国产全自动固相萃取仪在测定乳与乳制品中三聚氰胺含量中的应用

胡桂霞

三聚氰胺又称为蛋白精，稳定性好，常被用作化工原料、涂料和粘合剂，有些不法分子为了提高蛋白质的含量会将其加入奶粉中，但人体若摄入过多会引起肝脏、肾脏等损伤。自2008年发生的“三聚氰胺毒奶粉”事件以来，三聚氰胺已成为乳与乳制品企业和市场监管部门的重要监控项目。

现行有效的国家标准GB/T 22388-2008《原料乳和乳制品中三聚氰胺检测方法》第一法采用传统的手动固相萃取法对样品提取纯化后，利用高效液相色谱仪检测三聚氰胺含量，存在对实验人员技术要求高、重复性差、实验时间长等缺点。随着国产全自动固相萃取仪的水平越来越高，将其应用于三聚氰胺的检测中，不仅能降低檢测人员的劳动强度，提高实验效率，还可以有效保证结果的可靠性及重现性。本文旨在结合国家标准GB/T 22388-2008第一法，进行国产全自动固相萃取仪在测定乳与乳制品中三聚氰胺含量中的应用研究，为国产科学仪器的应用推广提供数据支撑。

1. 仪器与材料

1.1 仪器。1260型高效液相色谱仪，安捷伦；Fotector plus高通量全自动固相萃取仪，睿科；5810R高速离心机，Eppendorf； Waters Oasis MCX混合型阳离子交换固相萃取柱（60mg/3mL）；SECURA 224-1CN电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。

1.2 材料。甲醇、乙腈，均为色谱纯；冰乙酸、氨水、柠檬酸、辛烷磺酸钠、三氯乙酸，均为分析纯；试验用水为Mili-Q型超纯水机制取的超纯水（电阻率为18.2MΩ·cm）。三聚氰胺标准品来源为Dr.Ehrenstorfer GmbH（纯度为99.44%，货号DRE-C14861400、批号G976694）。样品1为光明优加纯牛奶；样品2为纽贝滋婴幼儿奶粉；样品3为大白兔奶糖。

2. 实验与方法

2.1 色谱条件。Waters XBridge C18 色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；柱温40℃；检测波长240nm；进样量20μL；流量1.0mL/min。流动相为离子对试剂缓冲液-乙腈（90+10，体积比）。离子对试剂缓冲液配制：准确称取柠檬酸2.10g和辛烷磺酸钠2.16g于1L容量瓶中，加水980mL溶解后，用氨水调节pH为3.0，用水定容至刻度。

2.2 样品前处理。称取2g（精确至0.01g）试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙睛，超声提取10min，再振荡提取10min，以不低于4000r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25.00mL，移取5mL滤液，加入5mL水混匀后待净化。将待净化液按照程序（表1）进行全自动固相萃取净化。净化液于50℃下用氮气吹干，残留物用1.00mL流动相溶解，涡旋混合1min，过0.22μm微孔滤膜后，供高效液相测定。

3. 结果与分析

3.1 柱效评价、灵敏度和净化图谱。全自动固相萃取法的柱效为92.3%，测定低限水平的样品1三聚氰胺阳性样的信噪比S/N 70.7＞10，柱效和方法灵敏度均满足分析要求。在波长240nm下，本法与手动固相萃取法净化后三聚氰胺目标峰峰形良好，与标准品图谱基本一致，目标物保留时间处无杂峰干扰，除杂效果较好。

3.2 准确度和精密度。GB/T 22388-2008规定的测定低限为2mg/kg，分别制备6份测定低限、2倍测定低限、10倍测定低限水平的样品1三聚氰胺阳性样。3水平6平行阳性样的三聚氰胺测得准确度平均值为85.6%-97.0%，RSD为0.9%-3.0%（表2），均达到国标GB/T 22388-2008规定“在添加浓度2mg/kg-10mg/kg浓度范围内，回收率在80%-110%之间，相对标准偏差小于10%”的要求，达到分析要求。

3.3 仪器重复性。对2倍测定低限水平的样品1三聚氰胺阳性样，分别间隔0h、2h、4h、8h、24h和48h进行6平行全自动固相萃取，测得准确度平均值分别为91.5%、89.6%、90.2%、90.1%、92.9%、93.0%，6个时间内测得准确度的RSD为1.6%，说明该方法重复性良好，满足分析要求。

3.4 基质耐受性。分别对2倍测定低限水平的样品1、样品2和样品3三聚氰胺阳性样，进行6平行萃取净化，准确度平均值分别为90.8%、89.7%、92.0%，RSD分别为2.0%、2.2%、1.0%，说明该方法的基质耐受性良好，满足分析要求。

3.5 T检验法结果对比。对样品2三聚氰胺阳性样，分别按本法（方法1）和手动固相萃取法（方法2）进行前处理，根据测得三聚氰胺含量的准确度进行比较，结果见表3。经F检验两组数据的方差齐性，方法1和方法2的准确度标准偏差S分别为2.01%和2.18%，F=S大2/S小2=1.18，F表=5.05，可知F＜F0.05，（5，5），表明两组数据方差齐性。采用T检验进行比较，t=1.4，t＜t0.05，10（t表=2.23），说明两种方法无显著性差异。

4.结论与讨论

本试验从柱效、灵敏度、净化后图谱、准确度、精密度、重复性、基质耐受性等方面与传统方法进行比较，结果表明，国产全自动固相萃取仪的自动化程度高、萃取效率好、净化除杂效果好，灵敏度、准确度和精密度均满足分析要求。与传统手动固相萃取法相比，对乳与乳制品中三聚氰胺的提取效果无显著性差异，满足国标GB/T 22388-2008要求。在保证检测结果准确、可靠和可重复的基础上，该国产全自动固相萃取仪能降低实验人员劳动强度，提高整体工作效率，适用于乳与乳制品中三聚氰胺含量的日常检测工作。