藤石松的生物碱类成分研究

陈烨琪，潘亚茹，卓 越，张一帆 ，顾继洪*

1.广州中医药大学科技创新中心，广东 广州 510405

2.广州中医药大学第一附属医院，广东 广州 510405

3.广东省中医临床研究院，广东 广州 510405

藤石松Lycopodiastrumcasuarinoides(Spring)Holub 又名“舒筋草”，为石松科藤石松属的单种属植物，生于海拔100～3 100 m 的林下、林缘、灌丛下或沟边，主要分布于热带与亚热带地区，在我国华东、华南、华中及西南大部分省区广泛分布，能祛风除湿、舒筋活血，主治跌打损伤、风湿关节痛、月经不调等[1-2]。石松碱类化合物是从石松科、石杉科及其近缘亲属植物中分离得到的一类具有生源相同、结构相似且骨架丰富多样的生物碱，其基本骨架结构一般由16 个碳原子的吡啶环或吡啶酮环构成[3]。近年来，石松生物碱因其具有奇特的化学结构和丰富多样的生物活性（如乙酰胆碱酯酶抑制活性、细胞毒性和神经保护活性等）而受到众多化学家和药理学家的广泛关注[4-12]。其中，石杉碱甲作为石松碱家族的明星分子，具有强效、可逆的乙酰胆碱酯酶抑制活性，已被美国食品药品监督管理局批准为改善记忆力的膳食补充剂，在国内则用于重症肌无力和中轻度阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）患者的临床治疗，是目前较有前景的AD 治疗药物[3]。为了进一步阐明藤石松的生物碱类成分，本课题组对该植物的总生物碱部位进行研究，从中分离得到11 个石松碱类化合物，分别鉴定为6-羟基-β-玉柏碱（6-hydroxy-β-obscurine，1）、去-N-甲基- β-玉柏碱（des-N-methyl-β-obscurine，2）、casuarine B（3）、石杉碱乙（huperzine B，4）、casuarinine B（5）、β-玉柏碱（β-obscurine，6）、蛇足石杉碱（huperzinine，7）、N-demethylhuperzinine（8）、石杉碱丙（ huperzine C，9）、8,15-dihydrohuperzinine（10）、casuarinine I（11）。其中，化合物1 为新化合物，结构式见图1。

1 仪器与材料

Ascend 400 型核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）；JASCO V-550 型紫外/可见光谱仪（北京佳斯科仪器有限公司）；JASCO FT/IR-4600 Plus Fourier Transform IR 光谱仪（北京佳斯科仪器有限公司）；N-1300 旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；LC-2030C 分析型高效液相（日本Shimadzu 公司）；G1361A 1200 型半制备型高效液相（美国安捷伦科技有限公司）；5600 LC-MS 质谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；Agilent Gemini S 单晶衍射仪（美国安捷伦科技有限公司）；JASCO P-1020 旋光仪（北京佳斯科仪器有限公司）；柱色谱硅胶（青岛海洋化工有限公司）；HSGF254 型TLC 用硅胶GF254高效预制板（烟台化学工业研究所）；柱色谱用Sephadex LH-20 填料（Amershanm Biosciences 公司）；Xbridge BEH C18制备柱（250 mm×10 mm，5 µm，美国Waters 公司）；核磁用氘代试剂（美国CIL 公司）；乙醇、石油醚、醋酸乙酯、二氯甲烷等均为分析纯（天津富宇公司和山东禹王公司）；乙腈、甲醇为色谱纯（北京迈瑞达科技有限公司）。

实验用藤石松样品于2020 年11 月购买自广东省揭阳市，经广州中医药大学科技创新中心王文彩博士鉴定为藤石松L.casuarinoides(Spring) Holub，凭证标本（2020100201）存放于广州中医药大学科技创新中心。

2 提取与分离

将藤石松的地上部分（50.0 kg）干燥后粉碎，并在室温下用95%乙醇（140 L）提取3 次，每次72 h。乙醇提取物（7.55 kg）加水混悬，用10%盐酸酸化至pH 3，并用二氯甲烷萃取除去中性组分。酸水层用NH3·H2O 调节至pH 9～10 后，用二氯甲烷萃取，减压浓缩以获得总生物碱部位（54.63 g）。总生物碱部位经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脱，经薄层色谱检测合并相同部分，得到10 个流分（Fr.1～10）。

Fr.1（7.35 g）经ODS 柱，甲醇-水（10∶90→100∶0）溶剂系统进行梯度洗脱，得到5 个组分（Fr.1-1～1-5）。Fr.1-2（0.24 g）经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱（甲醇）纯化，得到3 个流分Fr.1-2-1～1-2-3。Fr.1-2-2 以乙腈-碱水（77∶23，碱水为0.02%二乙胺水溶液）为流动相，经半制备HPLC 分离得到化合物1（3.56 mg，tR＝39.5 min）、11（8.31 mg，tR＝40.1 min）。Fr.1-2-3 以乙腈-碱水（75∶25）为流动相，经半制备HPLC 分离得到化合物4（3.74 mg，tR＝15.7 min）。Fr.1-3 以乙腈-碱水（70∶30）为流动相，经半制备HPLC 分离得到化合物10（5.93 mg，tR＝30.4 min）。

Fr.2（1.5 g）经ODS 柱，甲醇-水（10∶90→100∶0）溶剂系统进行梯度洗脱，得到3 个组分Fr.2-1～2-3。Fr.2-1（0.13 g）经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱分离，甲醇洗脱得到3 个流分Fr.2-1-1～2-1-3。Fr.2-1-1 以乙腈-碱水（70∶30）为流动相，经半制备HPLC 分离得到化合物6（4.30 mg，tR＝36.0 min）。Fr.2-2（0.16 g）经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇1∶1）和半制备HPLC（乙腈-碱水75∶25）分离得到化合物9（43.33 mg，tR＝9.9 min）。

Fr.3（1.23 g）经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱分离，以甲醇为溶剂进行洗脱，得到3 个流分Fr.3-1～3-3。Fr.3-1（0.31 g）经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇1∶1）和半制备HPLC（乙腈-碱水75∶25）分离得到化合物2（4.17 mg，tR＝10.9 min）。Fr.3-2（0.29 g）经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱（甲醇）和半制备HPLC（乙腈-碱水75∶25）分离得到化合物3（9.79 mg，tR＝12.8 min）、5（5.17 mg，tR＝22.3 min）、7（9.79 mg，tR＝22.0 min）、8（2.9 mg，tR＝24.3 min）。

3 结构鉴定

化合物1：无色针晶（甲醇）。[α]25D＋78.0 (c0.10,CH3CN)；mp 269～270 ℃。HR-ESI-MS 谱给出准分子离子峰m/z: 289.190 1 [M＋H]+（计算值289.191 1），确定化合物1 的分子式为C17H24N2O2，计算其不饱和度为7。紫外光谱（UV）显示在232、318 nm 处有特征性吸收。红外光谱（IR）显示其结构中存在羟基（3 411 cm−1）、羰基（1 667 cm−1）和双键（1 607 cm−1）等特征信号峰。

化合物1 的1H-NMR (400 MHz, CD3OD) 谱显示2 个烯烃质子信号δH7.85 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3),6.46 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2)；1 个连氧次甲基氢信号δH4.75 (1H, d,J= 6.0 Hz, H-6) 和2 个甲基氢信号δH2.59 (3H, s, N-Me), 0.84 (3H, d,J= 6.3 Hz, H-16)。13C-NMR 结合DEPT-135 谱显示出17 个碳信号，包括4 个季碳信号（δC59.9, 146.1, 121.7, 165.1）、6 个次甲基碳信号（δC27.6, 38.1, 41.7, 66.5, 119.5,142.2）、5 个亚甲基碳信号（δC20.3, 27.3, 36.3, 47.5,51.6）和2 个甲基碳信号（δC22.5, 36.3）。化合物1的碳氢信号归属见表1。

表1 化合物1 的1H-NMR 和13C-NMR 数据 (400/100 MHz, CD3OD)Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1(400/100 MHz, CD3OD)

将化合物1 与β-玉柏碱[13]的1H-NMR 和13CNMR 数据进行对比，发现两者的化学位移相似，不同之处在于化合物1 的C-6 位化学位移明显向低场移动（δC66.5），提示其C-6 位连有氧原子。1H-1H COSY 谱显示化合物1 的结构中存在如图2 所示的两组自旋体系。在HMBC 谱中，H-2 与C-1/C-4，H-3 与C-1/C-5/C-13，H-6 与C-4/C-5/C-8/ C-12，H-16 与C-8/C-14/C-15，N-CH3与C-9/C-13 之间分别有远程相关（图2），证实了上述推论，从而建立了化合物1 的平面结构。

图2 化合物1 的关键1H-1H COSY 和HMBC 相关信号Fig.2 Key 1H-1H COSY and HMBC correlations of compound 1

为了确定化合物1 的绝对构型，在其甲醇溶液中培养出单晶，并通过单晶X-射线衍射实验获得了其单晶结构（图3）。由于其Flack 常数为0.05(10)，因此确定化合物的绝对构型为6R,7R,12R,13R,15R命名为6-羟基-β-玉柏碱（6-hydroxy-β-obscurine）。

图3 化合物1 的单晶ORTEP 图Fig.3 X-ray ORTEP drawing of compound 1

化合物1 的晶体学数据存于在英国剑桥晶体学数据中心（Cambridge Crystallographic Data Centre，CCDC），该数据可通过CCDC 网站www.ccdc.cam.ac.uk 进行索取,发表号为CCDC-2315044。化合物1的晶体学参数：分子式C17H24N2O2，相对分子质量Mr= 288.38，斜方晶系，P212121空间群；晶胞参数a= 7.770 80(10) nm，b= 12.859 0(2) nm，c= 14.565 8(2)nm，α=β=γ= 90°；V= 1 455.48(4) nm3，T=149.99(10) K，晶胞内分子数Z= 4，计算单晶密度（ρcalc）= 1.316 g/cm3，F(000) = 624。收集的衍射点数为11 403（9.17≤θ≤147.89），可观测的衍射点数为2 822 [I＞2σ(I)]。可观测的衍射点的R为0.031 5，可观测的衍射点的最终R指数（RW）为0.082 7，拟合优度（S）为1.060，Flack 常数是0.05(10)。

化合物2：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 259.181 3[M＋H]+（计算值259.180 5），分子式为C16H22N2O。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.64 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.43 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2), 2.88 (1H, dd,J= 19.0, 7.1 Hz, H-6a), 2.80 (1H, m, H-9a), 2.49 (1H,m, H-9b), 2.35 (1H, d,J= 19.0 Hz, H-6b), 2.08 (1H, m,H-7), 1.76 (1H, brd,J= 9.0 Hz, H-8a), 1.70～1.51 (5H,overlapped, H-10a, 10b, 12, 14a, 15), 1.36～1.20 (4H,overlapped, H-8b, 11a, 11b, 14b), 0.86 (3H, d,J= 5.8 Hz,H-16)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 165.2 (C-1),118.4 (C-2), 140.9 (C-3), 118.5 (C-4), 146.6 (C-5), 30.6(C-6), 34.2 (C-7), 44.1 (C-8), 42.0 (C-9), 26.9 (C-10), 26.5(C-11), 44.2 (C-12), 56.8 (C-13), 49.4 (C-14), 27.0 (C-15),22.2 (C-16)。以上数据与文献报道一致[14]，故鉴定化合物2 为去-N-甲基-β-玉柏碱。

化合物3：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 287.176 3[M＋H]+（计算值287.175 4），分子式为C17H22N2O2。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.83 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.32 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2), 5.41 (1H, brd,J= 4.9 Hz, H-8), 3.34 (1H, td,J= 10.9, 5.1 Hz, H-11),2.91 (1H, overlapped, H-7), 2.87 (1H, overlapped, H-6a), 2.62 (1H, m, H-9a), 2.59 (1H, overlapped, H-14a),2.57 (3H, s,N-Me), 2.49 (1H, m, H-9b), 2.27 (1H, d,J= 16.7 Hz, H-6b), 1.79 (1H, dd,J= 10.4, 3.3 Hz, H-12), 1.70 (1H, m, H-14b), 1.67 (1H, m, H-10b), 1.49(3H, s, H-16), 1.43 (1H, m, H-10a)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 165.7 (C-1), 118.2 (C-2), 142.8 (C-3), 122.6 (C-4), 144.5 (C-5), 30.0 (C-6), 30.7 (C-7),125.5 (C-8), 50.3 (C-9), 29.9 (C-10), 68.6 (C-11), 41.3(C-12), 59.3 (C-13), 44.1 (C-14), 133.8 (C-15), 23.2 (C-16), 37.7 (N-Me)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物3 为casuarine B。

化合物4：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 257.164 9[M＋H]+（计算值257.164 8），分子式为C16H20N2O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.70 (1H, d,J= 9.4 Hz,H-3), 6.45 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2), 5.45 (1H, brd,J=5.5 Hz, H-8), 2.86 (1H, dd,J= 17.8, 5.5 Hz, H-6a), 2.76(1H, d,J= 13.3 Hz, H-9b), 2.44 (1H, d,J= 17.8 Hz, H-6b), 2.34 (1H, m, H-7), 2.30 (1H, dd,J= 13.0, 3.3 Hz,H-9a), 2.05 (1H, d,J= 16.9 Hz, H-14b), 1.85 (1H, d,J= 16.9 Hz, H-14a), 1.69 (1H, dt,J= 12.4, 3.8 Hz, H-12),1.61～1.54 (2H, overlapped, H-10a, 11b), 1.52 (3H, s, H-16), 1.45 (1H, m, H-10b), 1.24 (1H, m, H-11a)；13C-NMR(100 MHz, CDCl3)δ: 165.5 (C-1), 117.8 (C-2), 140.6 (C-3), 118.2 (C-4), 143.5 (C-5), 29.4 (C-6), 34.3 (C-7),126.1 (C-8), 47.8 (C-9), 25.2 (C-10), 27.9 (C-11), 40.4(C-12), 53.3 (C-13), 41.7 (C-14), 132.3 (C-15), 23.0 (C-16)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物4为石杉碱乙。

化合物5：淡黄色粉末。HR-ESI-MSm/z: 301.191 8[M＋H]+（计算值301.191 1），分子式为C18H24N2O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 13.17 (1H, s, N-H),7.82 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.42 (1H, d,J=9.4 Hz,H-2), 5.41 (1H, brd,J= 4.8 Hz, H-8), 3.33 (3H, s,OMe), 3.04 (1H, td,J= 10.7, 4.8 Hz, H-11), 2.95 (1H, m,H-7), 2.93 (1H, m, H-6a), 2.70（1H, m, H-9a), 2.60 (3H,s,N-Me), 2.59 (1H, overlapped, H-14a), 2.58 (1H,overlapped, H-9b), 2.45 (1H, d,J= 17.2 Hz, H-6b),1.88 (1H, dd,J= 10.6, 3.4 Hz, H-12), 1.71 (2H,overlapped, H-10a, 14b), 1.58 (1H, td,J= 12.3, 3.4 Hz,H-10b), 1.53 (3H, s, H-16)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 165.5 (C-1), 117.8 (C-2), 141.3 (C-3), 121.0 (C-4),143.2 (C-5), 30.3 (C-6), 30.8 (C-7), 124.7 (C-8), 49.1 (C-9), 24.1 (C-10), 77.4 (C-11), 38.5 (C-12), 58.1 (C-13),43.3 (C-14), 132.3 (C-15), 23.2 (C-16), 37.5 (N-Me), 56.1(O-Me)。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定化合物5 为casuarinine B。

化合物6：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 273.195 3[M＋H]+（计算值273.196 1），分子式为C17H24N2O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 13.12 (1H, s, N-H),7.81 (1H, d,J= 9.3 Hz, H-3), 6.43 (1H, d,J= 9.3 Hz,H-2), 2.95 (1H, dd,J= 18.6, 6.9 Hz, H-6a), 2.69 (1H,t,J= 13.4 Hz, H-9a), 2.56 (1H, overlapped, H-9b), 2.56(3H, s,N-Me), 2.40 (1H, d,J= 18.6 Hz, H-6b), 2.01(1H, brs, H-7), 1.84 (2H, m, H-8), 1.78 (1H, m, H-10a),1.67 (1H, d,J= 12.8 Hz, H-14a), 1.47～1.10 (6H,overlapped, H-10b, 11a, 11b, 12, 14b, 15), 0.81 (3H, d,J= 5.2 Hz, H-16)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ:165.1 (C-1), 117.3 (C-2), 141.2 (C-3), 120.0 (C-4),144.4 (C-5), 29.8 (C-6), 33.4 (C-7), 34.6 (C-8), 50.5 (C-9), 19.4 (C-10), 26.6 (C-11), 46.5 (C-12), 58.1 (C-13),43.3 (C-14), 26.6 (C-15), 22.3 (C-16), 36.3 (N-Me)。化合物结构与文献报道一致[13]，故鉴定化合物6 为β-玉柏碱。

化合物7：白色针晶（甲醇）。HR-ESI-MSm/z:271.180 6 [M＋H]+（计算值271.180 5），分子式为C17H22N2O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 13.28 (1H,s, N-H), 7.64 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.43 (1H, d,J=9.4 Hz, H-2), 5.93 (1H, dt,J= 17.0, 10.1 Hz, H-11),5.33 (1H, brd,J= 5.4 Hz, H-8), 5.17 (1H, dd,J=17.0, 2.0 Hz, H-10a), 5.02 (1H, dd,J= 10.1, 2.0 Hz, H-10b), 2.95 (1H, dd,J= 17.7, 5.2 Hz, H-6a), 2.83 (1H,dd,J= 10.1, 4.0 Hz, H-12), 2.76 (1H, d,J= 17.3 Hz,H-14b), 2.39 (6H, s, 2N-Me), 2.41 ～2.36 (2H,overlapped, H-6b, 7), 1.59 (1H, d,J= 17.3 Hz, H-14a),1.51 (3H, s, H-16)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ:165.3 (C-1), 117.6 (C-2), 140.3 (C-3), 118.8 (C-4),143.0 (C-5), 29.2 (C-6), 38.8 (C-7), 124.6 (C-8), 116.4(C-10), 142.5 (C-11), 45.9 (C-12), 59.9 (C-13), 44.5 (C-14), 134.3 (C-15), 23.0 (C-16), 39.6 (2N-Me)。以上数据与文献报道一致[17]，故鉴定化合物7 为蛇足石杉碱。

化合物 8：淡黄色粉末。HR-ESI-MSm/z:257.165 1 [M＋H]+（计算值257.164 8），分子式为C16H20N2O。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.78 (1H,d,J= 9.5 Hz, H-3), 6.38 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-2), 5.81(1H, ddd,J= 17.0, 10.3, 9.4 Hz, H-11), 5.47 (1H, brd,J= 5.3 Hz, H-8), 5.34 (1H, dd,J= 17.0, 2.0 Hz, H-10a),5.20 (1H, dd,J= 10.3, 2.0 Hz, H-10b), 2.83 (1H, dd,J= 17.8, 5.4 Hz, H-6a), 2.76 (1H, dd,J= 9.4, 4.2 Hz,H-12), 2.65 (1H, d,J= 17.1 Hz, H-14a), 2.55 (1H, m,H-7), 2.36 (3H, s,N-Me), 2.31 (1H, d,J= 17.8 Hz, H-6b), 1.69 (1H, d,J= 17.1 Hz, H-14b), 1.57 (3H, s, H-16)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 165.5 (C-1),118.6 (C-2), 142.2 (C-3), 119.4 (C-4), 144.4 (C-5), 30.2(C-6), 38.2 (C-7), 126.1 (C-8), 118.6 (C-10), 138.2 (C-11), 45.5 (C-12), 57.1 (C-13), 42.6 (C-14), 134.5 (C-15), 22.9 (C-16), 28.5 (N-Me)。以上数据与文献报道一致[18]，故鉴定化合物8 为N-demethylhuperzinine。

化合物9：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 243.150 1[M＋H]+（计算值243.149 2），分子式为C15H18N2O。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 7.79 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.36 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-2), 5.69 (1H, dt,J= 16.9, 9.9 Hz, H-11), 5.48 (1H, br d,J= 5.5 Hz, H-8), 5.27 (1H, dd,J= 16.9, 2.2 Hz, H-10a), 5.17 (1H, dd,J= 10.2, 2.2 Hz, H-10b), 2.83 (1H, dd,J= 17.9, 5.3 Hz,H-6a), 2.52 (1H, m, H-7), 2.45 (1H, dd,J= 9.4, 4.0 Hz, H-12), 2.30 (1H, d,J= 17.9 Hz, H-6b), 2.25 (1H,d,J= 17.1 Hz, H-14a), 1.96 (1H, d,J= 17.1 Hz, H-14b), 1.53 (3H, s, Me-16)；13C-NMR (100 MHz,CD3OD)δ: 165.6 (C-1), 120.0 (C-2), 142.5 (C-3), 122.2(C-4), 143.5 (C-5), 30.2 (C-6), 37.3 (C-7), 126.6 (C-8),118.4 (C-10), 137.8 (C-11), 50.8 (C-12), 52.3 (C-13),48.2 (C-14), 134.3 (C-15), 22.9 (C-16)。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定化合物9 为石杉碱丙。

化合物10：白色粉末。HR-ESI-MSm/z: 273.195 2[M＋H]+（计算值273.196 1），分子式为C17H24N2O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 13.18 (1H, s, N-H),7.64 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.45 (1H, d,J= 9.4 Hz,H-2), 5.94 (1H, dt,J= 17.0, 10.0 Hz, H-11), 5.16 (1H,dd,J= 17.0, 2.0 Hz, H-10a), 4.95 (1H, dd,J= 10.0, 2.0 Hz, H-10b), 3.05 (1H, dd,J= 18.5, 6.6 Hz, H-6a), 2.73(1H, dd,J= 10.0, 3.2 Hz, H-12), 2.41 (6H, s, 2N-Me),2.26 (1H, d,J= 18.5 Hz, H-6b), 2.05 (1H, m, H-7), 1.65(1H, m, H-8b), 1.57 (1H, m, H-14a), 1.33～1.29 (1H,m, H-14b), 1.28～1.16 (2H, overlapped, H-8a, 15), 0.81(3H, d,J= 5.9 Hz, Me-16)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 164.9 (C-1), 117.4 (C-2), 142.0 (C-3), 118.9 (C-4),144.7 (C-5), 29.8 (C-6), 37.9 (C-7), 42.5 (C-8), 115.2 (C-10), 141.6 (C-11), 47.8 (C-12), 61.1 (C-13), 47.5 (C-14),27.3 (C-15), 22.2 (C-16), 39.7 (2N-Me)。以上数据与文献报道一致[17]，故鉴定化合物 10 为 8,15-dihydrohuperzinine。

化合物 11：淡黄色粉末。HR-ESI-MSm/z:271.181 1 [M＋H]+（计算值271.180 5），提示其分子式为C17H22N2O。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ:7.68 (1H, d,J= 9.4 Hz, H-3), 6.36 (1H, d,J= 9.4 Hz,H-2), 5.53 (1H, m, H-8), 2.90 (1H, dd,J= 9.6, 8.2 Hz,H-9a), 2.80 (1H, dd,J= 17.6, 5.1 Hz, H-6a), 2.71 (1H,m, H-7), 2.62 (3H, s,N-Me), 2.47 (1H, d,J= 16.4 Hz,H-14a), 2.36 (1H, d,J= 17.9 Hz, H-6b), 2.33 (1H, dd,J= 9.4, 7.5 Hz, H-9b), 2.13 (1H, d,J= 16.4 Hz, H-14b),1.89 (1H, m, H-11), 1.64 (1H, overlapped, H-12), 1.64(3H, s, Me-16), 1.07 (1H, d,J= 6.5 Hz, H-10)；13C-NMR(100 MHz, CD3OD)δ: 165.6 (C-1), 117.8 (C-2), 144.0 (C-3), 121.9 (C-4), 142.4 (C-5), 29.3 (C-6), 31.5 (C-7), 126.5(C-8), 63.5 (C-9), 17.7 (C-10), 33.0 (C-11), 52.6 (C-12),64.0 (C-13), 42.8 (C-14), 135.6 (C-15), 23.4 (C-16), 38.5(N-Me)。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定化合物11 为casuarinine I。

4 讨论

本研究综合运用多种色谱和波谱技术，对藤石松总生物碱部位进行了化学成分研究，共分离鉴定了11 个化合物，均为石松生物碱类化合物。其中，化合物1 为新化合物，命名为6-羟基-β-玉柏碱。现代药理研究表明，石杉碱甲具有高效低毒、可逆并选择性抑制乙酰胆碱酯酶的活性[3]，这类生物碱已引起了国内外科学家注意。据文献报道，石松生物碱类成分表现出良好的抗胆碱酯酶活性[19]，casuarine B（3）、N-demethylhuperzinine（8）和casuarinine I（11）对乙酰胆碱酯酶表现出一定的的抑制作用，IC50值分别为46.40[15]、15.0、12.1 μmol/L[12]；石杉碱丙（9）和石杉碱甲两者在抗胆碱酯酶作用方面可能有一定的交互协同作用[20]。以上研究结果进一步丰富了藤石松的化学成分内涵，对阐明其药效物质提供了数据支持，也为其后续的开发应用提供了科学依据。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突