一例鹌鹑大肠杆菌病的诊治

刘风波 冯晓东 连亮亮

摘  要：文章对鹌鹑疑似大肠杆菌病进行实验室确诊，通过药敏试验筛选敏感药物，并结合综合防制措施以预防鹌鹑大肠杆菌病。

关键词：鹌鹑大肠杆菌病；实验室确诊；药敏试验

中图分类号：S854.5+3 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2024）02-0068-03

鹌鹑大肠杆菌病是由埃希大肠杆菌（Escherichi coli）感染鹌鹑引起的一种常见病。该病一年四季均可发生，可感染各年龄段鹌鹑，一般6月龄后的鹌鹑发病率较高，虽不会引起大群暴发性死亡，但对产蛋率及蛋品质影响很大，加之反复发作，往往会带来巨大经济损失[1]。大肠杆菌广泛分布于自然界中，畜禽都易感染。该病主要通过消化道感染鹌鹑，发生的主要原因是饲养密度过大，笼舍消毒不彻底，卫生条件差。饲养管理不善，饲养环境长期潮湿不洁，气温突变，过度炎热及疫苗接种造成的应激反应，都能诱发该病和加重病情；某些疾病，如新城疫、呼吸道病，常并发或继发感染。

1  材料和方法

1.1 病例来源

本地养殖户饲养的2月龄鹌鹑发病，送检时已死亡。问诊得知鹌鹑拉白色稀粪，产蛋率下降，产软壳蛋、破壳蛋增多，户主曾滴鼻点眼接种新城疫疫苗，并在饮水中添加环丙沙星进行控制，不见好转。

临床上，发病鹌鹑消瘦，上下眼睑肿胀，两腿前后伸张，肛门周围绒毛污秽不堪。剖检发现，尸体眼前房积脓；肝肿胀，呈暗红色；肝脏、心脏表面均有一层灰白色纤维素性薄膜覆盖；胆囊肿大，胆汁充盈；小肠胀气，黏膜增厚；肺肠充血出血；输卵管肿胀；卵巢变形。

1.2 主要试剂

麦康凯琼脂，普通营养琼脂，伊红美蓝琼脂，三糖铁琼脂，甲基红试剂，葡萄糖蛋白胨水培养基，营养肉汤，革兰染液。药敏片包括阿莫西林（amoxicillin，AMX）、氨苄西林（ampicillin，SU）、头孢噻肟（ceftizoxime，CTX）、头孢他啶（ceftazidime，CED）、头孢曲松钠（ceftriaxone sodium，CFX）、卡那霉素（kanamycin，K）、庆大霉素（gentamicin，GM）、氟苯尼考（florfenicol，FF）、泰乐菌素（tylosin，TL）、硫酸红霉素（erythromycin sulfate，E）、利福平（rifampicin，RA）、氧氟沙星（ofloxacin，OFL）、诺氟沙星（norfloxacin，NOR）、环丙沙星（ciprofloxacin，CIP）、恩诺沙星（enophthalmin，ENR），均为自制[1]，密封低温保存备用。

1.3 细菌的分离培养

无菌条件下，取发病鹌鹑的肝、心脏切片样本，分别划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板及营养肉汤，于37 ℃培养24 h后观察结果。

1.4 涂片染色镜检

挑取普通琼脂平板上可疑菌落涂布于载玻片上，革兰染色，在油镜下观察菌落形态。

1.5 生化试验[2]

1.5.1 糖类分解试验

挑取普通琼脂平板上可疑菌落，随后接种于各种糖培养基上，在37 ℃恒温箱中培养24 h，观察结果。

1.5.2 硫化氢试验

挑取普通琼脂平板上可疑菌落，接种于营养肉汤中，置于37 ℃恒温箱培養6～8 h。用无菌接种针蘸取纯培养物，沿管壁作穿刺三糖铁培养基，37 ℃下培养24 h，随后观察培养基颜色变化。

1.5.3 甲基红试验

取1.5.2培养的肉汤培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，在37 ℃恒温箱中培养24 h，取出后加甲基红试剂3滴，观察培养基颜色变化。

1.5.4 运动力检查

灭菌接种针蘸取1.5.2培养的肉汤培养物，垂直刺进半固体培养基的琼脂柱中间直至管底，置37 ℃恒温箱中培养18 h，而后取出检查。

1.6 动物试验

选取体重18～20 g小白鼠4只做动物试验。挑取普通琼脂平板上的单个菌落接种于营养肉汤中，置于37 ℃恒温箱中培养6～8 h，取1 mL菌液，用生理盐水10倍稀释，每只小鼠腹腔接种0.2 mL稀释的菌液，饲养观察结果。

1.7 药敏试验

采用纸片琼脂扩散法（Baner-Kirby建立的K-B法）[3]进行药敏试验。

2  试验结果

2.1 细菌培养特性

普通琼脂平板上长出形态凸起、光滑湿润、灰白色、半透明、边缘整齐、有特殊的粪便样臭味的大菌落。麦康凯琼脂平板上长出粉红色大菌落，稍凸起，表面光滑湿润，菌落边缘波状。伊红美蓝琼脂平板上为圆形蓝紫色菌落，中心为紫黑色带金属光泽。肉汤呈均匀浑浊，管底有黏液样沉淀物。

2.2 染色镜检结果

油镜下观察到单个散在的两端钝圆的革兰阴性短杆菌。

2.3 生化培养

2.3.1 分离菌发酵特点

分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、木糖、甘露醇，产酸产气，产生靛基质，不发酵蔗糖。

2.3.2 培养基变化

培养基颜色无变化，未产生硫化氢。

2.3.3 培养液变化

培养液为黄色，甲基红试验为阴性。

2.3.4 运动力观察

检查见由穿刺线向四周扩散生长，周围的培养基变浑浊，该菌具有运动力。

2.4 动物试验

小鼠接种菌液后，在18 h内全部死亡。取死亡小鼠心脏和肝脏切片样本、腹水样本，制成抹片，革兰染色镜检，并将样本划线接种于麦康凯琼脂平板上，置于37 ℃恒温箱内培养24 h后观察结果。镜检结果为两端钝圆的革兰阴性短小杆菌，麦康凯琼脂培养基表面有粉红色、稍凸起、表面光滑湿润、菌落边缘波状的大菌落。与从原发病鹌鹑的样本中分离出的菌株形态一致。综上试验结果可判断，从原发病鹌鹑中分离出的细菌为致病性大肠杆菌[4]。

2.5 药敏试验结果

药敏试验结果如表1所示。按以下标准判定[5]：抑菌圈直径大于20 mm为极度敏感；抑菌圈直径大于15 mm且不超过20 mm为高度敏感；抑菌圈直径大于10 mm且不超过15 mm为中度敏感；抑菌圈直径大于0且不超过10 mm为耐药。

3  分析与讨论

3.1 药敏试验结果分析

本研究表明，引起本地养殖户2月龄鹌鹑发病的致病性大肠杆菌对头孢噻肟（CTX）、头孢曲松钠（CFX）、庆大霉素（GM）和头孢他啶（CED）极度敏感，对氟苯尼考（FF）高度敏感，对阿莫西林（AMX）、氨苄西林（SU）、卡那霉素（K）、泰乐菌素（TL）、硫酸红霉素（E）、利福平（RA）、氧氟沙星（OFL）、诺氟沙星（NOR）、环丙沙星（CIP）和恩诺沙星（ENR）耐药。因此，头孢菌素类抗生素、胺基糖苷类抗生素、氯霉素类抗生素可作为治疗药物。

3.2 大肠杆菌病发病原因分析

3.2.1 环境因素

饲养环境卫生条件差、管理不當与大肠杆菌病有着密切的关系。当舍内空气不好，阴暗潮湿，尘埃过重，饲料饮水等被大肠杆菌污染时，易使大肠杆菌通过呼吸道和消化道感染鹌鹑，从而引起发病。部分养殖户未对设施进行消毒，或者对消毒工作不重视，大量重复地滥用药物，致耐药菌株产生。大多数养殖户在鹌鹑群发病时，便“病急乱投医”，也不考虑药物是否有效，或者一旦有效，便长时间大量使用同一种抗菌药，结果导致大肠杆菌耐药性增加，鹌鹑的免疫力急剧下降，最后不但不能治疗疾病，反而造成耐药菌株种类超标[6]，造成大肠杆菌的发生与流行。

3.2.2 应激因素

在正常情况下鹌鹑的肠道内存在大量的大肠杆菌，舍内也广泛存在大肠杆菌，当饲养管理、环境卫生条件变差，特别是鹌鹑群受到环境因素的影响，如高温，转群，惊吓，饲养密度过大，突然更换饲料，机体内环境发生改变而使抵抗力下降，导致大肠杆菌病发生。

参考文献

[1] 陆承平．兽医微生物学[M]．5版．北京：中国农业出版社，2013.

[2] 姚火春．兽医微生物学实验指导[M]．2版．北京：中国农业出版社，2004.

[3] （美）卡尔尼克（Calnek B. W.）主编．高福，刘文军主译．禽病学：第9版[M]．北京：中国农业大学出版社，1991.

[4] 甘肃农业大学．兽医微生物学[M]．2版．北京：农业出版社，1991.

[5] 朱模忠．兽药手册[M]．北京：化学工业出版社，2002.

[6] 崔增学，高树云．耐药性大肠杆菌病的诊治[J]．中国禽业导刊，2002，19（9）：33.