改进型胚胎冷冻存放方法对胚胎解冻的影响研究

谢丽松,岳林林,周椿昊（江西省赣州市妇幼保健院,江西 赣州 341000）

随着近几年体外受精胚胎移植技术的应用比例不断攀升，加之部分公众对生育力保存的需求提高，胚胎冷冻已成为临床辅助生殖的重要手段之一，其具有保存胚胎及提高累计妊娠率的作用，有利于降低多胎妊娠的发生风险，并且对卵巢过度刺激综合征的发生有一定的预防效果[1-2]。程序化冷冻和玻璃化冷冻是临床常用的胚胎冷冻技术，但既往研究[3-5]中证明程序化冷冻存在操作时间长、设备要求高等不足，故在临床使用中有着较大的局限性。而玻璃化冷冻具有操作时间短、胚胎损伤小等优势，故现在均采用玻璃化冷冻方法[6]。我科始建于2003年，随着冷冻胚胎不断增多，胚胎冷冻管理工作也成为了实验室工作的重要组成部分。如何高效优质地进行胚胎冷冻管理尤为重要，最开始我科在保存冷冻胚胎时使用铝制支架，上下塑料套杆，一个支架内存放3-4支载杆，存取过程均需要将支架提取到液氮罐以外的液氮盒内查找需要的载杆，易受外界影响，并且容易影响同支架的其他载杆。自2016年6月起，我科将支架改良为塑料透明侧开口支架，一个支架内存放一支载杆，存取过程只看支架头部编号即可准确无误存取，不影响其他的载杆，也不易出现错拿或勾挂其他支架的现象。

1 资料和方法

1.1 一般资料 纳入赣州市妇幼保健院生殖与遗传科2014年6月-2020年6月收治的600例冷冻胚胎进行解冻移植患者的临床资料展开回顾性分析，所有患者均行玻璃化冷冻，依据冷冻胚胎后储存方法差异分为改进型支架组（n=300）和传统型支架组（n=300），具体情况见表1。两组一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05），经我院伦理委员会批准后执行本次研究。

表1 两组一般资料比较()

表1 两组一般资料比较()

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1.2 选例标准 纳入标准：①患者年龄处于20-40岁之间；②以往具备规律月经周期；③入院胚胎移植前血常规及肝肾检查无异常；④患者对本次研究的方法、过程及目的均知情且愿意配合。排除标准：①既往存在盆腔脏器手术史或近期服用过糖皮质激素药物等；②合并严重心、肝、肾功能不全或先天性子宫畸形者；③临床资料缺失者。

1.3 方法 ①两组均采用玻璃化冷冻，试剂盒为Vitrolife玻璃化冷冻试剂盒，2、3液含有冷冻保护剂（由丙二醇、乙二醇、聚蔗糖组成）。将胚胎使用冷冻载杆装载，装入冷冻支架内，之后放入液氮罐中冻存。②两组均采用玻璃化解冻，试剂盒为Vitrolife玻璃化解冻试剂盒，1、2液含有蔗糖冷冻保护剂。③改进型支架组使用侧边开口的塑料支架，解冻时在唯一编号液氮罐提篮的分区内即可准确挑选出带有唯一颜色和字母编号的塑料支架（见图1）。④传统型支架组采用铝支架加塑料套管（见图2），在挑选胚胎时需要将铝支架提出液氮罐外进行二次挑选，选完将剩余载杆及支架（见图3）放回液氮罐内。

图1

图2

图3

1.4 观察指标 ①记录并比较两组胚胎存活情况即胚胎解冻存活率。②统计两组妊娠情况，包括移植周期妊娠率、胚胎种植率、胚胎着床率、流产率、活产率。③比较两组液氮罐空间利用率、胚胎拿取时间。

1.5 统计学方法 采用SPSS25.0软件进行数据处理，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，计量资料均经Shapiro-Wilk正态性检验，呈正态分布以表示，组间用独立样本t检验，偏态分布计量资料用中位数（四分位数）[M（P25，P75）]表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组胚胎解冻存活情况比较 与传统型支架组的胚胎解冻存活率93.0%（279/300）比较，改进型支架组的胚胎解冻存活率96.67%（290/300）更高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 两组妊娠情况比较 两组胚胎种植率、胚胎着床率、流产率、活产率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。与传统型支架组比较，改进型支架组移植周期妊娠率显著增高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组妊娠情况比较[n(%)]

2.3 两组液氮罐空间利用率及胚胎拿取时间比较 与传统型支架组比较，改进型支架组每个吊桶分三区，每区可放50根，每个吊桶可盛放150根载杆。而传统型铝制支架吊桶不分区，可放20根铝杆。以每杆3-4根载杆计，约放80根载杆；而且相较于传统型支架需要全部解冻完支架内胚胎才能拿出支架，改进型支架一个载杆一个支架用完则提篮内空间空余可立即填补，大大地提高了液氮罐的空间利用率。传统型支架拿取时一个支架对应多杆胚胎，必须同时找对支架与载杆，且找到之后还需将剩余胚胎放回原位，而改进型则一个支架对应一杆胚胎，找出后也不需要再放回液氮罐，大大节省了胚胎的拿取时间。本次研究中，改进型支架组的胚胎拿取时间为（7.38±1.69）min，明显少于传统型支架组的（11.79±1.72）min，组间差异显著（P＜0.05）。

3 讨论

随着医学及科技的日益进步，生殖技术的发展也得到明显提高，进而使得试管婴儿也逐渐普遍起来，故将剩余的胚胎进行冷冻及储藏也是临床中重要的工作之一[7-8]。传统的冷冻胚胎储存方法需要借助铝制支架及塑料套管进行存放，且其操作过程较为复杂，挑选铝制支架时容易将旁边的支架一同带出，给工作带来很大不便，特别是取出胚胎时需将整个支架连同其他的载杆拿出液氮罐外进行二次挑选，在实施该操作时可能存在一定的安全隐患，因此临床上还需寻找一种更加方便且精准的胚胎冷冻储存方法[9]。基于此，本次研究探讨改进型胚胎冷冻存放方法对胚胎解冻的影响，以期为胚胎解冻移植的实施提供可靠的临床依据。

本次研究显示：与传统型支架组比较，改进型支架组胚胎解冻存活率显著增高，差异有统计学意义；两组胚胎种植率、胚胎着床率、流产率、活产率比较，差异无统计学意义；与传统型支架组比较，改进型支架组移植周期妊娠率显著增高，差异有统计学意义。与传统型支架组比较，改进型支架组液氮罐空间利用率增高，胚胎拿取时间显著缩短，差异有统计学意义。改进型胚胎冷冻存放方法采用侧边开口的塑料支架，一个支架存贮一个冷冻载杆，在解冻操作中精准定位，方便查找及提取，避免操作人员操作过程中带出其他人的胚胎，提高了操作的安全性[10-11]。与改进型支架组比较，传统型支架会占用较大的存储空间，需要将同一个储存单元内所有胚胎解冻完才能提出支架，以备再次使用此空间[12-14]。改进型支架组一支架一载杆，用完一杆空间即可填补空余，液氮罐空间利用率显著增高，精准定位让胚胎拿取时间显著缩短，表明改进型胚胎冷冻存放方法用于胚胎解冻患者可简化操作步骤，提高液氮罐空间利用率，节约了液氮的用量，节省了冷冻室的面积，同时也节省了工作人员查找胚胎的时间，有效地提高了工作效率，并使得实际工作变得安全、方便[15-16]。

综上所述，改进型胚胎冷冻存放方法用于胚胎解冻患者不会对围产结局造成影响，具有较高的临床价值。但本研究为回顾性分析，仍存在一定不足之处，如样本选择存在时间限制，且研究样本均来源于同一地区，可能会造成结果存在一定偏倚，使研究结论的临床推广受到一定限制，因此后续仍需展开多中心研究，以继续为胚胎移植患者冷冻载杆的选择提供参考。