胸腔积液细胞块中临床病理技术的应用分析

文/高明悦，刘杜先，孟俊弘，龚程，张晓雅

胸腔积液细胞块是指在胸腔积液中存在的大量细胞聚集体。胸腔积液是指在胸腔腔隙中异常积聚的液体，可以包括多种成分，如红细胞、白细胞、上皮细胞、肿瘤细胞等[1]。当积液中存在大量细胞聚集时，称之为胸腔积液细胞块。胸腔积液细胞块的出现通常是胸腔积液的病理性变化，可能与多种原因有关。最常见的原因之一是恶性肿瘤，如肺癌、乳腺癌等可侵犯胸部组织并导致积液的产生，细胞块中可能存在肿瘤细胞。此外，炎症反应也是导致胸腔积液细胞块的原因之一。肺部感染、结核等疾病会引起炎症反应，细胞块中可能存在炎症细胞和病原体[2]。胸腔积液细胞块的检测通常通过胸腔穿刺或经支气管镜检查获取胸腔积液样本，并使用显微镜观察细胞形态和结构，进一步鉴定细胞的类型。细胞块的形态可能在不同疾病中有所不同，但肿瘤细胞通常具有异型性和异常增殖的特点。对胸腔积液细胞块的鉴定有助于诊断和治疗相关疾病[3]。根据细胞块的类型和数量，可以判断胸腔积液的病因，以指导后续治疗方案的选择。例如，如果细胞块中存在大量恶性肿瘤细胞，可能需要进一步进行肿瘤标志物检测和组织病理学分析，以确定肿瘤的类型和分级，从而制定个体化的治疗方案。本研究意在分析临床病理技术在胸腔积液细胞块检查中的具体诊断效果，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究对象为胸腔积液患者150 例，入院时间为2021 年3 月至2023 年3 月，其中男性患者82 例，女性患者68 例，患者年龄分布范围为32～76 岁，平均年龄为（56.98±6.33）岁。患者经临床综合诊断，确诊为胸腔积液；患者了解本次研究的相关信息，并同意参与。排除身患其他癌变的患者；依从性较低，无法正常交流者；出现免疫系统疾病者。

1.2 方法

（1）常规细胞涂片检测：①收集样本：胸腔积液通常通过穿刺抽取获取，收集积液样本到干净的容器中，确保样本的新鲜和完整。②样本准备：将涂片检查所需的样本均匀地涂于玻片上。③固定：将样本的玻片迅速放入固定剂中，在固定剂中静置一段时间（通常为5～10min），确保细胞附着于玻片上并保持其形态。④染色：使用染色剂（苏木苏染色、偏碱性品红染色、格里姆染色等）对固定的细胞进行染色，目的是加强对细胞的观察和分析。⑤干燥：将染色后的玻片通风自然干燥，使其保存完好。⑥观察：用显微镜对干燥后的玻片进行观察和分析。观察细胞的形态、结构、数量、染色情况等，依据细胞的特征进行诊断和分析。⑦报告和解读：根据观察结果，细胞学专业人员将分析和诊断结果记录在报告中，解读细胞的异常情况并作出相应的建议和处理方案。

（2）细胞块免疫组化法检测：①收集样本：首先，从患者胸腔积液中采集样本。这可以通过胸腔穿刺或胸腔造口术进行。收集的样本应尽快送到实验室进行处理。②样本制备：将收集到的胸腔积液样本转移到离心管中，并使用离心机将离心管以3000rpm 的速度离心5min，以沉淀细胞。离心后，将上清液倒掉，保留细胞沉淀。③细胞固定：使用10%的中性缓冲福尔马林固定细胞。将10%的福尔马林添加到细胞沉淀中，进行充分混匀，然后静置固定15min。④制作细胞块：将固定的细胞沉淀放入孔板或玻片中，然后加入熔化的琼脂糖。然后将玻片或孔板放置在冰上或冷却平台上，使琼脂糖凝固形成细胞块。⑤切片：将固化的细胞块从玻片或孔板上切割下来，厚度通常为4～6 微米。使用切片机或切片刀进行切割，并将切片转移到玻片上。⑥抗原检测：使用特定的抗体来检测细胞块中的特定抗原。根据具体的实验目的，选择合适的抗体进行染色。⑦免疫染色：将细胞块上的切片进行抗体与抗原的结合反应。首先，使用蛋白抗原阻断剂封闭非特异性结合位点，然后加入一抗体，使其与目标抗原结合。接着加入适当的二抗（带有特定荧光染料的抗体），使其与一抗结合，并形成标记物抗原复合物。⑧洗涤与固定：用缓冲液洗涤切片，以去除未结合的抗体。洗涤过程中通常重复3 次。最后，使用适当的固定液固定切片。⑨观察与分析：使用荧光显微镜观察切片，观察抗原与荧光标记的抗体的结合情况。根据荧光标记的抗体的颜色和位置，可以确定抗原的表达情况和细胞类型。

1.3 观察指标

（1）诊断结果分析：以手术病理结果为 “金标准” ，对患者进行常规细胞涂片法与细胞块免疫组法检测，分析两种检查结果的准确率情况；

（2）对比常规细胞涂片法与细胞块免疫组化法诊断效能：分为灵敏度、特异性以及准确度。其中准确度=（阳性+阴性）例数/总例数×100%；灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%；特异度=真阴性/（真阴性+假阳性）×100%；

（3）观察两种技术下，在胸腔积液样本中细胞角蛋白（CK7、CK5/6）、癌胚抗原（CEA）、甲状腺转录因子1（TTF-1）、细胞中Wilms 肿瘤有关的基因（WT-1）的表达情况。

1.4 统计学方法

本次研究使用SPSS21.0 软件进行数据分析，计数资料以百分比表示，组间比对使用卡方值，计量资料以均数±标准差表示，t 值进行组间检验；P＜0.05，有统计学意义。

2 结果

2.1 对比两种技术诊断结果

以手术病理检测为金标准，150 例胸腔积液患者中，阳性病例113 例，阴性病例37 例，对比两组不同检测技术可知，细胞块免疫组化法诊断结果优于常规细胞涂片法（见表1）。

表1 对比不同技术方式结果分析

2.2 比较两种技术的诊断效能

依据诊断结果，对比两种技术的诊断效能，细胞块免疫组化法均优于常规细胞涂片法（P＜0.05），数值见表2。

表2 对比两种技术的诊断效能[n(%)]

2.3 不同抗体在腺癌细胞与间皮性肿瘤细胞中的表达

在确诊的113 例患者中，腺癌患者61 例，间皮癌患者52 例，不同抗体在两种癌细胞中的表达情况比较，差异显著（P＜0.05），数值见表3。

表3 不同抗体的表达情况

3 讨论

胸腔积液是指在胸腔内聚集过多的液体。正常情况下，胸腔内只有极少量的液体（胸腔腔隙液），帮助肺膜的滑动和呼吸运动。然而，当体内出现疾病或其他问题时，胸腔积液可能会形成[4]。这种积液可能来自炎症反应、感染、肿瘤、心脏病、肝肾疾病等等。胸腔积液使得胸腔容量减少，导致呼吸困难、咳嗽、胸痛等症状出现。常用的胸腔积液检查方式有以下几种：（1）胸腔抽液：胸腔抽液是一种常见的胸腔积液检查方式，通过将一根细长的针插入胸腔，吸取胸腔内积聚的液体，并对液体进行病理检测，以评估积液的性质和病因[5]。此外，胸腔抽液还能减轻胸腔积液带来的不适症状，帮助患者恢复呼吸功能。（2）胸腔穿刺：胸腔穿刺是一种微创的检查方法，通过将一根较细的针插入胸腔，直接观察穿刺液体的外观和性质。这种方法可以迅速判断积液的性质，如判断积液是否为血液、脓液或淋巴液。同时，胸腔穿刺还能进行辅助治疗，如引流积液以减轻胸腔压力。（3）胸腔镜检查：胸腔镜检查是一种微创的手术方法，在局麻或全麻下使用胸腔镜探查胸腔内的病变[6]。这种方法可以直接观察积液的性质，如判断是否有恶性细胞存在，以帮助确定病因。

胸腔积液细胞块诊断是一种通过采集胸腔积液进行细胞学检查来确定疾病的诊断方法，是一种常用的临床病理技术，用于确定胸腔积液的原因以及评估患者的病情。胸腔积液细胞块诊断在临床病理中广泛应用，并且常用的技术包括细胞涂片法和细胞块免疫组法[7-8]。细胞涂片法是将胸腔积液经过一系列的前处理后涂布在载玻片上，然后经过染色、显微镜观察和分析。这种技术操作简便、成本低廉，常用于常规病理诊断。通过这种方法可以确定细胞类型和形态，如细胞核的形态、细胞质的颜色等，这些形态学特征可以帮助鉴别疾病的类型，如癌细胞、炎性细胞、淋巴细胞等，对于肿瘤的诊断有一定的参考价值。然而，细胞涂片法也存在一些局限性[9]。首先，由于细胞固定在载玻片上的厚度较薄，细胞形态和细胞排列的信息相对有限，容易出现破损、变形等情况。其次，细胞涂片法对胸腔积液的细胞数量要求较高，如果细胞数量不足，可能会导致诊断困难。此外，细胞涂片法无法提供细胞表面标记物的信息，对于一些需要免疫组化分析的疾病诊断是不够准确的。相比之下，细胞块免疫组法则是一种结合了细胞涂片法与免疫组织化学方法的技术。在细胞块制备过程中，细胞通过离心或刮取等方法使其固定在载玻片上，形成块状，这样可以保留细胞的完整性和三维结构[10]。然后，通过免疫组化技术对细胞块进行抗体染色，在显微镜下观察标记物的表达情况。细胞块免疫组法可以检查多种免疫标记物，如肿瘤相关抗原、细胞增殖标志物、细胞表面标志物等，从而帮助鉴别不同类型的细胞和病理态势。

细胞块免疫组法相对于细胞涂片法具有以下几个优势：（1）提高细胞检测的准确率：细胞块免疫组法采用的是整个细胞块进行免疫染色，相比于细胞涂片法只检测细胞表面的染色，可以更全面地评估细胞的分子表达情况，提高了细胞检测的准确率。（2）保留细胞器结构完整性：细胞块免疫组法不需要对细胞进行固定和染色处理，可以在细胞的原生状态下进行染色，并保持细胞器的结构完整性，有利于观察和研究细胞器的形态和功能。（3）多重抗体共染色：细胞块免疫组法可以同时使用多个标记的抗体进行共染色，通过不同颜色的标记可以同时检测多个蛋白质的表达以及在细胞中的定位，提供了更多信息来研究细胞的功能和相互作用。（4）可应用于多种细胞样本：细胞块免疫组法可以应用于不同来源的细胞样本，包括细胞培养物、组织切片以及体液中的细胞。灵活的应用方式使其在临床诊断和实验室研究中具有广泛的应用前景。（5）能够检测少量细胞：细胞块免疫组法相对于细胞涂片法来说，对样本量的要求较低，可以检测少量的细胞，甚至单个细胞。这使其在罕见细胞检测、肿瘤个体化治疗和微创手术中具有潜在价值。

综上所述，细胞涂片法操作简便，适用于常规病理诊断，在鉴别疾病类型时局限较大；而细胞块免疫组法能提供更为精确的病理诊断信息，但操作复杂且成本较高。医生需要结合临床病史、症状等进行综合判断，选择合适的技术来进行胸腔积液细胞块诊断。