九节茶药材质量标准研究

苏锐辉，于小庆，江涛*，汤迎湛，彭红英，李怡芳，何蓉蓉（.广州白云山敬修堂药业股份有限公司，广州 5030；.暨南大学 药学院，广州 5063）

九节茶为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai的干燥地上部分，作为清热消炎宁胶囊的主要原料，具有清热解毒、凉血、消斑、祛风除湿、通络止痛的功效[1]。九节茶主要化学成分有倍半萜、倍半萜二聚体、倍半萜三聚体[2]、香豆素[3-4]、黄酮类[4]和酚酸类[5]，具有抗炎[6-9]、抗肿瘤[10-12]、抗菌[3-4，13]、抗氧化[14]等多种活性。九节茶具有悠久的使用历史，主要产于福建、广东、广西和江西等省区[15]。

九节茶现行质量标准收载于《广东省中药材标准第一册》（2004年版），检测项目仅包括性状、显微鉴别、薄层鉴别、含量测定，尚未对水分、浸出物等项目进行考察。薄层鉴别采用甲苯展开系统，毒性较大，而且氨熏显色后，异嗪皮啶特征斑点显色不明显，不利于结果判断。含量测定项中供试品溶液的制备需要长时间静置，同时使用毒性较大的三氯甲烷作为溶剂。为了完善九节茶药材质量标准，更好地控制九节茶质量，本研究对九节茶质量检测方法进行了探索，同时对影响九节茶质量的因素进行研究，旨在为九节茶采收加工提供一定参考。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；XA105十万分之一电子天平、ME204T万分之一电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；超声波清洗器（深圳市洁盟清洗设备有限公司）；薄层色谱数码成像系统[瑞士CAMAG（卡玛）公司]。

1.2 试药

九节茶对照药材（批号：121756-202001）、异嗪皮啶对照品（批号：110837-202009，含量以99.8%计）、迷迭香酸对照品（批号：111871-202007，含量以98.1%计）（中国食品药品检定研究院）；乙腈为色谱纯；甲醇、乙醇为分析纯。13批九节茶药材经中国科学院华南植物园华南植物鉴定中心叶华谷研究员鉴定为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandraglabra（Thunb.）Nakai的干燥地上部分，具体信息见表1。

表1 九节茶药材信息Tab 1 Information of Sarcandra glabra samples

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

取九节茶粉末约1 g，加水50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液加乙酸乙酯振摇提取2次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取九节茶对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。参照《中国药典》（2020年版）四部通则0502，吸取上述3种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（3∶6∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。再喷以2%三氯化铁溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1。

图1 九节茶药材365 nm下（A）及日光下（B）薄层鉴别图Fig 1 TLC chromatograms of Sarcandra glabra samples in 365 nm（A）and day light（B）

2.2 检查

2.2.1 水分 照《中国药典》（2020年版）四部通则0832第二法测定，13批药材的水分为6.5%～12.6%，平均为9.4%，结果见表2。

表2 九节茶药材水分、灰分和浸出物测定Tab 2 Moisture，total ash，acid-insoluble ash and extract of Sarcandra glabra samples

2.2.2 总灰分及酸不溶性灰分 照《中国药典》（2020年版）四部通则2302测定，13批药材的总灰分为4.1%～7.1%，平均为5.2%；酸不溶性灰分为0.1%～1.5%，平均为0.5%。结果见表2。

2.2.3 浸出物 照《中国药典》（2020年版）四部通则2201项下的热浸法测定，13批药材的水溶性浸出物为7.3%～22.9%，平均为12.6%，结果见表2。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件 Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）为流动相；检测波长为342 nm，进样量为10 μL；柱温为25℃。

2.3.2 对照品溶液的制备 取异嗪皮啶、迷迭香酸对照品各适量，精密称定，加60%甲醇制成每1 mL各含10 μg的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 取九节茶粉末约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min（功率360 W，频率40 kHz），放冷，再称定重量，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 系统适用性试验 取对照品溶液和供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样分析，异嗪皮啶及迷迭香酸与其相邻色谱峰分离度均大于1.5，理论板数均在5000以上，色谱图见图2。

图2 对照品溶液（A）和供试品溶液（B）HPLC图Fig 2 HPLC chromatograms of reference solution（A）and sample solution（B）

2.3.5 线性关系考察 取异嗪皮啶、迷迭香酸对照品制成不同浓度混合对照品溶液。精密吸取混合对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，依法测定。以峰面积为纵坐标，对照品含量为横坐标，绘制标准曲线，计算异嗪皮啶和迷迭香酸回归方程分别为Y1＝2958.90X1-0.09（r＝0.9999），Y2＝2509.72X2-7.99（r＝0.9999），线性范围分别为0.0160～0.3203 μg、0.0157～1.5672 μg。

2.3.6 方法学考察

① 检测限及定量限试验：取异嗪皮啶、迷迭香酸对照品各适量，加甲醇溶解，逐级稀释，进样测定。按信噪比（S/N）约为3∶1计算，异嗪皮啶检测限为0.5 ng，迷迭香酸检测限为1.5 ng；按S/N约为10∶1计算，异嗪皮啶定量限为2.0 ng，迷迭香酸定量限为5.2 ng。

② 精密度试验：取九节茶供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样，测定6次，计算异嗪皮啶和迷迭香酸峰面积RSD分别为0.31%、0.58%，说明仪器精密度良好。

③ 重复性试验：取S11批九节茶按“2.3.3”项下方法制备6份供试品溶液，进样测定，计算异嗪皮啶平均含量为0.025%，RSD为1.5%；迷迭香酸平均含量为0.028%，RSD为0.50%，说明检测方法重复性良好。

④ 稳定性和耐用性试验：取九节茶供试品溶液，分别于制备后0、2、4、8、16、24 h进样测定，计算异嗪皮啶和迷迭香酸峰面积RSD分别为1.5%、0.28%，说明供试品溶液在24 h内稳定性良好；取同一供试品溶液分别采用3根不同品牌的十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱进样测定，异嗪皮啶含量RSD为2.3%，迷迭香酸含量RSD为2.6%，说明检测方法耐用性良好。

⑤ 准确度试验：取异嗪皮啶对照品、迷迭香酸对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1 mL各含2 μg的溶液。取已知异嗪皮啶和迷迭香酸含量的九节茶6份（批号：S11），各约0.2 g，精密加入上述对照品溶液25 mL，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算异嗪皮啶和迷迭香酸的加样回收率分别为99.63%～101.35%、96.91%～98.73%，RSD分别为0.59%、0.75%，说明检测方法准确度良好。

2.3.7 样品含量考察 取九节茶样品适量，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，按干燥品计算样品中异嗪皮啶和迷迭香酸的含量，结果见表3。

表3 九节茶药材异嗪皮啶和迷迭香酸含量测定结果(n＝3)Tab 3 Contents of isofraxidin and rosmarinic acid in Sarcandra glabra samples (n＝3)

2.4 结果分析

2.4.1 不同生长年限对九节茶质量的影响 选取同一种植基地不同生长年限的九节茶药材进行对比，S9、S11、S12生长年限分别为一年、两年、三年。结果显示不同生长年限九节茶药材水溶性浸出物含量接近，异嗪皮啶和迷迭香酸含量存在差异。一年生九节茶药材异嗪皮啶和迷迭香酸含量较低，两年生九节茶异嗪皮啶和迷迭香酸含量明显增加，三年生九节茶药材含量趋于稳定。

2.4.2 不同干燥条件对九节茶质量的影响 采用晒干及30、50、70℃鼓风干燥4种不同干燥条件处理同一批两年生九节茶药材，干燥后九节茶水分为9.97%～11.56%。比较不同干燥条件下九节茶异嗪皮啶和迷迭香酸含量：70℃烘干时，迷迭香酸含量下降明显；晒干、30℃及50℃烘干时，异嗪皮啶和迷迭香酸含量接近。综合考虑干燥时长、操作难度和九节茶特征成分含量，50℃鼓风干燥更适合九节茶大规模加工生产，结果见表4。

表4 不同干燥条件对九节茶质量的影响Tab 4 Contents of isofraxidin and rosmarinic acid in Sarcandra glabra with different drying methods

3 讨论

3.1 考察指标的选择

九节茶现行质量标准以异嗪皮啶为含量测定指标成分，异嗪皮啶属于香豆素类化合物，是九节茶抗炎的主要活性成分[6]。迷迭香酸为酚酸类化合物，具有抗炎[8]、抗肿瘤[10]等作用。异嗪皮啶及迷迭香酸最大紫外吸收波长接近，在液相色谱上能实现同时测定。结合液相色谱分析，九节茶中异嗪皮啶和迷迭香酸含量均较高，因此选择异嗪皮啶和迷迭香酸作为含量测定指标。

3.2 薄层鉴别方法考察

本研究采用不同浓度甲醇溶液和乙醇溶液制备供试品溶液，均未能取得良好的鉴别效果。另外，本研究对展开剂（二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸、正己烷-乙酸甲酯-甲酸、环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸）、显色剂（氨熏、硫酸乙醇溶液、三氯化铁溶液）、薄层板厂家（青岛海洋化工有限公司、德国Merck公司）、点样量（2、4、6 μL）进行了考察，最终确定了本文的鉴别方法。

3.3 限量标准建议

13批九节茶样品的水分为6.5%～12.6%，由于九节茶主要种植在南方林下，湿度较大，建议水分不得高于15.0%；总灰分为4.1%～7.1%，建议总灰分不得高于8.0%；酸不溶性灰分为0.1%～1.5%，考虑不同样品间酸不溶性灰分差异较大，建议酸不溶性灰分不得高于2.0%；浸出物为7.3%～22.9%，建议浸出物不得少于7%；异嗪皮啶含量为0.006%～0.046%，迷迭香酸含量为0.002%～0.081%，建议含量按干燥品计算，含异嗪皮啶不得少于0.02%，含迷迭香酸不得少于0.02%。

4 结论

本研究对九节茶药材质量检测方法进行了研究，改善了其薄层鉴别方法，同时以异嗪皮啶和迷迭香酸为对照品建立了含量测定方法。研究共收集13批九节茶药材进行分析，初步建立了九节茶药材质量标准，有效地评价了九节茶药材的质量。通过分析生长年限和干燥条件对九节茶药材质量的影响，为九节茶药材的采收加工提供依据。