卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184 表达与患者临床病理特征和预后的关系

杨洋，胡娟，黄润强

1 十堰市太和医院妇科，湖北 十堰 442000；2 三峡大学附属仁和医院妇科

卵巢癌是临床常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，2022 年我国卵巢癌新发病例57 090 例，死亡39 306 例，严重威胁女性生命健康［1］。及时评估卵巢癌患者预后对促进其预后改善很有必要。长链非编码核糖核酸（LncRNA）、微小核糖核酸（miRNA）等非编码核糖核酸（ncRNA）是基因组的新兴元素，虽不编码蛋白质，但参与肿瘤细胞增殖、分化、侵袭、转移、耐药、凋亡等的调控［2］。LncRNA小核仁核糖核酸宿主基因11（SNHG11）是新发现的LncRNA 成员，其在卵巢癌中异常表达［3］。LncRNA SNHG11 与食管鳞癌、肝细胞癌患者预后有关［4-5］。miR-184 是进化高度保守的一种miRNA，在卵巢癌中异常表达［6］。miR-184 与舌鳞状细胞癌、肾透明细胞癌患者预后有关［7-8］。本研究拟探讨卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184 表达与临床病理特征和预后的关系，旨在为改善患者预后提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2019 年1 月—2020 年5 月在十堰市太和医院手术切除的104 例份卵巢癌组织及其癌旁组织（距离癌组织边缘≥2 cm 且经病理检查为正常组织）标本，取样后立即液氮速冻后保存于-80 ℃冰箱中。患者年龄31～74（60.54 ± 5.68）岁；病理类型：浆液性癌83例、黏液性癌21例；肿瘤最大径≥3 cm 41例、＜3 cm 63例；分化程度：低分化39例、中高分化65 例；国际妇产科联盟（FIGO）分期［9］：Ⅰ～Ⅱ期41例、Ⅲ期63例；淋巴结转移45例。纳入标准：患者或家属知情同意；经病理检查确诊为卵巢癌；初次确诊，且入院前未接受化疗、放疗、免疫治疗、靶向治疗等。排除标准：年龄＜18 岁；临床资料不完整；继发性卵巢癌；合并其他部位恶性肿瘤；合并自身免疫性疾病；合并精神疾病。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184 检测 采用实时荧光定量PCR 法。将冻存组织剪碎后，用RNA 提取试剂盒［天根生化科技（北京）有限公司］提取组织总RNA，分光度计测定吸光度。用逆转录试剂盒（北京百迈客生物科技有限公司）将RNA 转录为互补RNA 后，用荧光定量PCR 试剂盒（北京百迈客生物科技有限公司），以互补RNA 为模板进行反应。反应体系：互补RNA 5 μL、2×SYBR Green PCRmix 12.5 μL、上游引物1.0 μL、下游引物1.0 μL，ddH2O 加至总体积25 μL。反应条件：95 ℃加热10 min，95 ℃变性10 s、64 ℃退火10 s、延伸72 ℃ 30 s 循环35 次。LncRNA SNHG11 上游引物5'-TGGGAGTTGTCATGTTGGGA-3'，下游引物5'-ACTCGTCACTCTTGGTCTGT-3'；内参GAPDH 上游引物5'-ATGTTCGTCATGGGTGTGAA-3'，下游引物5'-CAGTGATGGCATGGACTGT-3'。 miR-184 上游引物5'-TGGACGGAGAACTGAUAAGGGT-3'，下游引物5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'；内参U6 上游引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。用2-ΔΔCT法计算组织中LncRNA SNHG11、miR-184相对表达量。

1.3 预后随访 通过电话或门诊对卵巢癌患者随访3 年，第1 年每3 个月随访1 次，之后2 年每6个月随访1 次。随访至患者死亡或2023 年5 月，统计患者生存率。

1.4 统计学方法 采用SPSS28.0 统计软件。计量资料以-x±s表示，比较采用配对或独立t检验；采用Pearson 相关法分析卵巢癌组织中LncRNA SNHG11与miR-184表达的相关性；用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，用Log-rank 检验比较生存率；用多因素Cox回归分析卵巢癌患者预后的影响因素。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢癌组织与癌旁组织中LncRNA SNHG11、miR-184表达比较 卵巢癌组织中LncRNA SNHG11表达高于癌旁组织，miR-184 表达低于癌旁组织（P均＜0.05）。见表1。

表1 卵巢癌组织与癌旁组织中LncRNA SNHG11、miR-184相对表达量比较（-x ± s）

2.2 卵巢癌组织中LncRNA SNHG11 与miR-184 表达的相关性 用StarBase 软件预测发现，LncRNA SNHG11 与miR-184 存在结合位点。Pearson 相关分析显示，卵巢癌组织中LncRNA SNHG11 表达与miR-184表达呈负相关（r＝-0.711，P＜0.05）。

2.3 LncRNA SNHG11、miR-184表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系 不同分化程度、FIGO 分期、淋巴结转移的卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184 表达比较差异有统计学意义（P均＜0.05），不同年龄、病理类型、肿瘤最大径的卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184 表达比较差异无统计学意义（P均＞0.05）。见表2。

表2 LncRNA SNHG11、miR-184表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系（-x ± s）

2.4 LncRNA SNHG11、miR-184表达与卵巢癌患者预后的关系 104 例卵巢癌患者随访3 年，死亡45例，总生存率为56.73%（59/104）。根据卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184 表达均值分为高/低表达组。LncRNA SNHG11 高表达组（≥2.27，53 例）总生存率45.28%（24/53）低于LncRNA SNHG11 低表达组（＜2.27，51 例）的68.63%（35/51）；miR-184高表达组（≥1.02，54 例）总生存率68.52%（37/54）高于miR-184 低表达组（＜1.02，50 例）的44.44%（22/50）；比较差异有统计学意义（P均＜0.05）。

2.5 卵巢癌患者预后的单因素和多因素Cox 回归分析 以随访时间为时间变量，临床病理特征和LncRNA SNHG11、miR-184 为自变量，生存状态（死亡/存活=1/0）为因变量。多因素Cox 回归分析显示，FIGO 分期Ⅲ期、淋巴结转移、LncRNA SNHG11≥2.27 为卵巢癌患者死亡的独立危险因素，miR-184≥1.02为独立保护因素（P＜0.05）。见表3。

表3 影响卵巢癌患者预后的单因素和多因素Cox回归分析结果

3 讨论

卵巢癌是起源于输卵管或卵巢上皮细胞的恶性肿瘤，根治性切除是早期卵巢癌最有效的治疗方法，但由于卵巢深处盆腔且卵巢癌早期无特异性症状，导致70%左右的患者在初诊时即为晚期，失去最佳切除时机［10］。尽管近年来肿瘤细胞减灭术和化疗、放疗、免疫、靶向等治疗技术或药物取得较大进展，但仍难以获得满意的疗效，且随着治疗时间的延长，耐药和复发转移愈发常见，导致卵巢癌患者总体预后仍然较差［11-13］。分析卵巢癌患者预后相关因素，对指导临床干预和改善患者预后意义重大。

卵巢癌是多种因素和机制导致的一种实体肿瘤，细胞内外的ncRNA 能通过转录或转录后调控等方式调控细胞多种病理生理功能，进而参与卵巢癌发生、发展［14］。LncRNA 是长度＞200 个核苷酸的ncRNA，该类ncRNA虽然缺乏典型的开放阅读框，但能通过海绵miRNA竞争性结合信使核糖核酸或直接调控信使核糖核酸，参与蛋白质调节、转录调节、表观遗传调控等过程，进而参与肿瘤进程［15］。LncRNA SNHG11 是定位于人染色体20q11.23 上的一种LncRNA，参与多种恶性肿瘤过程。如LncRNA SNHG11 能靶向miR-324-3p 上调血管内皮生长因子A，促进胰腺癌细胞增殖、迁移和血管生成［16］；LncRNA SNHG11能靶向下调miR-193a-5p表达促进非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移［17］。上述研究提示，LncRNA SNHG11 是一种促癌基因。研究显示，LncRNA SNHG11 表达升高与结直肠癌、前列腺癌患者预后不良有关［18-19］。有研究报道，LncRNA SNHG11 在卵巢癌中呈高表达［3］。然而关于LncRNA SNHG11 与卵巢癌患者的关系尚不清楚。本研究结果显示，卵巢癌组织中LncRNA SNHG11高表达，与分化程度、FIGO 分期和淋巴结转移有关，提示LncRNA SNHG11 高表达参与卵巢癌发生发展。分析原因可能是LncRNA SNHG11 表达升高能结合β-连环蛋白激活Wnt/β-连环蛋白途径，促进卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成，导致卵巢癌恶性进展［20］。

miRNA是长度约22个核苷酸的单链ncRNA，能通过与靶标基因完全或不完全互补结合，抑制蛋白质翻译而负向调控信使核糖核酸表达，参与肿瘤进程［21］。miR-184是定位于人染色体7q32.2上的一种以miR-183/96/182 基因簇形式存在的miRNA。近年多项研究证实miR-184 可参与肿瘤进程，如miR-184能靶向下调锌指蛋白3表达，调控上皮间质转化，促进口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭［22］；miR-184能靶向下调补体1和肿瘤坏死因子受体6 表达，抑制肺腺癌细胞恶性进展［23］。上述研究提示，miR-184 在肿瘤发生、发展过程中发挥促癌或抑癌作用。实验报道，miR-184 在卵巢癌中呈低表达［6］。且相关研究显示，miR-184 异常表达与胃癌、肝细胞癌患者预后不良有关［24-25］。本研究结果显示，卵巢癌组织中miR-184 低表达，与卵巢癌分化程度、FIGO 分期和淋巴结转移有关，提示miR-184 低表达参与卵巢癌发生、发展。分析原因可能是miR-184 表达降低会导致类Sm 蛋白4 表达上调，导致细胞周期紊乱，使卵巢癌细胞不受控制的增殖、分化、迁移和侵袭，促进卵巢癌恶性进展［6］。

本研究通过StarBase 软件预测发现，LncRNA SNHG11与miR-184存在结合位点，相关性分析也发现二者在卵巢癌组织中表达呈负相关，提示LncRNA SNHG11 和miR-184 可能共同参与卵巢癌进程。李少儒等［3］通过双荧光素酶报告基因实验也证实LncRNA SNHG11 与miR-184 存在靶向关系，下调LncRNA SNHG11 表达能靶向上调miR-184 表达，降低卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭能力。本研究结果还显示，LncRNA SNHG11高表达患者总生存率较低表达患者低，是卵巢癌患者死亡的独立危险因素；miR-184 高表达患者总生存率较低表达患者高，是卵巢癌患者死亡的独立保护因素。这说明卵巢癌组织中LncRNA SNHG11、miR-184 表达与患者预后有关，可能成为卵巢癌预后评估新的标志物。

综上所述，卵巢癌组织中LncRNA SNHG11 高表达，miR-184 低表达，二者表达变化与分化程度、FIGO 分期、淋巴结转移和预后有关。但本研究结果还需多中心研究进行验证。