石椒草抗炎有效部位筛选

龚盼盼，白 娟，冯学花，宗茹敏，裴文清

(安徽新华学院 药学院，安徽 合肥 230000)

炎症是机体对于刺激，如细菌、病毒、高温、强酸强碱、机械损伤和异物等的一种防御反应，表现为红、肿、热、痛和功能障碍。糖皮质激素和非甾体抗炎药是最常见的抗炎药物，但二者均有较强的副作用。糖皮质激素能降低机体自身抵抗力，导致水肿、肾上腺萎缩,[1]而使用非甾体抗炎药的患者中约有1/3会出现胃肠道、肝毒性、肾毒性等不良反应。[2]寻找安全、有效的天然抗炎药物是非常有必要的。

石椒草是芸香科植物石椒草BoenninghauseniasessilicarpaLevl.的全草，主要分布于我国四川、云南等地，是彝族等少数民族常用药。从石椒草属植物中分离得到的天然化合物主要以苯环上有取代基的简单香豆素类化合物居多，除此之外，石椒草中还含有生物碱、黄酮苷和挥发油等成份。[3-4]

《云南中草药》记载石椒草：“祛风燥湿，理气镇痛，消炎。主治风寒感冒，肺炎，支气管炎，扁桃体炎，腮腺炎，痢疾，血栓性脉管炎。”[5]在云南部分地区，农民将石椒草拌入饲料治疗奶牛的乳腺炎。[6]虽然石椒草常用于治疗多种常见炎症，但现阶段尚未见石椒草抗炎效果及其有效部位筛选相关的研究报告。以超声辅助法提取石椒草中5种不同极性部位的有效成分，通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验,[7]确认具有抗炎活性的有效部位，并对有效部位进行初步表征，为石椒草进一步开发和应用提供研究依据。

1 材料与仪器

1.1 材料

石椒草药材购于亳州药材市场，经安徽新华学院卫强教授鉴定为石椒草全草。阿司匹林肠溶片(批号：211108)购自石家庄康力药业有限公司。二甲苯、石油醚等试剂购自中国医药集团有限公司。实验用水为自制纯化水。

1.2 仪器

TSQ Quantum Ultra质谱仪赛默飞；FA2004N电子天平上海舜宇恒平科学仪器有限公司；KQ-100DE超声仪昆山舒美超声仪器有限公司；HH-1数显恒温水浴锅常州荣华仪器制造有限公司；RE-3000旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器厂；打孔器。

2 实验方法

2.1 不同极性部位的提取

石椒草全草洗净，干燥，粉碎。取石椒草粉末5份，每份1 kg，分别加入石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、水1 L，超声辅助提取1 h。提取液过滤，浓缩成浸膏。

2.2 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验模型

2.2.1 分组及给药

取昆明种小鼠80只，随机分为石油醚提取组、四氯化碳提取组、三氯甲烷提取组、乙酸乙酯提取组、乙醇提取组、水提取组、模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(阿司匹林)。每组10只小鼠，体重18-22 g，雌雄各半。小鼠称重，按小鼠重量给药。灌胃给药，1次/天，连续给药3天。浸膏用含0.5% CMC-Na生理盐水超声溶解，小鼠按每10 g体重每天给药0.2 g生药。模型对照组，小鼠按每10 g体重每天给药0.2 mL生理盐水。阳性对照组用阿司匹林片加生理盐水超声溶解，滤过，小鼠按每10 g体重每天给药2 mg阿司匹林。第3天给药1 h后，小鼠右耳廓涂抹二甲苯20 μL(用移液枪往耳朵两面上各滴10 μL，再用枪头涂抹均匀)，涂布30 min后，每组取10只小鼠处死，用8 mm打孔器分别打下左右耳片，精密称定耳片重量，以右耳片质量减去左耳片质量计算肿胀度，以下列公式计算肿胀抑制率：

肿胀抑制率(%)=(模型组肿胀度-实验组肿胀度)/模型组肿胀度×100

2.2.2 数据处理

2.3 有效部位的表征

采用质谱对确认的活性部位进行分析，ESI正离子模式扫描，扫描范围M/Z 50-1000。

3 结果与分析

3.1 不同极性部位提取物的肿胀度和肿胀抑制率

以肿胀抑制率为指标考察不同组对小鼠耳廓肿胀的抑制效果。如表1所示，阳性对照组阿司匹林对小鼠耳廓肿胀有明显抑制效果，肿胀抑制率为57.68 %。5个实验组均对小鼠耳廓肿胀显示出了抑制效果，其中，乙醇提取组、水提取组相对模型对照组的肿胀度显示出了统计学差异(P<0.05)。乙醇提取组、水提取组的肿胀抑制率分别为71.62 %、53.41 %。将乙醇提取组、水提取组作为石椒草抗炎有效部位，进一步进行研究。

表1 不同极性部位提取物的肿胀度和肿胀抑制率

3.2 质谱表征

采用质谱对确认的活性部位即乙醇提取组、水提取组进行分析，结果见图1和图2。质谱图表明乙醇提取物(图1)抗炎有效成分的特征信号峰为m/z 103.99、318.14、259.97、274.11、593.17，水提提取物(图2)有效成分的特征信号峰为m/z 103.99、274.11、318.14、453.16、701.38。从质谱图中可以识别出，乙醇提取组和水提取组共同含有m/z 103.99、318.14、274.11、453.16的信号峰。除特征信号峰，乙醇提取组、水提取组在m/z 150-700之间含有多个其它信号峰。结合已经发现的36多种香豆素、12种生物碱、10多种挥发油和其它化合物，对准分子离子信号峰进行归属(见表2)。m/z 103.99可能是己醇的准分子离子峰,[8-9]m/z 259.97可能是Micropubscin的准分子离子峰,[10-11]m/z 318.14可能是hallacridone的准分子离子峰,[12]m/z 593.17可能是3-(1,1-dimethylallyl)-xanthyletin的准分子离子峰,[13]m/z 701.38可能是松风草内酯的准分子离子峰。[14]基峰即信号最强的准分子离子峰m/z 274.11，可能是含有奇数氮原子的生物碱，未在已发现的12种生物碱确认出归属。

图1 乙醇提取部位质谱图

图2 水提取部位质谱图

表2 准分子离子信号峰归属

4 结论

石椒草可用于治疗扁桃体炎、支气管炎、肺炎等炎症，现代也开发出了石椒草咳喘颗粒、石椒草咳喘胶囊、石椒草片等药物,[15-17]但未见石椒草抗炎活性成分相关研究的报道。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验，确认石椒草抗炎活性有效部位为乙醇提取部位和水提取部位。民间在使用石椒草时，常采用水煎、酒服的方式，确可达到较好地抗炎效果。

对有效部位进行质谱分析，乙醇提取部位抗炎有效成分的特征信号峰为m/z 103.99、259.97、274.11、318.14、593.17，水提取物有效成分的特征信号峰为m/z 103.99、274.11、318.14、453.16、701.38。结合文献，对其中6个信号峰进行了可能的归属，识别出3个香豆素成份、1个生物碱成份和1个其它化合物。根据归属结果，乙醇提取部位和水提取部位的抗炎作用可能来源于香豆素和生物碱的协同作用。目前，尚未见石椒草单个化学成分的抗炎效果报道，未来可对提取物进行分离纯化，获取单组分组并对其抗炎效果进一步研究。