基于HPLC-HESI-HRMS 的水冬瓜根皮化学成分分析

韩忠耀，胡恩明，邓先扩，李 燕，张林甦，曹 芳，陈建宇，周福军

（1.黔南民族医学高等专科学校，贵州都匀 558000；2.贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳 550014；3.南开大学农药国家工程研究中心，天津 300071；4.天津药物研究院，天津 300301）

水冬瓜根皮来源于山茱萸科植物有齿鞘柄木Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（ Harms）Hu 的干燥根皮[1]，别名大接骨丹。中华本草（苗药卷）记载山茱萸科植物有齿鞘柄木Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 来源于根、根皮、树皮和叶[2]，以根皮入药[1,3]，该药材同时被诸多本草所收载[4−6]。相关研究表明，大接骨丹药材中主要含有β-谷甾醇[7−8]、7-羟基-3-乙基苯酚[7]、3β-甲氧基-豆甾-7-烯[7]、谷甾烷[7]、（E）-对甲基苯丙烯醛[7−8]、豆 甾-7-烯-3-醇[7]、邻,对-二 甲 氧 基 苯 甲酸[7−8]、β-胡萝卜苷[7−9]、熊果酸[7]、正十八烷酸[7]、二十二烷酸[7]、7-羟基-6-甲氧基香豆素[8]、硬脂酸[8−9]、软脂酸[7−9]、 syringo ylglycerol[8]、 2H-1-benzopyr-an-2-one[8]、3,5-二甲氧基苯甲醛[8]、9H-pyrano[2, 3-f]-1,4-benzodio xin-9-one[8]、7-羰 基-β-胡 萝 卜 苷[8]、10-griselinosidic acid[8,10]、丁香树脂酚[9]、豆甾醇[9]、3,4,5,7-四羟基-苯乙酸[9]、豆甾-5,11-二烯-3β-醇[9]、22,23-二 氢 豆 甾 醇[9]、 26,27-dinor-4,4-dimethylcholesta-8,14-dien-3-ol[9]、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛[9]、Griselinoside[10]、紫 丁 香 苷[10]、Coniferin[10]、Quercetin-3-O-glucoside[10]、Astragalin[10]、Phytol[10]、金丝桃苷[11]、异槲皮苷[11]等。

液质联用技术[12−14]，在快速鉴别或推断中药、民族药化学成分具有快速、科学、可靠、绿色等优点，同时，也被广泛应用于食品中农残快速检测[15−17]、水产品安全监测[18]、保健功能食品活性成分快速分析[19−20]等。当前，针对贵州特色民族药水冬瓜根皮相关研究，除上述化学成分外，主要集中在生物活性[21−23]、工艺优化[24]、近红外快速检测[25]、质量分析[26]及指纹图谱[27]等，尚未针对水冬瓜根皮药材化学成分HPLC-HRMS 相关研究，因此，本试验拟以水冬瓜根皮药材为研究样本，采用HPLC-HESIHRMS 技术，对水冬瓜根皮药材甲醇提取物中的主要化学成分进行推断分析，为阐明水冬瓜根皮的药效物质基础提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

乙腈 色谱纯，西陇化工股份有限公司；甲酸AR，天津市恒兴化学试剂制造有限公司；甲醇 AR，重庆江川化工（集团）有限公司；水 为超纯水，自制；其他试剂 均为分析纯；水冬瓜根皮药材 自采于贵州省都匀市杉木湖沟渠（经度：26°15′46.16″N；纬度：107°30′52.33″E，海拔807 m），药材经韩忠耀副教授鉴定为山茱萸科植物有齿鞘柄木Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 的根皮。

Thermo Scientific Q Exactive Focus 高分辨Orbitrap 质谱仪、Dionex Ultimate 3000 RSLC 液相仪 Thermo Fisher Scientific；Sartorius BT25S 电子天平 十万分之一，德国塞多利斯公司；101-3AB 型烘箱 天津市泰斯特；双列六孔水浴锅 常州中捷实验仪器制造有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 供试品溶液的制备 自采药材烘箱60 ℃下烘干，粉碎机粉碎后过65 目筛（筛孔平均内径（250±9.9）μm），混匀，备用。称取药材粉末约0.5 g，精密称定，置100 mL 圆底烧瓶中，精密加入甲醇100 mL，回流提取1 h，放冷，过滤于100 mL 量瓶中，用甲醇补足滤液至刻度，摇匀。滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

1.2.2 液相检测条件 色谱柱：ThermoFisher Hypersil GOLD aQ C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.9 μm），流速：0.3 mL/min，柱温：40 °C，进样量：5 μL，采用梯度洗脱，流动相B 为0.1%甲酸水溶液，C 相为乙腈（0.1%甲酸），具体洗脱条件：0～2 min：95%B；2～42 min：95%～5% B；42～47 min：5% B；47～47.1 min：5%～95% B；47.1～50 min：95% B。

1.2.3 HRMS 质谱条件 采用热电喷雾离子源（HESI）；扫描模式：正负离子模式同时采集Full MSddms2；质量扫描范围m/z ：100～1500 Da；频谱数据类型（Spectrum data type）：Profile；数据分辨率（Resolution）：Full MS: 70000；MS/MS: 17500；自动增益控制数量（AGC target）：Full MS:1e6，MS/MS:2e5；最小注入时间（Maximum IT）：100 ms（Full MS）， 50 ms（MS/MS）；循环计数（Loop count）：3；MSX 计数（MSX count）：1；隔离宽度（Isolation width）：1.5 m/z；NCE（阶梯NCE）：20、40、60；最小AGC 目标（Minimum AGC target）：8e3；强度阈值（Intensity Threshold）：1.6e5；喷雾电压：正离子3.0 kV；负离子2.5 kV；鞘气（sheath gas flow rate）:35；辅助气（aux gas flow rate）:10；吹扫气（sweep gas flow rate）:0；离子传输管温度（capillary temp）: 320 ℃。

1.3 数据处理

数据采集通过赛默飞世尔U3000UPL 液相色谱串联Q Exactive Focus Orbitrap 高分辨质谱仪，并采用Thermofish Scientific 公司化合物分析软件Compound Discoverer 3.0 进行定性分析，通过软件内中药材数据库及mZcloud 数据库匹配可推测化合物的类型。

2 结果与分析

2.1 LC-MS 成分检测

采用HPLC-HESI-HRMS 对水冬瓜根皮中的化学成分进行定性分析，（+）HESI-MS 和（−）HESIMS 的质谱总离子图（TIC），见图1。

图1 水冬瓜根皮中正离子（A）和负离子（B）模式的总离子图Fig.1 Total ion current chromatogram in positive （A） and negative （B） ion mode of Toricellia Angulata （Harms） Hu

2.2 水冬瓜根皮甲醇提取物化学成分分析

通过HPLC-HESI-HRMS 检测得到水冬瓜根皮中各化学成分的保留时间和HRMS 信息，并结合离子总图、Compound Discoverer 3.0 数据库及相关文献数据对比进行化学成分推断，水冬瓜根皮药材中化学成分推断结果见表1。

表1 水冬瓜根皮化学成分分析Table 1 Analysis on chemical compositions of Toricellia Angulata （Harms） Hu

2.3 化学成分的质谱解析

续表 1

2.3.1 有机酸类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出10 个有机酸类化合物，其中化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 分别为DL-马来酸、柠檬酸、右旋奎宁酸、1-咖啡酰奎宁酸、异绿原酸A、壬二酸、邻苯二甲酸单丁酯、（15Z）-9,12,13-三羟基-15-十八烯酸、十二碳二元酸、十二烷二酸2,2'-亚甲基双（4-甲基-6-叔丁基苯酚），这10 个化合物结构相似，含有酚羟基或羧基等，为有机酸类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物1 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为133.01329，在二级质谱中，其准分子离子峰丢失一分子CO2形成特征碎片离子m/z89.02328[M-CO2-H]-；化合物2 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为191.01930，在二级质谱中，其准分子离子峰丢失两分子H2O 与一分子CO2形成特征碎片离子m/z111.00770[M-CO2-2H2O]-，这与文献[28]报道柠檬酸MS/MS 裂解规律一致；化合物3 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为191.05556，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子 H2O 形成特征碎片离子m/z173.04520 [M-H2O-H]-；化合物4 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为353.08820，在二级质谱中，其准分子离子峰酯基断开脱去结构中右侧一分子邻二酚部分C9H6O3形成特征碎片离子m/z191.05562 [M-C9H6O3-H]-，又脱去一分子H2O 或脱去一分子HCHO 分别形成特征碎片 离 子m/z173.04503 [M-C9H6O3-H2O-H]-、m/z161.02371 [M-C9H6O3-HCHO-H]-；化合物5 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为515.12006，在二级质谱中，其准分子离子峰酯基断开脱去结构中右侧一分子邻二酚部分C9H6O3形成特征碎片离子m/z353.08835 [M-C9H6O3-H]-，其准分子离子峰酯基断开脱去结构中左侧与右侧共两分子邻二酚部分C9H6O3形成特征碎片离子m/z191.05562 [M-2C9H6O3-H]-，这与文献[29]报道异绿原酸A MS/MS 裂解规律一致；化合物6 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为187.09709，在二级质谱中，其准分子离子脱去一分子H2O 与一分子CO2或脱去一分子CO2或脱去一分子分别形成特征碎片离子m/z125.09621 [M-H2OCO2-H]-、m/z143.10704 [M-CO2-H]-、m/z159.87854[M-CO-H]-；化合物7 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为221.08171，在二级质谱中，其准分子离子脱去一分子CO2或脱去一分子CO 或脱去一分子HCOOH 或脱去一分子CH3（CH2）3COOH 分别形成特征碎片离子m/z177.09152 [MCO2-H]-、m/z193.08603 [M-CO-H]-、m/z175.07671[M-HCOOH-H]-、m/z121.02848 [M-CH3（ CH2）3COOH]-；化合物8 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为329.23376，在二级质谱中，其准分子离子脱去一分子CH3CH2CH=CHCH2CH2OH 或脱去一分子CH3（CH2）7COOH 分别形成特征碎片离子m/z229.14424 [M-CH3CH2CH=CH CH2CH2OH-H]-、m/z171.10197 [M-CH3（ CH2）7COOH-H]-；化合物9 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为229.14442，在二级质谱中，其准分子离子脱去一分子H2O 或脱去一分子H2O 与一分子CO2分别形成特征碎片离子m/z211.13370 [M-H2O-H]-、m/z167.14343 [M-H2OCO2-H]-；化合物10 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为339.23337，在二级质谱中，其准分子离子从两个苯环连接处（C11H15O-CH2-C11H15O）裂解成相同的两分子C12H18O，形成特征碎片离子m/z163.11212 [M-C12H18O]-。

2.3.2 生物碱类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出4 个生物碱类化合物，其中化合物11、12、13、14 分别为腺苷、环（苯丙酰基-脯氨酰）、N-[5-（4-氧代-3，4-二氢二嗪-1-基）-1H-苯并[d]咪唑-2-基]氨基甲酸甲酯、二甲十三烷吗啉，这4 个化合物结构相似，均为生物碱类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物11 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为268.10437，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去糖链（C5H10O4）形成特征碎片离子m/z136.06204 [M-C5H10O4]+，符合腺苷的裂解规律；化合物12 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为245.12880，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子NH3或脱去一分子CO2分别形成特征碎片离子m/z227.11772[M-NH3]+或m/z203.11798 [M-CO2+H]+；化 合 物13 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为336.10820，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CO2或脱去一分子CH3COONH2分别形成特征碎片离子m/z292.09766 [M-CO2+H]+、m/z260.09247 [M-CH3COONH2]+；化合物14 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为298.31061，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3（CH2）11CH3后，N 环形成特征碎片离子m/z115.09944 [M-CH3（CH2）11CH3]+。

2.3.3 氨基酸类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出1 个氨基酸类化合物，化合物15 为L-亮氨酸。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物15 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为132.10223，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CO2形成特征碎片离子m/z86.09720[M-CO2+H]+，与文献[30]报道L-亮氨酸的特征碎片离子m/z86.2 一致，符合L-亮氨酸的裂解规律。

2.3.4 苯丙素类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出2 个苯丙素类化合物，其中化合物16、17 分别为甘油酸甲酯、肉桂醛，这2 个化合物结构相似，均为苯丙素类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物16 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为193.08610，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子H2O 与一分子CO2形成特征碎片离子m/z131.04926 [M-CO2-H2O+H]+；化合物17 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为133.06503，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CO 或脱去一分子甲醛形成特征碎片离子m/z105.07033 [M-CO+H]+、m/z103.05461 [M-HCHO+H]+。

2.3.5 酯类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出2 个酯类化合物，其中化合物18、19 分别为三甲基三烯酸酯、己二酸二（2-乙基己基）酯，这2 个化合物结构相似，均为酯类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物18 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为253.07085，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子H2O 与一分子CO 或脱去一分子乙酸或脱去两分子乙酸分别形成特征碎片离子m/z207.02899 [M-COH2O+H]+、m/z193.04967 [M-CH3COOH+H]+、m/z133.02855 [M-2CH3COOH+H]+；化合物19 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为371.31570，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3（CH2）3CH（CH2CH3）CH2OH 或脱去两分子CH3（CH2）3CH（CH2CH3）CH2OH 分别形成特征碎片离子m/z241.18062 [M-CH3（CH2）3CH（ CH2CH3） CH2OH+H]+、m/z111.04444 [M-2CH3（CH2）3CH（CH2CH3）CH2OH+H]+。

2.3.6 萜类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出2 个萜类化合物，其中化合物20、21 分别为断氧化马钱苷、马兜铃酮，这2 个化合物结构相似，均为萜类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物20 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为403.12503，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3OH 形成特征碎片离子m/z371.09811 [M-CH3OH-H]-，其准分子离子峰脱去醚键左侧一分子C6H11O5形成特征碎片离子m/z241.07170 [M-C6H11O5]-，又失去一分子H2O 形成特征碎片离子m/z223.06068 [M-C6H11O5-H2O]-，接着又失去一分子CO2或一分子CH3OH，分别形成特征碎片离子m/z179.07065 [M-C6H11O5-CO2]-或m/z191.03514 [M-C6H11O5-CH3OH]-；化合物21 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为219.17458，在二级质谱中，MS/MS 特征碎片离子m/z203.14403、m/z91.05507 与文献[31]报道的m/z203、m/z91 相符，化合物21 为马兜铃酮。

2.3.7 芳香含氧衍生物类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出2 个芳香含氧衍生物类化合物，其中化合物22、23 分别为3,5-二叔丁基-4-羟基苯甲醛、二异丁基酞酸盐，这2 个化合物结构相似，均为芳香含氧衍生物类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物22 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为235.16948，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子H2O 或脱去一分子H2O 与一分子CO 或脱去两分子CO 分别形成特征碎片离子m/z217.12384 [M-H2O+H]+、m/z189.03033 [M-H2O-CO+H]+、m/z179.10675 [M-2CO+H]+；化合物23 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为279.15936，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH（CH3）2CH2OH或脱去一分子CH（CH3）2CH2OH 与一分子CO 分别形成特征碎片离子m/z205.08472 [M-CH（CH3）2CH2OH+H]+、m/z149.02345 [M-CH（CH3）2CH2OHCO+H]+。

2.3.8 酰胺类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出4 个酰胺类化合物，其中化合物24、25、26、27 分别为棕榈基单乙醇酰胺、十六碳酰胺、硬脂酰胺、油酸乙酰胺，这4 个化合物结构相似，均为酰胺类化合物。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物24 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为300.28992，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子H2O 或脱去一分子H2O 与一分子CO2分别形成特征碎片离子m/z282.27850[M-H2O+H]+、m/z238.06746 [M-H2O-CO2+H]+；化合物25 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为256.26370，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CO 或脱去一分子H2O 与一分子CO 或脱去一分子CH3（CH2）5CH3或脱去一分子CH3（CH2）9CH3或脱去一分子CH3（CH2）11CH3分别形成特征碎片离子m/z228.13831 [M-CO+H]+、m/z210.03716 [M-H2O-CO+H]+、m/z155.05942 [MCH3（CH2）5CH3]+、m/z100.07642 [M-CH3（CH2）9CH3+H]+、m/z71.08627 [M-CH3（CH2）11CH3]+；化合物26 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为284.29514，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3（CH2）12CH3或脱去一分子CH3（CH2）13CH3或脱去一分子CH3（CH2）14CH3分别形成特征碎片离子m/z85.10201 [M-CH3（CH2）12CH3]+、m/z72.04524 [M- CH3（CH2）13CH3+H]+、m/z57.07080 [M-CH3（CH2）14CH3]+；化合物27 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为310.31052，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3（CH2）7CH=CHCH2CH3或脱去一分子CH3（ CH2）7CH=CH（ CH2）2CH3或 脱 去 一 分 子CH3（ CH2）7CH=CH（ CH2）5CH3或 脱 去 一 分 子CH3（CH2）7CH=CH（CH2）6CH3分别形成特征碎片离子m/z142.12238 [M-CH3（CH2）7CH=CHCH2CH3+H]+、m/z128.10721 [M-CH3（CH2）7CH=CH（CH2）2CH3+H]+、m/z85.05311 [M-CH3（CH2）7CH=CH（CH2）5CH3+H]+、m/z72.08159 [M-CH3（CH2）7CH=CH（CH2）6CH3+H]+。

2.3.9 其他类化合物 从水冬瓜根皮甲醇提取物中共推断出9 个其他类化合物，其中化合物28、29、30、31、32、33、34、35、36 分别为十二烷基硫酸酯、十二烷基苯磺酸、Myristyl sulfate、磷酸三苯酯、磷酸三（2-丁氧基）乙酯、甘油磷酸-N-棕榈酰乙醇胺、Citroflex A-4、Citroflex 4、1,2-环己烷二羧酸二异壬酯。分析此类化合物的裂解规律时发现，化合物28 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为265.14810，在二级质谱中，其准分子离子峰烃与氧断开，脱去一分子H3C（CH2）10CH3形成特征碎片离子m/z96.95894 [M-H3C（CH2）10CH3]-；化合物29 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为325.18460，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去一分子H3C（CH2）8CH3形成特征碎片离子m/z183.01149 [M-H3C（CH2）8CH3-H]-；化合物30 在负离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M-H]-为293.17953，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去一分子H3C（CH2）12CH3形成特征碎片离子m/z96.95892 [M-H3C（CH2）12CH3-H]-；化合物31 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为327.07849，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去一分子C6H5OH 形成特征碎片离子m/z233.03616 [M-C6H5OH+H]+；化合物32 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为399.25095，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去三分子CH3（CH2）2CH3或脱去一分子CH3（CH2）2OCH2CH3或脱去两分子CH3（CH2）2OCH2CH3分别形成特征碎片离子m/z225.08896 [M-3CH3（CH2）2CH3+H]+、m/z299.16177 [M-CH3（CH2）2OCH2CH3+H]+、m/z199.07320 [M-2CH3（CH2）2OCH2CH3+H]+；化合物33 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为454.29321，在二级质谱中，其准分子离子峰烃脱去一分子H2O 形成特征碎片离子m/z436.28110 [M-H2O+H]+；化合物34 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为403.23337，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子O（CH2）3CH3与丢失一分子（CH2）3CH3缩合成含二酮的五元环醚，形成特征碎片离子m/z273.09760[M-O（CH2）3CH3-（CH2）3CH3+H]+，其准分子离子峰脱去两分子丁基及氧O（CH2）3CH3形成特征碎片离子m/z259.15393 [M-2O（CH2）3CH3+H]+，其准分子离子峰脱去三分子O（CH2）3CH3并补H 形成特征碎片离子m/z185.08092 [M-3O（CH2）3CH3+H]+；化合物35 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为361.22223，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去两分子丁基及O（CH2）3CH3形成特征碎片离子m/z213.07573 [M-2C4H10O+H]+，其准分子离子峰脱去三分子丁基及O（CH2）3CH3形成特征碎片离子m/z139.00267 [M-3C4H10O+H]+；化合物36 在正离子模式下，一级质谱中准分子离子峰为m/z[M+H]+为425.36270，在二级质谱中，其准分子离子峰脱去一分子CH3CH（CH3）（CH2）6OH 形成特征碎片 离 子m/z281.21057 [M-CH3CH（CH3）（CH2）6OH+H]+。

3 结论与讨论

预实验过程中，比较正、负离子模式下总离子图时，发现水冬瓜根皮中化学成分在正、负离子模式下均有较好的响应值，可能与Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 所含化学成分类型丰富相关，化学成分种类推断结果表明其含有机酸类、生物碱类、氨基酸类、苯丙素类、酯类化、萜类、芳香含氧衍生物、酰胺及其他类化合物，研究结果证实了预实验水冬瓜根皮中化学成分在正、负离子模式下均有较好的响应值的原因。

课题组建立了水冬瓜根皮甲醇提取物的HPLCHESI-HRMS 快速分析方法，结合Thermofish Scientific公司化合物分析软件Compound Discoverer 3.0，通过软件内中药材数据库及mZcloud 数据库匹配及相关文献数据，推测化合物的类型，初步推断出水冬瓜根皮甲醇提取物中36 个化学成分，包括10 个有机酸类化合物，4 个生物碱类化合物，1 个氨基酸类化合物，2 个苯丙素类化合物，2 个酯类化合物，2 个萜类化合物，2 个芳香含氧衍生物类化合物，4 个酰胺类化合物，9 个其他类化合物。

本实验采用液质联用技术对黔产水冬瓜根皮中化学成分进行快速鉴别研究时，发现黔产水冬瓜根皮与文献[7−10]湖北恩施自治州、云南丽江等大接骨丹药材中成分呈现显著性地域差异特征。Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 化学成分的差异可能与植物生长的地理位置、土壤、温度、水分、海拔高度等密切相关，导致Toricellia AngulataOliv.var.intermedia（Harms） Hu 植物体二次代谢产物差异性较大，相关研究有待进一步深入。