乙型肝炎相关性肝癌患者T淋巴细胞、白介素-28B及高尔基体蛋白73的表达及临床意义

张馨心，刘亚清，崔永辉，许春进

商丘市第一人民医院消化内科，河南 商丘 476000

乙型肝炎病毒（HBV）属于DNA嗜肝病毒，易损伤人体肝细胞，造成肝功能异常［1］。患者多为急性感染，以食欲减退、黄疸、全身乏力为典型症状，严重者可诱发肝硬化或肝癌的发生。肝癌晚期患者1 年内的预后较差，死亡率较高［2］。目前，在临床诊疗中相对缺乏早期肝癌的诊断指标，刘沁雨等［3］在慢性乙型肝炎（CHB）患者的治疗中发现，高尔基体蛋白73（GP73）对代偿期肝硬化患者具有较高的诊断价值。白介素-28B（IL-28B）作为Ⅲ型干扰素家族成员之一，积极参与免疫应答、炎症反应等相关过程，IL-28B 基因多态性与CHB 患者干扰素治疗的应答密切相关已被广泛证实，但其在HBV相关性肝癌中的表达研究较少［4］。而在HBV-DNA 的复制过程中，易造成患者干细胞纤维化程度进一步加剧、机体免疫功能紊乱等情况，从而改变T 淋巴细胞亚群的比例，推测T 淋巴细胞数目和功能的变化，预示着机体免疫状态的失衡［5］。因此，本研究旨在分析乙型肝炎相关性肝癌患者T 淋巴细胞、IL-28B及GP73的表达及临床意义，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年10 月—2021 年10 月商丘市第一人民医院收治的119 例乙型肝炎相关性肝癌患者作为观察组，选取同期体检的112 例健康人群作为对照组。观察组：男63例，女56 例；年龄29～75 岁，平均年龄（49.12±7.34）岁；分化程度为低55 例，中34 例，高30 例；TNM 分期为Ⅰ期41 例，Ⅱ期50 例， Ⅲ期19 例，Ⅳ期9 例。淋巴结转移情况为转移39 例，未转移80 例。对照组：男61 例，女51 例；年龄30～78 岁，平均年龄（50.31±8.04）岁。两组研究对象一般资料具有可比性（P＞0.05）。本研究经医院医学伦理委员会批准通过。

纳入标准：（1）病历资料完整。（2）经病理学检查确诊。（3）之前均未接受放化疗。排除标准：（1）存在自身免疫性疾病。（2）合并其他血液、肿瘤疾病。（3）严重心、肾功能异常。

1.2 方法

血清IL-28B 及GP73、T 淋巴细胞检测：抽取所有患者5 mL 空腹静脉血，其中，2 mL 外周静脉血采用EDTA-K2 抗凝处理，使用流式细胞仪（泛肽生物科技（浙江）有限公司，浙械注准20212220112）检测T 淋巴细胞指标。将另外3 mL 外周静脉血进行离心处理（转速为3 000 r/min，10 min），得到血清后低温储存。使用酶联免疫法检测IL-28B及GP73水平。

临床资料采集：详细记录患者性别、年龄、烟酒史及以往病史，收集患者肿瘤数目、最大直径、淋巴结转移情况及TNM 分期、血清IL-28B 及GP73、T 淋巴细胞水平等资料。通过电话、走访等形式统计观察组患者1 年内的生存情况，终点事件为患者死亡或达到1年随访期。

1.3 观察指标

（1）比较两组研究对象血清IL-28B、GP73 及T 淋巴细胞水平。（2）分析血清IL-28B、GP73 及T 淋巴细胞水平与临床病理特征的关系。（3）对比不同生存情况的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴细胞水平。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0 软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t 检验。计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象IL-28B、GP73及T淋巴细胞水平情况

观察组血清IL-28B、GP73 及CD8+表达水平均高于对照组，CD3+、CD4+及CD4+/CD8+均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组研究对象IL-28B、GP73及T淋巴细胞水平情况（±s）

表1 两组研究对象IL-28B、GP73及T淋巴细胞水平情况（±s）

组别观察组（n=119）对照组（n=112）t值P值GP73（ng/mL）201.34±9.12 40.36±7.19 148.380＜0.001 IL-28B（ρ/pg·mL-1）719.23±152.43 502.34±87.51 13.155＜0.001 CD3+（%）70.34±6.27 78.26±5.96 9.827＜0.001 CD4+（%）41.29±5.03 48.27±5.64 9.939＜0.001 CD8+（%）36.94±4.31 27.91±4.06 16.367＜0.001 CD4+/CD8+（%）0.92±0.15 1.54±0.57 11.453＜0.001

2.2 两组研究对象IL-28B、GP73与病理特征的关系情况

不同年龄、性别、肿瘤直径的HBV相关性肝癌患者血清中IL-28B、GP73 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；有淋巴结转移、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有血管浸润者血清中IL-28B、GP73 水平高于无淋巴结转移、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、有无血管浸润者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组研究对象IL-28B、GP73与病理特征的关系情况（±s）

表2 两组研究对象IL-28B、GP73与病理特征的关系情况（±s）

项目性别例数（例）GP73（ng/mL）t值1.353 P值0.179 IL-28B（ρ/pg·mL-1）t值0.378 P值0.706男 女63 56 198.41±5.01 196.96±6.64 702.26±142.34 692.54±136.97年龄＜60岁≥60岁TNM分期Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期分化程度中、高分化低分化淋巴结转移情况1.827 0.070 0.299 0.765 50 69 198.34±6.24 200.36±5.61 698.23±152.34 706.34±141.09 4.529＜0.001 1.986 0.049 91 28 199.23±5.42 204.64±5.87 662.37±126.41 715.98±119.64 3.583＜0.001 2.125 0.036 64 55 201.84±6.01 205.68±5.61 671.42±124.31 719.20±120.07 5.240＜0.001 2.127 0.035否 是80 39 201.24±5.44 206.64±4.92 669.23±119.54 719.14±121.34肿瘤直径＜3 cm≥3 cm血管浸润1.810 0.073 0.366 0.715 68 51 203.61±4.83 205.29±5.24 689.64±132.24 698.52±129.61 5.776＜0.001 2.112 0.037否 是81 38 198.52±4.93 204.24±5.26 663.24±124.61 715.64±129.51

2.3 T淋巴细胞的表达水平与病理特征的关系情况

HBV 相关性肝癌患者血清中CD3+、CD4+、CD8+在不同年龄、性别、肿瘤直径中比较，差异无统计学意义（P＞0.05），CD3+、CD4+、CD8+水平在不同淋巴结转移情况、TNM分期、分化程度及血管浸润中比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 T淋巴细胞的表达水平与病理特征的关系情况（±s）

表3 T淋巴细胞的表达水平与病理特征的关系情况（±s）

项目性别例数（例）CD3+（%）t值0.404 P值0.687 CD4+（%）t值1.504 P值0.135 CD8+（%）t值0.814 P值0.417 CD4+/CD8+t值0.981 P值0.329男 女63 56 72.34±5.31 71.96±4.91 40.23±4.21 41.36±3.95 35.12±3.07 34.69±2.64 0.84±0.06 0.85±0.05年龄＜60岁≥60岁TNM分期Ⅰ～Ⅱ期Ⅲ～Ⅳ期分化程度中、高分化低分化淋巴结转移情况否 是肿瘤直径＜3 cm≥3 cm血管浸润50 69 91 28 64 55 80 39 68 51 72.34±5.64 71.23±4.26 73.64±3.61 72.32±4.13 71.11±3.67 70.64±3.24 70.34±3.64 69.15±3.57 71.34±3.57 69.95±4.26 1.2230.224 1.6350.105 0.7350.464 1.6840.095 1.9340.055 1.4060.162 41.13±4.21 40.26±4.62 39.54±3.12 38.24±3.54 40.17±3.94 39.54±3.16 41.06±4.16 39.67±5.34 39.11±3.64 38.86±3.74 1.0520.295 1.8670.064 0.9510.343 1.5550.123 0.3660.715 1.8350.069 33.94±2.94 34.17±3.64 33.42±2.67 34.14±2.57 34.86±2.97 35.24±2.19 32.91±2.54 33.26±3.61 33.17±3.15 33.99±2.65 0.3680.714 1.2590.211 0.7830.435 0.6120.542 1.5020.136 0.3360.737 0.83±0.05 0.81±0.07 0.89±0.06 0.81±0.08 0.91±0.07 0.83±0.05 0.85±0.06 0.79±0.07 0.87±0.08 0.85±0.04 1.726 5.681 7.065 4.844 1.637 9.108 0.087＜0.001＜0.001＜0.001 0.104＜0.001否 是81 38 71.24±3.95 72.36±4.26 40.29±3.67 38.92±4.06 33.96±2.54 34.14±3.08 0.87±0.02 0.82±0.04

2.4 不同生存情况的患者血清IL-28B、GP73 及T 淋巴细胞水平情况

随访1 年，其中有35 例患者死亡，4 例患者失访。死亡者血清GP73、IL-28B 水平均高于生存者，CD4+/CD8+指标低于生存者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表4。

表4 不同生存情况的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴细胞水平情况（±s）

表4 不同生存情况的患者血清IL-28B、GP73及T淋巴细胞水平情况（±s）

生存情况死亡（n=35）生存（n=80）t值P值GP73（ng/mL）228.31±9.12 196.34±9.64 16.629＜0.001 IL-28B（ρ/pg·mL-1）762.34±126.54 709.64±124.18 2.082 0.040 CD3+（%）67.94±5.14 69.41±3.59 1.761 0.081 CD4+（%）40.27±5.05 42.16±4.58 1.973 0.051 CD8+（%）36.15±4.07 34.81±4.57 1.494 0.138 CD4+/CD8+0.81±0.06 0.95±0.08 9.267＜0.001

3 讨论

近年来，随着肿瘤免疫逃逸机制的发现，临床工作者逐渐重视机体免疫功能在肿瘤发展、迁移过程中起到的作用［6］。乙型肝炎相关性肝癌患者体内同时存在HBV与肿瘤抗原的双重刺激，拥有较为复杂的免疫状态［7］。因此，深入探索相关因子及免疫功能在乙型肝炎相关性肝癌发展、迁移过程中的水平变化尤为重要。

陈超等［8］通过对98 例HBV 相关性肝癌患者血清因子水平的分析发现，GP73 呈异常表达趋势，在蛋白水解酶的分解作用下，使得GP73 表达水平显著增加。而本研究结果提示，GP73 水平的升高与肝功能损伤有关。IL-28B与Ⅰ型干扰素具有相似的生物活性和相同的信号传导途径，主要是在病毒或双链RNA 的诱导作用下，产生树突、巨噬、内皮细胞，进一步激活MAPK 等信号通路，达到实现免疫调节、抗肿瘤、抗病毒的目的［9］。当出现病毒感染时，CD3+能够反应机体一系列的免疫状态，而CD4+在免疫应答过程中能够有效清除病毒，同时，影响CD8+的激活和抑制。本研究结果表明，IL-28B、GP73 水平与淋巴结转移情况及TNM 分期、分化程度及血管浸润有关，提示IL-28B、GP73 参与乙型肝炎相关性肝癌的发生、发展过程。IL-28B、GP73 血清水平能够间接地反映疾病的严重程度，受到临床工作者的高度重视。同时，胡善雷等［10］研究发现，GP73 的表达与炎症损伤状态及患者肝功能情况存在联系。当存在HBV感染时，淋巴细胞亚群表达水平紊乱，进而导致免疫功能下降，造成病情的加重，三者形成恶性循环［11］。本研究结果显示，CD4+/CD8+水平变化与淋巴结转移情况及TNM 分期、分化程度和血管浸润有关，间接证实了HBV 的复制对机体内T细胞亚群的表达存在一定的影响。分析其原因在于，在HBV-DNA 的复制过程中，会损耗大量CD4+，而CD8+在体内抗原慢性刺激的作用下，表达水平不断上升，造成CD4+/CD8+显著下降的情况发生。候宝洲等［12］提出，在肿瘤免疫治疗过程中，机体免疫系统发挥着识别、靶向作用。由此可见，严密监测HBV 相关性肝癌患者的外周血T 淋巴细胞平衡，有利于评估疾病进展和免疫功能。此外，本研究结果表明，死亡患者血清GP73、IL-28B 水平均高于生存患者，CD4+/CD8+指标低于生存患者，提示GP73、IL-28B 及CD4+/CD8+指标能有效反映患者的预后情况。GP73 作为一种高尔基体Ⅱ型跨膜蛋白，不仅在肝癌患者血清水平中出现特异性增高的情况，而且在其他肝病中也会出现此类型情况。因此，GP73 对于早期肝癌的诊断受到诸多质疑［13］，但仍可作为反应乙型肝炎相关性肝癌患者病情程度和生存预后情况的分子指标。

综上所述，乙型肝炎相关性肝癌患者血清IL-28B、GP733及CD8+表达水平明显升高，CD3+、CD4+及CD4+/CD8+指标下降，IL-28B、GP73 及CD4+/CD8+水平与相关病理特征和预后情况具有密切联系。