.46±0.03 vs 1.00±0.08,t=18.961,P<0.05),而共转染 MUT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-331-3p mimics的细胞荧光素酶活性与共转染MUT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-NC的细胞差异无统计学意义(
现代实用医学 2022年8期2022-10-10
- 动脉炎病毒PRRSV和EAV的Nsp4蛋白对mTANK蛋白的降解
NK-HA质粒共转染HEK293T细胞,转染24 h后收取细胞裂解液,于4 ℃、12 000×g离心10 min,取上清加入1 μg小鼠IgG和20 μL Protein A+G,于4 ℃缓慢摇晃4 h,去除非特异性吸附.于4 ℃、1 000×g离心5 min,取上清加入1 μg Flag单抗,于4 ℃缓慢摇晃12 h,加入40 μL蛋白A+G继续摇晃4 h,于4 ℃、1 000×g离心5 min,弃上清,用预冷的PBS洗涤3次,最后用100 μL PBS
福建农林大学学报(自然科学版) 2022年5期2022-10-08
- 非洲猪瘟病毒MGF360-14L靶向MAVS抑制Ⅰ型干扰素的产生
MAVS或空载共转染。转染24 h后收集细胞,进行双荧光素酶检测,具体操作步骤参见双荧光素酶说明书(北京全式金生物技术股份有限公司)。1.2.3 免疫共沉淀试验(Co-IP) HEK293T细胞传代培养于6孔细胞培养板中,待细胞密度达到70%左右,依据具体试验转染p3×Flag-MGF360-14L、p-CMV-eGFP-MGF360-14L、pcDNA3.1-Myc-TRIM21、pcDNA3.1-HA-MAVS、p3×Flag-MAVS、pCDEF-H
畜牧兽医学报 2022年9期2022-09-30
- lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制研究*
-5p抑制组、共转染组。对照组采用空载质粒进行转染,SNHG6 敲减组采用si-SNHG6 慢病毒载体进行转染,miR-26b-5p 抑制组采用空载质粒及miR-26b-5p-inhibitor 进行转染,共转染组同时采用si-SNHG6慢病毒载体及miR-26b-5p-inhibitor 进行转染。1.5 方法1.5.1 细胞转染转染过程按照Lipofectamine 2000 试剂盒说明书进行操作,参照细胞分组的干预内容进行转染,于二氧化碳培养箱中培养
中国现代医学杂志 2022年16期2022-08-31
- 长链非编码RNA ENST00000415964调控miR-214/DKK3对急性白血病细胞增殖、凋亡的影响
iR-NC组(共转染pcDNA3.1-ENST-00000415964和miR-NC),pcDNA3.1-ENST00000-415964+miR-214组(共转染pcDNA3.1-ENST00-000415964和miR-214),pcDNA3.1-ENST00000415-964+si-NC组(共转染pcDNA3.1-ENST00000415964和si-NC),pcDNA3.1-ENST00000415964+si-DKK3组(共转染pcDNA3.1
中国老年学杂志 2022年8期2022-07-25
- miR-498靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1对口腔鳞状细胞癌细胞生长的影响
和OE-NC 共转染细胞)、miR-NC+OE-PCK1 组(miR-NC 和OE-PCK1 共转染细胞)、miR-498 mimics+OE-NC 组(miR-498mimics 和OENC 共转染细胞)、miR-498 mimics+OE-PCK1 组(miR-498 mimics 和OE-PCK1 共转染细胞)、antimiR-NC+si-NC 组(anti-miR-NC 和si-NC 组共转染细胞)、anti-miR-NC+si-PCK1 组(an
实用医学杂志 2022年11期2022-07-18
- miR-133a-3p靶向BMP9调控人颌骨骨髓间充质干细胞增殖、分化和凋亡的研究
i-con组(共转染anti-miR-133a-3p和si-con后进行成骨诱导)、anti-miR-133a-3p+si-BMP9组(共转染anti-miR-133a-3p和si-BMP9后进行成骨诱导)。1.2.3 RT-qPCR检测成骨分化过程中miR-133a-3p和BMP9 mRNA的表达 收集成骨诱导7 d的hOBMSCs,采用Trizol法提取hOBMSCs总RNA,以紫外分光光度计测定总RNA的纯度。按cDNA第一链合成试剂盒、SYBR G
实用口腔医学杂志 2022年2期2022-05-05
- lncRNA HOTAIRM1与miR-125b对肝细胞癌生物学行为影响
或miR-NC共转染。将重组载体与miR-NC或miR-125b模拟物共转染HEK293 细胞。共转染48 h后,弃掉原培养基,用100 μL PBS洗涤培养孔1遍,吸尽剩余的PBS;使用去离子水将5×PLB稀释成l×PLB;向96孔板中加入50 μL 1×PLB,裂解细胞15 min;96孔酶标板中(白色不透光的)每孔加上步骤的上清液10 μL,再加入100 μL LARII,静止2 s;每孔加入Stop&Glo Reagent终止反应,静止2 s后,进
锦州医科大学学报 2022年1期2022-03-30
- EIAV Rev 核输出活性检测系统的建立
DDV-HA)共转染HEK293T 细胞,利用western blot 在细胞裂解液中可检测到Gag 的表达,通过检测Gag 的表达来评估Rev 的核输出活性。1 材料与方法1.1 质粒、菌株和细胞pLGFD3-8、pcDNA-HA、pcDNA-RevFDDV-HA、pEGFP-N1 质粒、HEK293T 细胞均由本实验室保存;pcDNA-RevL36A-HA 是在pcDNARevFDDV-HA 的基础上获得的L36A 突变质粒;pcDNARevUK-HA
中国预防兽医学报 2022年1期2022-03-22
- circ_0091581靶向miR-136对皮肤鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响
miR-NC(共转染)、si-circ_0091581与anti-miR-136(共转染)分别转染至融合至70%的SCL-1细胞,分别记为si-NC组、si-circ_0091581组、miR-NC组、miR-136组、si-circ_0091581+anti-miR-NC组、si-circ_0091581+anti-miR-136组。1.2.2qRT-PCR检测基因的表达水平CSCC组织、癌旁组织与各组SCL-1细胞的总RNA通过Trizol试剂提取,反
医学研究生学报 2022年12期2022-02-02
- LncRNA H19通过miR-370-3p/RAF1轴对脑胶质瘤T98G细胞增殖侵袭和放疗敏感性的影响及机制
:T98G细胞共转染2μg H19 wt质粒和miR-370-3p mimics;mimics NC+H19 wt组:T98G细胞共转染2μg H19 wt质粒和mimics NC;H19 mut+miR-370-3p mimics组:T98G细胞共转染2μg H19 mut质粒和miR-370-3p mimics;mimics NC+H19 mut组:T98G细胞共转染2μg H19 mut质粒和mimics NC;③inhibitor NC组:T98G
河北医学 2021年12期2022-01-04
- circ_0084927靶向miR-623调控喉癌TU177细胞增殖和凋亡的机制研究
0084927共转染TU177细胞,孵育48 h后用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶活性。实验重复3次。将萤火虫荧光素酶活性归一化为海肾荧光素酶活性表示相对荧光素酶活性。2 结果2.1circ_0084927和miR-623在喉癌组织中的表达 与癌旁组织比较,喉癌组织中circ_0084927相对表达水平升高,miR-623相对表达水平降低(P表1 喉癌组织和癌旁组织circ_0084927和miR-623的表达水平比较2.2干扰circ_0084927表达
解放军医药杂志 2021年12期2022-01-03
- miR-206靶向FAM83A影响Wnt/β-catenin通路调控胰腺癌放疗敏感性
pcDNA组(共转染miR-206 mimics和阴性对照pcDNA)、miR-206+FAM83A组(共转染miR-206 mimics和过表达FAM83A质粒pcDNA FAM83A)。1.3qPCR实验 使用Trizol提取细胞中总RNA,通过cDNA合成试剂盒将RNA样本转变为cDNA。以GAPDH为内参,2-ΔΔCt法计算miR-206/FAM83A mRNA的相对表达水平。其中,miR-206的上游引物为5′-CAGATCCGATTGGAATG
中国老年学杂志 2021年23期2021-12-08
- GAS5靶向miR-222-3p对牙周膜干细胞成骨分化的影响机制
iR-NC组:共转染GAS5-siRNA和antimiR-NC;GAS5-siRNA+antimiR-222-3p组:共转染GAS5-siRNA和antimiR-222-3p,其中,每组设3 个复孔。将hPDLSCs接种至6 孔板,培养至70%汇合度时,按照脂质体3000说明书对hPDLSCs进行瞬时转染;转染6 h后换液,培养48 h收集各组细胞,RT-PCR检测GAS5和miR-223-3p表达水平评价转染效率后,再以成骨诱导液培养。1.4 茜素红染色
实用口腔医学杂志 2021年2期2021-04-27
- LncRNA-MEG3和KLF4在鼻咽癌发生发展中的作用及可能机制
模拟或阴性对照共转染C666-1细胞,36 h后双荧光素酶报告分析系统(Promega公司,美国)分析萤火虫和雷尼拉信号。荧光素酶活性用微量平板阅读器定量。1.7 Western blot法检测蛋白表达用RIPA缓冲液分离总蛋白、10%SDS-PAGE分离并转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上,蛋白质定量分析采用Bradford法,用皮尔斯ECL试剂盒显示PVDF膜上的靶蛋白条带。抗体稀释如下:抗KLF(1:1000)、抗Bcl-2(1:1000)和抗bax
肿瘤防治研究 2021年3期2021-04-12
- 过表达蛋白合成与分泌相关蛋白提高CHO细胞anti- hLAG3产量
G3的抗体质粒共转染入ExpiCHO- S细胞中,检测转染后72 h培养物上清中抗体产量的变化。仅转染了pCAG- Hygro- IRES2- EGFP载体和anti- hLAG3轻重链的细胞上清中抗体的产量为24.21 μg/mL。为了更直观地体现各蛋白对ExpiCHO- S细胞生产anti- hLAG3的影响,将转染了各蛋白表达载体的细胞上清的抗体产量用相对产量(Cr)表示(式(2))。Cr=Cm/24.21×100%(2)式中,Cm为实测产量(μg/
北京化工大学学报(自然科学版) 2021年1期2021-04-06
- 长链非编码RNA-ATB对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究
tors 组、共转染sh-ATB+miR-200c inhibitors 组、共转染o/e-ATB+miR-200c inhibitors 组、共转染miR-200c inhibitors+sh-DNMT3B 组、共转染miR-200c mimics+sh-DNMT3B 组。1.3.2 qRT-PCR采用miRNeasy Mini Kit 提取miRNA,使用TaqMan MicroRNA Assay 试剂盒检测miR-200c 的相对表达量,并使用App
中国现代医学杂志 2021年4期2021-03-16
- MEK5α 和MEK5β 调控Beclin 1 启动子
与p-354 共转染至C2C12细胞.双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,MEK5αCA 显著上调荧光素酶活性,而MEK5αDN 显著下调荧光素酶活性(见图2(a)),表明MEK5α能够正向调控Beclin 1 启动子活性.然后分别转染不同量的MEK5αCA,结果表明少量MEK5αCA(0.3 µg)对Beclin 1启动子活性无显著作用,中量MEK5αCA(0.8 µg)可显著上调Beclin 1 启动子活性,而多量MEK5αCA(2.4 µg)可进一步
上海大学学报(自然科学版) 2021年3期2021-03-01
- LncRNA UCA1靶向miR-206/CLOCK对神经胶质瘤细胞生长和侵袭的影响
W1783细胞共转染慢病毒质粒,与LncRNA UCA1序列shRNA一同构建。LV-con为对照组。将慢病毒载体加入LncRNA UCA1片段构建LV-LncRNA UCA1。miR-206模拟或阴性对照(NC)通过Lipo- fectamine 2000(Invitrogen,美国)进行转染。1.2.4蛋白质印迹法 通过10%十二烷基硫酸钠凝胶电泳提取蛋白质,并转移至聚偏氟乙烯膜(Millipore,美国)。抗E-钙粘蛋白抗体(1:500,ab4077
贵州医药 2020年12期2021-01-19
- MicroRNA-212-3p与靶基因转化生长因子-β2基因3'UTR的关系研究*
β2-Luc 共转染Saos-2细胞37℃水浴复苏Saos-2 细胞,加入DMEM 培养基(含10% FBS)后置于37℃、50%二氧化碳培养箱内培养。用DMEM 培养基(含10% FBS)制备Saos-2 单细胞悬液,按照2×105个/孔的密度将细胞均匀地接种到细胞培养板(12 孔),置于37℃、5%二氧化碳培养箱中培养,待细胞密度达1.8×105个/孔时,使用无血清DMEM 培养基培养2 h 后进行转染。使用LipofectamineTM2000 进行
中国现代医学杂志 2020年24期2021-01-04
- miR-203a-3p抗弥漫性大B细胞淋巴瘤的作用及机制研究
C-mimic共转染,24 h后使用双荧光素酶测定系统测定荧光素酶活性。1.2.7免疫印迹 收集细胞并用RIPA裂解液提取总蛋白,使用BCA试剂盒测定蛋白浓度。上样后用转膜仪将蛋白转移至PVDF膜,用5%脱脂牛奶封闭1 h,洗膜后一抗孵育4 ℃过夜,加二抗室温孵育2 h,ECL试剂检测蛋白。2 结 果2.1miR-203a-3p在DLBCL组织中的表达水平 与RH组织比较,DLBCL组织中miR-203a-3p的表达水平显著降低(P2.2过表达miR-20
福建医科大学学报 2020年5期2020-12-15
- LncRNA SOX2OT海绵吸附miR-34a促进SOX2表达增强大肠癌多药耐药
mimic(共转染SOX2OT、NC mimic)、SOX2OT+miR-34a(共转染SOX2OT、miR-34a mimic)。取对数生长期HCT-116细胞,0.25%胰蛋白酶消化,以5×103个/孔的浓度接种于96孔板中,每孔加入100 μL完全培养基。过夜贴壁后加入5个浓度梯度的5-FU、VCR、CDDP和TAXOL,每孔设3个复孔,孵育48 h后,每孔加入10 μL CCK-8溶液,待其完全混匀,放入孵箱中继续培养2 h。用酶标仪测定各孔OD
实用肿瘤学杂志 2020年5期2020-11-13
- 利用同源重组技术构建Hoxa5、BMP6真核表达载体及共转染成纤维细胞表达
载体通过与单、共转染比较基因表达量的变化来研究Hoxa5和BMP6之间的作用关系,旨在为更深层次上研究毛囊功能基因奠定基础。1 材料和方法1.1 试验材料健康的30日龄胎羊由青岛畜牧所奥特种羊场提供;TRIzol、KpnⅠ、倒置显微镜、荧光定量PCR等均购自Bio-Rad公司[9]。1.2 试验方法1.2.1 引物设计 选取绵羊Hoxa5基因(GenBank登录号为NM-001009431.1)CDS区 和BMP6基因(GenBank登录号为NM-0011
华北农学报 2020年4期2020-08-31
- 利用同源重组构建Chordin、BMP6 真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究
、BMP6质粒共转染成纤维细胞后在细胞水平上验证两基因间的相互作用,为进一步的分子育种工作提供依据。1 材料与方法1.1 实验材料 选取40 日龄的健康胎羊(由青岛奥特种羊场提供)并及时消毒处理。TRIZol(Roche)试剂、蛋白裂解液、EcoRI 限制性内切酶、KpnI 限制性内切酶、T4 DNA 连接酶、pcDNA3.1 质粒、DH5α感受态细胞、DMEM(基础培养基)、胰蛋白酶、标准胎牛血清、DPBS(磷酸缓冲盐溶液)、Lipofectamine
中国畜牧杂志 2020年7期2020-07-24
- EIAV Rev 蛋白拮抗eqTRIM5α介导的AP-1 信号通路的机制研究
性对照;第二组共转染450 ng peqTRIM5α-HA+450 ng pcDNA3.1质粒;第3 组共转染450 ng peqTRIM5α-HA+450 ngpEIAV-Rev-HA 质粒;第4 组共转染450 ng pEIAVRev-HA+450 ng pcDNA3.1 质粒,上述各组均同时转染100 ng pGL3-AP-1-Luc(报告质粒)和5 ng pRL-TK(内参质粒)。每组分别做3 个重复。转染24 h 后,两个重复组弃去上清液,每孔加
中国预防兽医学报 2020年1期2020-06-05
- CARMA3和MMP-9在乳腺癌细胞增殖侵袭中的作用
行下一步检测。共转染pCMV6-CARMA3+MMP-9 siRNA,方法按上述步骤转染pCMV6-CARMA3,36小时后收集细胞检测。实验分为pCMV6-CARMA3组、空载体组、control siRNA组、MMP-9 siRNA组和共转染pCMV6-CARMA3+MMP-9 siRNA组。1.2.3 CARMA3与MMP-9蛋白的表达 采用Western blot法对比乳腺癌细胞系与乳腺正常上皮细胞系中CARMA3与MMP-9蛋白的表达。收集乳腺癌
浙江实用医学 2020年6期2020-05-08
- siRNA下调VEGF基因沉默对人舌癌细胞株Tca8113的生物学作用
式细胞术结果在共转染Tea8113细胞培养24 h后,进行流式细胞仪分析,结果显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少, G2/M期细胞相对增多,且细胞凋亡率升高与脂质体空载组及正常对照组相比差异非常显著。见表2。表1 siRNA正义组与其他各组对Teag8113细胞增殖抑制率表2 转染siRNA24 h后细胞周期进程及凋亡率2.5 VEGF含量表达siRNA转染Teag8113细胞上清液中VEGF含量检测明显低于各对照组,差异有统计学意义。见表3。表3
中国实验诊断学 2019年11期2019-11-26
- 流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究
5-DOK6 共转染至6 孔板中密度为80 %的293T 细胞,同时分别转染pCAGGS-Flag-NS1+pCAGGS 和 pCAGGS-V5-DOK6+pCAGGS 作 为对照,每种质粒各1 g。转染48 h 后,按200 μL/孔加入NP40 (含PMSF),裂解细胞30 min,离心,收集上清全细胞裂解液(Whole cell lysates,WCL),取20 μL 作为对照 ,剩余的样品加入20 μL Anti-Flag M2 亲和琼脂糖珠过夜结
中国预防兽医学报 2019年10期2019-11-22
- miR-195过表达对人口腔鳞癌细胞增殖的影响及机制
5 mimic共转染组(转染FGF7-wt+miR-195)、FGF7-wt与对照共转染组(转染FGF7-wt+vector)、FGF7-mut与miR-195 mimic共转染组(转染FGF7-mut+miR-195)、FGF7-mut与对照共转染组(转染FGF7-mut+vector),分别完成转染48 h后收集细胞,根据双荧光素酶活性检测试剂盒说明书,检测荧光素酶活性,实验重复3次。1.5 SCC-4细胞内miR-195、FGF7 mRNA表达检测
山东医药 2019年25期2019-09-18
- miR-105靶向调控FUT4影响骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究
si-NC组;共转染miR-105模拟物和FUT4 cDNA的细胞记为miR-105 mimic+pc-FUT4组,共转染miR-105模拟物和FUT4 cDNA对照的细胞记为miR-105 mimic+pc-NC组;共转染miR-105抑制剂和FUT4 siRNA的细胞记为miR-105 inhibitor+si-FUT4组,共转染miR-105抑制剂和FUT4 siRNA对照的细胞记为miR-105 inhibitor+si-NC组。1.6 双荧光素酶
中华骨与关节外科杂志 2019年6期2019-07-22
- miR-130b对宫颈癌细胞修复TNF-α诱导性基因组双链DNA断裂作用的影响及机制
酸(NC组),共转染pcDNA3.1-CDKN1A和miR-130b mimics (CDKN1A+miR-130b组)、pcDNA3.1和miR-130b mimics (pcDNA3.1+miR-130b组)。转染4 h,更换新鲜培养液继续培养。1.3 miR-130b、CDKN1A影响细胞修复双链DNA断裂观察1.3.1 细胞干扰处理 CDKN1A组、pcDNA3.1组细胞转染培养24 h后,分别用终浓度为100 ng/mL TNF-α或PBS处理细
山东医药 2019年2期2019-02-15
- miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子基因表达的靶向调控作用
μg质粒进行共转染。实验分组如下:(1)未转染的空白对照组;(2)共转染miR-NC、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut;(3)共转染miR-9 mimics、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut;(4)共转染miR-9 inhibitor、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut;每组设4个复孔。转染24 h后,每孔用PBS洗2次,加入100
胃肠病学和肝病学杂志 2019年1期2019-01-24
- 慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响及机制研究△
MGB1载体及共转染miR-34a+HMGB1的慢病毒载体及培养液接种至Y79细胞。按照接种载体分组,将Y79细胞株分为4组,分别为转染miR-34a组、转染HMGB1组、共转染miR-34a+HMGB1组及阴性对照组。1.2.2miR-34a慢病毒载体的构建及cDNA转染获取的人miR-34a序列,从Genbank中查阅HMGB1的cDNA序列,设计合成miR-34a及HMGB1前体引物,采用PCR方法扩增含miR-34a及HMGB1前体片段,并克隆至慢
眼科新进展 2019年1期2019-01-10
- miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响
建好的质粒进行共转染并分为3组,即miR-NC+miR-26a mimics组、Wt-HMGA1+miR-26a mimics组和Mut-HMGA1+miR-26a mimics组。置于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h后收集细胞,采用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性。1.5 CCK8法检测人结肠癌SW480细胞增殖活力 取转染后生长至对数期的 miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhib
吉林大学学报(医学版) 2018年6期2018-11-28
- miR-581对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响及机制
miR-581共转染到HEK293细胞中,质粒转染后48 h据Promega公司操作说明,裂解细胞,加入荧光素酶底物,检测荧光素酶活性,验证miR-581能否与PRDX1 3′UTR结合,证明miR-581是否能直接调控PRDX1。1.7 SW620细胞中PRDX1蛋白表达检测 采用Western blotting法。根据PRDX1蛋白相对分子质量大小,配制凝胶,根据所测蛋白浓度适量加入蛋白样品及每孔5 μL的蛋白Marker;跑胶,首先加压80 V,保证
山东医药 2018年25期2018-07-20
- 基于miRNA-10b调控宫颈癌LncRNA-H19网络通路机制的研究
RNA-10b共转染组比较,pDNA-H19和miR-10b 共转染组的miR-10b表达量下降(P0.05),说明H19 抑制miRNA-10b的表达,见图1。向过表达H19的HeLa细胞转染miRNA-10b或miRNA-10 inhibitor共转染组细胞增长明显高于pcDNA-mut-H19和miRNA-10b共转染组(P图1H19可抑制miRNA-10b的表达2.2H19促进IGF1R表达用Western blot检测IGF1R蛋白表达量显示,p
中国实验诊断学 2018年3期2018-03-26
- miR—1203和HOTAIRrs7958904位点对乳腺癌细胞生长的影响
1203模拟物共转染细胞,检测荧光素酶的表达。过表达载体、miR-1203模拟物或抑制物单独或共转染乳腺癌细胞,荧光定量PCR检测HOTAIR表达,BrdU检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭。 结果 HOTAIR突变型增强了miR-1203对其的靶向结合;miR-1203可以下调突变型HOTAIR的表达,差异有高度统计学意义(P < 0.01);但对野生型HOTAIR影响不显著(P > 0.05)
中国医药导报 2018年3期2018-03-07
- 何首乌中THSG和蒽醌类成分对人孕烷X受体介导的CYP3A4的调控作用
的报告基因载体共转染HepG2细胞,10 μmol·L-1利福平(RIF)为阳性对照,10 μmol·L–1酮康唑(TKZ)为阴性对照,用THSG(2.5,5,10 μmol·L-1)和蒽醌类成分(2.5,5,10 μmol·L-1)分别处理24 h,进行双荧光素酶活性检测。结果表明,空载质粒pcDNA3.1与pGL4.17-CYP3A4共转染时,THSG、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素对CYP3A4的调控多为抑制效应,大黄素对CYP3A4产生诱导
中国中药杂志 2017年24期2018-01-29
- miR-125b靶向Smad4调控非创伤性股骨头坏死骨髓基质干细胞成骨分化与增殖的相关性
好的质粒做三组共转染,即Wt-Smad4与miR-125b mimics、Mut-Smad4和miR-125b mimics以及 miR-NC与miR-125b mimics,检测荧光素酶的活性;BMP-2诱导HMSC-bm分化,将miR-125b mimics和si-Smad4转染到分化的细胞内,以不转染的细胞作为参照,检测miR-125b靶向Smad4对细胞分化的影响;将miR-125b mimics、miR-125b inhibitor和miR-NC
中国老年学杂志 2017年2期2017-02-14
- 绵羊肺腺瘤病毒SU蛋白与Hyal-2蛋白的结合域研究
-hyal-2共转染293T细胞,运用激光共聚焦方法结合免疫共沉淀方法确定SU蛋白和Hyal-2蛋白可能结合区域。激光共聚焦显微镜观察结果表明,SU1-SU5与Hyal-2均存在细胞内共定位。免疫共沉淀方法检测缺失型蛋白SU1-SU5与绵羊Hyal-2均不存在相互作用。su基因所缺失区域238 bp~867 bp对于SU蛋白与受体的结合都是必不可少的。关键词:绵羊肺腺瘤病毒;SU蛋白;Hyal-2蛋白;结合区域绵羊肺腺瘤病(OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(Ov
动物医学进展 2016年4期2016-05-10
- SOCS3通过PYK2信号通路调控小细胞肺癌的HI F-1α表达及增殖潜能△
-HIF-1α共转染细胞株。1.2..22免疫荧光检测 使用红色荧光标记,在倒置荧光显微镜下,分别检测已转染细胞株及未转染细胞株中SOCS3的表达水平。1.2..33细胞生长曲线的绘制 将人小细胞肺癌株NCI-H446细胞、Ad5转染细胞株、Ad5-SOCS3转染细胞株和Ad5-SOCS3-HIF-1α共转染细胞株分别移至培养基中培养,于第4、8、12、16、20、24、28天使用细胞计数板分别计算细胞增殖数。检测SOCS3单独转染及SOCS3与HIF-1
癌症进展 2015年1期2015-12-22
- 靶向猪ATGL 基因的miRNA预测及鉴定
iRNA模拟物共转染HEK 293T细胞,最终利用双荧光素酶报告基因法来检测荧光素酶活性。试验成功构建了含猪ATGL基因3′UTR序列的重组载体pMIR-ATGL-3′UTR,双荧光素酶报告基因试验显示ssc-miR-769-3p、ssc-miR-1343、ssc-miR-7137-3p、ssc-miR-671-5p、ssc-miR-149能下调293T细胞中pMIR-ATGL-3′UTR的荧光素酶活性,而点突变试验证实了ssc-miR-1343与ssc-
畜牧兽医学报 2015年8期2015-03-22
- CBF-β 辅助SIVagm Vif 蛋白诱导限制因子APOBEC3G 的降解
A3.1 质粒共转染293T 细胞;实验组将3 μg pcDNA-SIVVif-HA 与CBF-β 质粒或者相应量的pcDNA3.1 质粒共转染进293T 细胞。转染24 h 之后换成含有终浓度100 μg/mL CHX(放线菌酮)的完全培养液,分别在加入CHX 后的0 h、1 h、2 h、6 h 和12 h 收 获细胞,并将细胞裂解。进行SDS-PAGE,将转印蛋白的PVDF 膜用5 %的脱脂乳封闭,分别以HA 抗体(1∶10 000)、Flag 抗体(
中国预防兽医学报 2015年10期2015-03-09
- 乙型肝炎病毒前S2蛋白激活人酰基蛋白硫酯酶1启动子*
)-preS2共转染人肝癌细胞系HepG2,然后通过检测细胞荧光素酶活性来评价preS2对人APT1基因启动子的作用。数据用独立样本t检验分析。结果测序结果证实pcDNA3.1(-)-preS2与pGL3-APT1与实验设计相符。pGL3-APT1的荧光素酶活性是阳性对照质粒pGL3-Control的荧光素酶活性的1.2倍(P肝炎病毒,乙型;病毒蛋白类;蛋白质前体;酰基蛋白硫酯酶1;启动子;反式激活乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)
重庆医学 2015年29期2015-01-07
- CD14对生殖支原体LAMPs激活NF-κB的影响
g。1.2.5共转染及NF-kB活性的测定 ①以pcDNA-CD14,pFLAG-TLR2, pNF-kB-luc及pRL-TK质粒共转染Hela细胞24 h后,再用LAMPs刺激8 h;②LAMPs用10 μg/mL sCD14 37℃共孵育30 min后,再刺激0.1 μg/mL pFLAG-TLR2,0.05 μg/mL pNF-kB-luc,0.005 μg/mL pRL-TK共转染的Hela细胞8 h。分别消化收集HeLa细胞,加入细胞裂解液20
中国人兽共患病学报 2014年8期2014-04-02
- 双分子荧光互补系统的构建及其在病毒学中的初步应用
00 ng进行共转染。具体步骤参照Fugene HD试剂说明书执行。待转染16 h后,弃去部分培养基,然后将细胞置于荧光倒置显微镜下观察荧光并拍照保存。2 结果2.1 Venus突变体的构建根据突变体Venus与EYFP序列比较结果显示,Venus共存在5个特异的氨基酸位点突变,分别为:F46L、F64L、M153T、V163A、S175G。构建示意图如图1所示。在突变PCR过程中,为便于以后插入目的基因,在其N端分别引物了EcoRI,BamHI和XhoI
中国动物传染病学报 2013年3期2013-07-04
- 小鼠DUSP1 3'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定
作为阳性对照)共转染,0.2μg LuDP/RL分别与0.1μg HuR表达载体(pcDNA 3.1-HuR-FLAG)和pCDNA3.1(作为对照)共转染,0.2μg LuDP/RL分别与50nmol/L mmu-miR101a和Control dsRNA(作为对照)共转染,48h后收获细胞,采用Dual-Luciferase®Reporter Assay System检测试剂盒检测荧光素酶活性,具体操作按说明书进行。图1 小鼠DUSP1 3'-UTR序
解放军医学杂志 2013年4期2013-04-01
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒相关猪microRNA的初步筛选
K-utr质粒共转染SUVEC,设立空载体对照,依照LipofectamineTM2000试剂说明转染96孔板,各自设置6个复孔,转染设置组如下:1:psiCHECKTM-2vector,2:psiCHECK-utr,3:miRNA control;psiCHECK-utr,4:inhibitor control;psiCHECK-utr,5:miR-323;psiCHECK-utr,6:miR-323inhibitor;psiCHECK-utr,7:mi
中国兽医杂志 2012年3期2012-11-23
- pBIFC-VN173-CXCR4 和pBIFC-VC155-NT21MP 真核表达质粒的构建及其在活细胞内的作用
.6 重组载体共转染COS-7 细胞 将COS-7 细胞接种于24 孔板,每孔105个细胞,于500μl 无抗生素DMEM 完全培养液(含10%胎牛血清)中37℃、5%CO2培养箱培养,待细胞融合度达80%至90%且细胞生长状态良好时进行转染。转染分组:①pBIFC-VN173 和pBIFCVC155 共转染组;②pBIFC-VN173-CXCR4 转染组;③pBIFC-VC155-NT21MP 转染组;④pBIFCVN173-CXCR4 和pBIFC-V
浙江大学学报(医学版) 2012年5期2012-01-22
- hTPO和hNIS共转染肺癌细胞系H460介导放射性碘摄取的研究
增高,我们同时共转染入人甲状腺过氧化物酶(human thyroperoxidase, hTPO)基因,从而达到提高治疗效果的目的。1 材料与方法1.1 材料和仪器 H460人大细胞肺癌细胞由中国医学科学院放射医学研究所惠赠,pcDNA3.1/hNIS质粒由本实验室构建并保存。G418硫酸盐、DMEM高糖型培养基和脂质体(LipofectamineTM2000)购自美国Invitrogen公司;实验用酶类均购自日本Takara(宝生物)公司。125I购自中
中国肺癌杂志 2010年6期2010-09-11
- TMD2前断裂CFTR翻译后的连接及氯离子通道功能
真核表达载体,共转染培养的真核细胞,瞬时表达观察CFTR的剪接,膜片钳记录细胞的 CI−电流和通道开放活性,为运用双AAV载体转CFTR基因的CF基因治疗研究提供实验依据。1 材料与方法1.1 实验材料质粒pMST (含split Ssp DnaB intein编码序列)由加拿大Dalhousie大学医学院Paul Liu教授实验室提供。含CFTR的质粒pIRES2-EGFP-CFTR和幼年仓鼠肾脏细胞 (Baby hamster kidney,BHK)
生物工程学报 2010年12期2010-02-09