长鞭红景天中脂肪族类化合物及抗疟活性研究

苟 亮 ，卯 锦 ，刘博超 ，雷 丹 ，孙 河 ，刘 蓉 ，肖朝江 ，姜 北 *

1.云南省滇西抗病原植物资源筛选研究重点实验室，云南 大理 671000

2.大理大学药学院&药物研究所，云南 大理 671000

长鞭红景天Rhodiolafastigiata(Hook.f.et Thoms.) S.H.Fu，别名宽叶红景天、竖枝景天、大理景天，属于红景天属植物，为多年生草本，产于我国西藏、云南、四川等地，生于海拔2 500～5 400 m 的高山石砾中，在克什米尔地区、尼泊尔、锡金和不丹也有分布[1]。在《四川省藏药材标准（2020 年版）》中记载长鞭红景天味涩、甘、苦，性凉；有清热、利肺的功能，用于治疗感冒引起的肺热、气管炎、口臭。在《云南中药资源名录》中记载其有治疗跌打的效用，亦能够治疗血瘀、肿胀和创伤[2]。近年来，有关长鞭红景天的化学成分研究较少，大多是利用质谱联用技术对化学成分进行分析，其药理研究亦少见。本课题组前期对该植物进行抗疟活性筛选发现长鞭红景天具有一定抗疟活性，且该植物主要生长于西南高海拔寒冷地区，由于脂肪族化合物是高寒地区植物所含有的特征性成分之一，具有保护植物防止冻害等多种重要生理功能，具有一定的研究价值。为此，本研究针对长鞭红景天中的脂肪族类化合物进行系统研究，从长鞭红景天醇提物中分离得到15 个化合物，分别鉴定为10α-葫芦-7,24二烯醇（10α-cucurbita-7,24-diene-3β-ol，1）、β-香树脂醇乙酸酯（β-amyrin acetate，2）、豆甾烷-3-酮（stigmastan-3-one，3）、豆甾-4-烯-3-酮（stigmast-4-en-3-one，4）、β-谷甾醇（β-sitosterol，5）、schleicheol 1（6）、豆甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮[stigmast-4,6,8(14),22-tetraen-3-one，7]、(22E,24R)-5α,8αepidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol（8）、豆甾-4-烯-6β-醇-3-酮（stigmast-4-en-6β-ol-3-one，9）、3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮（7-oxositosterol，10）、6α-羟基豆甾-4-烯-3-酮（stigmast-4-ene-6α-ol-3-one，11）、豆甾烷-3,6-二醇（stigmastane-3,6-diol，12）、正二十二烷醇（1-docosanol，13）、二十四烷醇（tetracosanol，14）、去氢木香内酯（dehydrocostus lactone，15）。其中化合物1 为新化合物，命名为表葫芦二烯醇；化合物2、13 和14 为首次从该植物中分离得到，化合物3、4 和6～15 均为首次从红景天属中分离得到。利用本课题组资源，采用SYBR Green I 法对化合物的抗疟活性进行筛选，发现化合物15 在50 µmol/L 下对恶性疟原虫3D7 株有一定抗疟活性，抑制率达65.24%。

1 仪器与材料

Bruker Avance Ⅲ-400 核磁共振仪（德国布鲁克公司，TMS 为内标）；Dionex Ultimate 3000 型超高效液相色谱仪（美国戴安公司）；Bruker Daltonics MS系统（德国布鲁克公司）；生物光学显微镜EX30（宁波舜宇仪器有限公司）；BSC-1000 II A2 型生物安全柜（苏州安泰空气技术有限公司）；varioskan LUX 多功能酶标仪（美国Thermo Fisher Scientific 公司）；超纯水机（上海和泰仪器有限公司）；5510E 型二氧化碳培养箱（美国NuAire 公司）；柱色谱用硅胶和GF254薄层色谱硅胶板（青岛海洋化工厂）；RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；AL204 型电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；MCI gel CHP-20/P120（75～150 μm，日本三菱公司）；Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶（瑞典 Amersham Biosciences 公司）；RP-18（40～75 μm，日本Fuji 公司）；环己烷（分析纯，西陇科技有限公司）；异丙醇（分析纯，上海强顺化学试剂有限公司）；石油醚、氯仿、醋酸乙酯、丙酮、甲醇均为工业级重蒸后使用；DMSO（天津市科密欧化学试剂有限公司）；氯喹二磷酸盐（美国Sigma 公司，批号BCBK7067V）；SYBR Green I（美国Molecular Probes 公司）。

本实验所用恶性疟原虫（3D7 株）为中国科学院上海免疫与感染研究所江陆斌课题组赠予；所用植物样品于2020 年9 月采自云南德钦，由大理大学药学院张永增博士鉴定为长鞭红景天Rhodiola fastigiata(Hook.f.& Thomson) S.H.Fu，植物标本（20200922-7）保存于大理大学云南省滇西抗病原植物资源筛选研究重点实验室。

2 提取与分离

长鞭红景天干燥全株9.17 kg，95%乙醇冷浸提取4 次，每次24 h，合并滤液，减压浓缩得总浸膏1 792 g，经硅胶柱依次用石油醚、醋酸乙酯、丙酮、甲醇进行固相萃取，得石油醚、醋酸乙酯、丙酮及甲醇4 个萃取部位，石油醚部位经硅胶柱色谱以石油醚-醋酸乙酯（100∶1～0∶1）梯度洗脱，经薄层色谱检识，合并相同流分，得9 个组分Frs.1～9。组分Fr.4 用硅胶柱色谱分离，石油醚-醋酸乙酯（100∶1）洗脱，得化合物2（95 mg）；Fr.7 经硅胶柱色谱，以石油醚-醋酸乙酯（100∶1）洗脱，薄层色谱检识合并相同流分，得3 个流分Fr.7-1～7-3，Fr.7-2 经硅胶柱色谱（环己烷-醋酸乙酯90∶1、环己烷-丙酮60∶1）反复洗脱，得化合物3（12 mg）；Fr.8 经硅胶柱色谱以石油醚-丙酮（100∶1）洗脱，得（Fr.8-1～8-5）5 个亚组分，Fr.8-4 经硅胶柱色谱（环己烷-丙酮140∶1）洗脱，得组分Fr.8-4-1～Fr.8-4-6，Fr.8-4-6 再经硅胶柱色谱（环己烷-异丙醇100∶1）洗脱，得Fr.8-4-6-1～8-4-6-3，Fr.8-4-6-3又以环己烷-丙酮（100∶1～0∶1）多次硅胶柱色谱，得化合物13（10 mg）；组分Fr.8-3 经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮140∶1）洗脱，得Fr.8-3-1～Fr.8-3-8 这8 个亚组分，Fr.8-3-4 再经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮32∶1）洗脱，得3 个组分Fr.8-3-4-1～8-3-4-3，Fr.8-3-4-1 用石油醚-丙酮系统（32∶1）洗脱得（Fr.8-3-4-1-1～8-3-4-1-4）4 个流分，Fr.8-3-4-1-1 再经Sephadex LH-20 柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）洗脱，得化合物1（20 mg）。醋酸乙酯固相萃取部位经硅胶柱色谱以氯仿-丙酮系统（1∶0～0∶1）梯度洗脱，得（Fr.A～H）8 个组分。组分Fr.A 用硅胶柱色谱分离，石油醚-醋酸乙酯系统（80∶1）洗脱，薄层色谱检识并合并相同流分，得（Fr.A-1～A-9），9 个亚流分；Fr.A-7 经硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯70∶1）及Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）反复洗脱得化合物14（25 mg）；Fr.A-8 经Sephadex LH-20（氯仿-甲醇1∶1）洗脱，薄层色谱法检识合并相同组分，得到6 个流分（Fr.A-8-1～A-8-6），Fr.A-8-4 经硅胶柱色谱（纯氯仿系统，石油醚-丙酮系统55∶1）反复洗脱得化合物4（64 mg），Fr.A-8-5 经硅胶柱色谱（纯氯仿系统）洗脱得（Fr.A-8-5-1～Fr.A-8-5-5）5 个流分，Fr.A-8-5-1 再经RP-18 柱色谱（60%甲醇-水）洗脱得化合物15（27 mg）；Fr.B 用MCI 柱色谱（甲醇-水10%～100%）梯度洗脱得（Fr.B-1～B-9），9 个亚组分，Fr.B-9 经硅胶柱色谱石油醚-丙酮洗脱（6∶1）洗脱，得化合物5（500 mg）；Fr.B-8 经硅胶柱色谱（石油醚-丙酮60∶1）洗脱，经薄层色谱检识合并相同组分得（Fr.B-8-1～Fr.B-8-13）13 个亚组分，Fr.B-8-8 经多次硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯系统5∶1，氯仿-醋酸乙酯系统60∶1）洗脱，得化合物6（23 mg）；Fr.B-8-3 经硅胶柱色谱以纯氯仿系统洗脱，经薄层色谱检识合并得（Fr.B-8-3-1～B-8-3-7），7 个流分，Fr.B-8-3-2 再经硅胶柱色谱（氯仿-丙酮80∶1）洗脱，得化合物7（14 mg）；Fr.B-9 经Sephadex LH-20 凝胶柱色谱（氯仿-甲醇1∶1）洗脱，薄层色谱检识合并相同组分得（Fr.B-9-1～B-9-3）3 个流分，Fr.B-9-2 经硅胶柱色谱（氯仿-丙酮系统30∶1）洗脱，薄层色谱检识合并，得（Fr.B-9-2-1～B-9-2-5），5 个流分，Fr.B-9-2-2 再经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（4∶1）洗脱，得化合物8（34 mg）；Fr.B-9-2-3 经硅胶柱色谱（石油醚-醋酸乙酯4∶1、氯仿-醋酸乙酯10∶1）多次柱色谱分离，得化合物9（11 mg）、10（12 mg）、11（7 mg）。Fr.C 用硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮系统（80∶1～0∶1）梯度洗脱，经薄层色谱检识，合并相同流分，得13 个流分（Fr.C-1～C-13），Fr.C-7 经Sephadex LH-20（丙酮）洗脱，得化合物12（10 mg）。

3 结构鉴定

3.1 新化合物的鉴定

表1 化合物1 的1H-NMR 和13C-NMR 数据 (400/100 MHz, CDCl3)Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1 (400/100 MHz, CDCl3)

图1 化合物1 的结构Fig.1 Structure of compound 1

3.2 已知化合物的鉴定

化合物2：无色针晶（氯仿），C32H52O2。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.17 (1H, t,J= 3.7 Hz, H-12),4.49 (1H, m, H-3), 2.04 (3H, s, -CH3CO), 1.93 (1H, m,H-8), 1.88 (1H, m, H-2a), 1.85 (1H, m, H-11a), 1.81(1H, m, H-2b), 1.78 (1H, m, H-16a), 1.76 (1H, m, H-15a), 1.75 (1H, m, H-11b), 1.70 (1H, m, H-1a), 1.69(1H, m, H-15b), 1.68 (1H, m, H-16b), 1.54 (1H, m, H-19a), 1.52 (2H, m, H-6), 1.50 (1H, m, H-7a), 1.44 (2H,m, H-22), 1.41 (1H, m, H-7b), 1.38 (1H, m, H-1b), 1.31(1H, m, H-21a), 1.27 (1H, m, H-9), 1.22 (1H, m, H-21b), 1.12 (3H, s, H-27), 1.10 (1H, m, H-19b), 1.08(1H, m, H-5), 0.96, 0.95 (each 3H, overlapped, H-25,26), 0.86, 0.86, 0.86, 0.86 (12H, overlapped, 4×CH3,H-23, 24, 29, 30), 0.82 (3H, s, H-28)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 38.3 (C-1), 23.6 (C-2), 80.9 (C-3), 37.7(C-4), 55.2 (C-5), 18.3 (C-6), 32.6 (C-7) 39.8 (C-8),47.6 (C-9), 37.1 (C-10), 23.5 (C-11), 121.6 (C-12),145.2 (C-13), 41.7 (C-14), 26.1 (C-15), 26.9 (C-16),32.5 (C-17), 47.2 (C-18), 46.8 (C-19), 31.1 (C-20), 34.7(C-21), 37.1 (C-22), 28.1 (C-23), 15.6 (C-24), 16.7 (C-25), 16.8 (C-26), 26.0 (C-27), 28.4 (C-28), 33.4 (C-29),23.7 (C-30), 171.0 (-CH3CO), 21.4 (-CH3CO)。以上数据与文献报道基本一致[4]，故鉴定化合物2 为β-香树脂醇乙酸酯。

化合物3：白色粉末（氯仿），C29H50O。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 2.35 (2H, m, H-2), 2.24 (2H, m,H-4), 1.82 (2H, m, H-1), 1.81 (1H, m, H-5), 1.76 (1H,m, H-12a), 1.67 (1H, m, H-16a), 1.66 (1H, m, H-7a),1.63 (1H, m, H-25), 1.60 (1H, m, H-16b), 1.55 (1H, m,H-14), 1.54 (1H, m, H-9), 1.43 (1H, m, H-7b), 1.42(1H, m, H-15a), 1.41 (1H, m, H-11a), 1.39 (1H, m, H-20), 1.36 (1H, m, H-11b), 1.34 (1H, m, H-22a), 1.31(1H, m, H-6a), 1.26 (2H, m, H-23), 1.23 (2H, m, H-28),1.20 (1H, m, H-6b), 1.17 (1H, m, H-22b), 1.14 (1H, m,H-17), 1.06 (1H, m, H-24), 1.00 (3H, s, H-19), 0.90(3H, d,J= 6.4 Hz, H-21), 0.82～0.85 (6H, m, H-26,29), 0.80 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-27), 0.67 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 38.7 (C-1), 38.4 (C-2),210.2 (C-3), 44.9 (C-4), 46.8 (C-5), 29.1 (C-6), 31.9 (C-7), 35.5 (C-8), 53.9 (C-9), 35.8 (C-10), 21.6 (C-11),40.0 (C-12), 42.7 (C-13), 56.3 (C-14), 24.4 (C-15), 28.4(C-16), 56.4 (C-17), 12.2 (C-18), 11.6 (C-19), 36.3 (C-20), 18.9 (C-21), 34.0 (C-22), 26.1 (C-23), 45.9 (C-24),29.2 (C-25), 19.9 (C-26), 19.1 (C-27), 23.2 (C-28), 12.1(C-29)。以上数据与文献报道基本一致[5]，故鉴定化合物3 为豆甾烷-3-酮。

化合物4：白色粉末（氯仿），C29H48O。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.72 (1H, s , H-4) , 2.41 (2H, m,H-2), 2.35 (2H, m, H-6), 1.83 (2H, m, H-1), 1.67 (1H,m, H-16a), 1.62 (1H, m, H-25), 1.61 (1H, m, H-8), 1.60(1H, m, H-12a), 1.59 (1H, m, H-16b), 1.57 (1H, m, H-11a), 1.53 (2H, m, H-7), 1.52 (1H, m, H-12b), 1.50 (1H,m, H-14), 1.42 (1H, m, H-15a), 1.42 (1H, m, H-11b),1.39 (1H, m, H-20), 1.34 (1H, m, H-22a), 1.26 (2H, m,H-23), 1.25 (1H, m, H-15b), 1.23 (2H, m, H-28), 1.15(1H, m, H-22b), 1.17 (3H, s, H-19), 1.14 (1H, m, H-17),1.05 (1H, m, H-24), 1.01 (1H, m, H-9), 0.91 (3H, d,J=6.5 Hz, H-21), 0.83 (3H, t,J= 7.2 Hz, H-29), 0.82 (3H,d,J= 6.5 Hz, H-26), 0.80 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-27),0.70 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ:35.8 (C-1), 33.9 (C-2), 199.9 (C-3), 123.8 (C-4), 171.9(C-5), 33.0 (C-6), 32.1 (C-7), 35.7 (C-8), 53.9 (C-9),38.7 (C-10), 21.1 (C-11), 39.7 (C-12), 42.4 (C-13), 55.9(C-14), 24.3 (C-15), 28.3 (C-16), 56.1 (C-17), 12.0 (C-18), 17.5 (C-19), 36.2 (C-20), 18.8 (C-21), 34.1 (C-22),26.1 (C-23), 45.8 (C-24), 29.2 (C-25), 19.9 (C-26), 19.1(C-27), 23.1 (C-28), 12.1 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[6]，故鉴定化合物4 为豆甾-4-烯-3-酮。

化合物5：白色粉末（氯仿），C29H50O。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.35 (1H, d,J= 5.3 Hz, H-6),3.51 (1H, m, H-3), 2.27 (2H, m, H-4), 1.94 (1H, m, H-1a), 1.83 (2H, m, H-7), 1.77 (1H, m, H-11a), 1.76 (1H,m, H-1b), 1.70 (2H, m, H-2), 1.65 (1H, m, H-16a), 1.63(1H, m, H-25), 1.61 (1H, m, H-12a), 1.55 (1H, m, H-15a), 1.54 (1H, m, H-11b), 1.51 (1H, m, H-12b), 1.43(1H, m, H-8), 1.42 (1H, m, H-17), 1.40 (1H, m, H-20),1.36 (1H, m, H-16a), 1.34 (1H, m, H-22a), 1.32 (1H, m,H-15b), 1.27 (2H, m, H-23), 1.24 (2H, m, H-28), 1.17(1H, m, H-22b), 1.15 (1H, m, H-14), 1.06 (1H, m, H-24), 1.00 (3H, s, H-19), 0.96 (1H, m, H-9), 0.91 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-21), 0.84 (3H, t,J= 7.5 Hz, H-29), 0.83(3H, d,J= 7.1 Hz, H-27), 0.80 (3H, d,J= 7.1 Hz, H-26), 0.67 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 37.3 (C-1), 32.0 (C-2), 71.94 (C-3), 42.4 (C-4), 140.8(C-5), 121.8 (C-6), 31.7 (C-7), 32.0 (C-8), 50.2 (C-9),36.6 (C-10), 21.2 (C-11), 39.9 (C-12), 42.4 (C-13), 56.8(C-14), 24.4 (C-15), 28.4 (C-16), 56.1 (C-17), 12.0 (C-18), 19.9 (C-19), 36.3 (C-20), 19.55 (C-21), 34.0 (C-22), 26.1 (C-23), 45.9 (C-24), 29.2 (C-25), 18.7 (C-26),19.2 (C-27) , 23.2 (C-28), 12.1 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[7]，故鉴定化合物5 为β-谷甾醇。

化合物6：无色油状液体（氯仿），C30H52O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42 (1H, s, H-6), 3.52(1H, m, H-7), 3.34 (1H, m, H-3), 3.27 (3H, s, 7-OMe),2.30 (2H, m, H-4), 1.83 (1H, m, H-14), 1.76 (1H, m, H-1a), 1.70 (1H, m, H-2a), 1.68 (1H, m, H-8), 1.66 (1H,m, H-2b), 1.63 (1H, m, H-25), 1.60 (1H, m, H-12a),1.59 (1H, m, H-15a), 1.55 (1H, m, H-12b), 1.53 (1H,m, H-11a), 1.44 (1H, m, H-1b), 1.42 (1H, m, H-11b),1.39 (1H, m, H-16a), 1.38 (1H, m, H-20), 1.37 (1H, m,H-15b), 1.35 (1H, m, H-22a), 1.32 (1H, m, H-16b), 1.28(2H, m, H-23), 1.26 (1H, m, H-9), 1.24 (2H, m H-28),1.19 (1H, m, H-17), 1.17 (1H, m, H-22b), 1.04 (1H, m,H-24), 1.02 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-21), 0.83 (3H, t,J= 7.2 Hz, H-29), 0.82 (3H, d,J= 7.0 Hz, H-27), 0.79 (3H, d,J= 6.9 Hz, H-26), 0.67 (3H, s,H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 37.0 (C-1), 31.7(C-2), 71.5 (C-3), 42.0 (C-4), 144.1 (C-5), 121.5 (C-6),82.0 (C-7), 37.2 (C-8), 48.5 (C-9), 36.5 (C-10), 21.3 (C-11), 39.7 (C-12), 42.9 (C-13), 56.5 (C-14), 25.8 (C-15),28.6 (C-16), 55.6 (C-17), 11.9 (C-18), 19.1 (C-19), 36.2(C-20), 18.9 (C-21), 34.0 (C-22), 26.0 (C-23), 45.9 (C-24), 29.2 (C-25), 19.1 (C-26), 19.9 (C-27), 23.1 (C-28),12.1 (C-29), 54.9 (7-OMe)。以上数据与文献报道基本一致[8]，故鉴定化合物6 为schleicheol 1。

化合物7：油状液体（氯仿），C29H42O。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 6.60 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-7),6.02 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-6), 5.73 (1H, s, H-4), 5.22(2H, dd,J= 10.9, 7.4 Hz, H-22, 23), 2.53 (1H, m, H-9),2.51 (1H, m, H-2a), 2.42 (1H, m, H-2b), 2.12 (2H, m,H-15), 2.05 (1H, m, H-20), 1.79 (2H, m, H-1), 1.73(1H, m, H-11a), 1.64 (1H, m, H-16a), 1.63 (1H, m, H-12a), 1.60 (1H, m, H-11b), 1.59 (1H, m, H-12b), 1.58(1H, m, H-24), 1.57 (1H, m, H-25), 1.52 (1H, m, H-16b), 1.36 (1H, m, H-28a), 1.28 (1H, m ,H-17), 1.22(1H, m, H-28b), 1.05 (3H, d,J= 6.7 Hz, H-21), 0.98(3H, s, H-19), 0.95 (3H, s, H-18), 0.92 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-26), 0.85 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-27), 0.83 (3H, t,J= 6.8 Hz, H-29)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 34.2(C-1, 2), 199.7 (C-3), 123.1 (C-4), 164.6 (C-5), 124.5(C-6), 134.2 (C-7), 124.5 (C-8), 44.4 (C-9), 36.8 (C-10), 22.8 (C-11), 35.6 (C-12), 44.1 (C-13), 156.3 (C-14), 25.4 (C-15), 27.8 (C-16), 55.7 (C-17), 19.7 (C-18),16.7 (C-19), 39.5 (C-20), 21.3 (C-21), 135.1 (C-22),132.6 (C-23), 42.9 (C-24), 33.2 (C-25), 17.8 (C-26),20.1 (C-27), 19.1 (C-28), 14.3 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[9]，故鉴定化合物7 为stigmast-4,6,8(14),22-tetraen-3-one。

化合物8：白色粉末（氯仿），C28H44O3。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 6.49 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-7),6.21 (1H, d,J= 8.5 Hz, H-6), 5.11～5.23 (2H, m, H-22, 23), 3.95 (1H, m, H-3), 2.10 (1H, m, H-20), 2.07(1H, m, H-4a), 1.99 (1H, m, H-4b), 1.88 (1H, m, H-24),1.83 (1H, m, H-12a), 1.81 (1H, m, H-1a), 1.79 (1H, m,H-2a), 1.67 (1H, m, H-14), 1.58 (1H, m, H-1b), 1.57(1H, m, H-2b), 1.54 (1H, m, H-25), 1.53 (1H, m, H-9),1.52 (1H, m, H-15a), 1.51 (1H, m, H-16a), 1.50 (1H, m,H-11a), 1.48 (1H, m, H-15b), 1.46 (1H, m, H-16b), 1.44(1H, m, H-17), 1.23 (1H, m, H-11b), 1.20 (1H, m, H-12b), 0.98 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-21), 0.88 (3H, d,J=6.9 Hz, H-28), 0.86 (3H, s, H-19), 0.82 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-27), 0.81 (3H, s, H-18), 0.79 (3H, d,J= 6.3 Hz,H-26)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 34.7 (C-1), 30.1(C-2) 66.4 (C-3), 36.9 (C-4), 82.3 (C-5), 135.5 (C-6),130.8 (C-7), 79.5 (C-8), 51.1 (C-9), 37.0 (C-10), 23.4(C-11), 39.4 (C-12), 44.6 (C-13), 51.7 (C-14), 20.7 (C-15), 28.7 (C-16), 56.2 (C-17), 12.9 (C-18), 18.2 (C-19),39.8 (C-20), 20.9 (C-21), 135.3 (C-22), 132.3 (C-23),42.8 (C-24), 33.1 (C-25), 19.6 (C-26), 19.9 (C-27), 17.6(C-28)。以上数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化合物 8 为(22E,24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol。

化合物9：白色粉末（氯仿），C29H48O2。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 5.78 (1H, s, H-4), 4.32 (1H, t,J= 2.8 Hz, H-6), 2.48 (2H, m, H-2), 2.02 (1H, m, H-1a), 2.00 (1H, m, H-7a), 1.97 (1H, m, H-1b), 1.71 (1H,m, H-8), 1.69 (1H, m, H-16a), 1.63 (1H, m, H-25), 1.61(1H, m, H-12a), 1.59 (1H, m, H-16b), 1.56 (1H, m, H-11a), 1.55 (1H, m, H-14), 1.53 (1H, m, H-12b), 1.46(1H, m, H-11b), 1.39 (1H, m, H-7b), 1.38 (1H, m, H-20), 1.36 (2H, m, H-15), 1.35 (3H, s, H-19), 1.31 (1H,m, H-22a), 1.30 (1H, m, H-23a), 1.25 (1H, m, H-23b),1.23 (2H, m, H-28), 1.16 (1H, m, H-22b), 1.13 (1H, m,H-17), 1.06 (1H, m, H-24), 1.02 (1H, m, H-9), 0.90(3H, d,J= 6.5 Hz, H-21), 0.83 (3H, t,J= 7.8 Hz, H-29), 0.81 (3H, d,J= 7.3 Hz, H-26), 0.78 (3H, d,J= 7.0 Hz, H-27), 0.72 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ: 37.1 (C-1), 34.3 (C-2), 200.9 (C-3), 126.2(C-4), 169.1 (C-5), 73.1 (C-6), 38.6 (C-7), 29.8 (C-8),53.6 (C-9), 38.1 (C-10), 21.1 (C-11), 39.6 (C-12), 42.5(C-13), 55.9 (C-14), 24.2 (C-15), 28.3 (C-16), 56.1 (C-17), 12.1 (C-18), 19.9 (C-19), 36.2 (C-20), 18.8 (C-21),33.9 (C-22), 26.0 (C-23), 45.8 (C-24), 29.1 (C-25), 19.5(C-26), 19.1 (C-27), 23.1 (C-28), 12.0 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[11]，故鉴定化合物9 为豆甾-4-烯-6β-醇-3-酮。

化合物10：白色粉末（氯仿），C29H48O2。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.68 (1H, s, H-6), 3.66 (1H,m, H-3), 2.39 (2H, m, H-4), 2.23 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-8), 1.90 (1H, m, H-9), 1.85 (1H, m, H-1a), 1.75 (1H, m,H-2a), 1.72 (1H, m, H-14), 1.71 (1H, m, H-16a), 1.68(1H, m, H-2b), 1.63 (1H, m, H-27), 1.62 (1H, m, H-11a), 1.57 (2H, m, H-12), 1.50 (1H, m, H-11b), 1.48(1H, m, H-15a), 1.47 (1H, m, H-20), 1.42 (1H, m, H-16b), 1.40 (1H, m.H-15b), 1.35 (1H, m, H-22a), 1.34(1H, m, H-1b), 1.26 (2H, m, H-23), 1.24 (2H, m, H-28),1.19 (3H, s, H-19), 1.17 (1H, m, H-17), 1.16 (1H, m, H-22b), 1.06 (1H, m, H-24), 0.92 (3H, d,J= 6.5 Hz, H-21), 0.84 (3H, t,J= 7.5 Hz, H-29), 0.82 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-26), 0.80 (3H, d,J= 6.9 Hz, H-27), 0.67 (3H, s,H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 36.4 (C-1), 31.2(C-2), 70.5 (C-3), 41.9 (C-4), 165.4 (C-5), 126.1 (C-6),202.6 (C-7), 45.5 (C-8), 49.9 (C-9), 38.4 (C-10), 21.3(C-11), 38.7 (C-12), 43.1 (C-13), 50.0 (C-14), 26.4 (C-15), 28.6 (C-16), 54.7 (C-17), 12.1 (C-18), 17.4 (C-19),36.2 (C-20), 19.1 (C-21), 34.0 (C-22), 26.1 (C-23), 45.8(C-24), 29.2 (C-25), 19.1 (C-26), 19.9 (C-27), 23.1 (C-28), 12.1 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物10 为3β-羟基豆甾-5-烯-7-酮。

化合物11：白色粉末（氯仿），C29H48O2。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 6.17 (1H, s, H-4), 4.31 (1H,m, H-6), 2.38 (2H, m, H-2), 1.97 (2H, m, H-1), 1.89(1H, m, H-7a), 1.65 (1H, m, H-16a), 1.62 (1H, m, H-7b), 1.60 (1H, m, H-8), 1.59 (1H, m, H-16b), 1.58 (1H,m, H-25), 1.57 (2H, m, H-12), 1.55 (1H, m, H-14), 1.47(2H, m, H-11), 1.35 (1H, m, H-20), 1.34 (2H, m, H-15),1.33 (1H, m, H-22a), 1.24 (2H, m, H-23), 1.21 (2H, m,H-28), 1.17 (3H, s, H-19), 1.14 (1H, m, H-22b), 1.09(1H, m, H-17), 1.03 (1H, m, H-24), 1.01 (1H, m, H-9),0.91 (3H, d,J= 6.5 Hz, H-21), 0.84 (3H, t,J= 6.5 Hz,H-29), 0.83 (3H, d,J= 7.3 Hz, H-27), 0.81 (3H, d,J=7.3 Hz, H-26), 0.69 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz,CDCl3)δ: 36.3 (C-1), 33.9 (C-2), 199.8 (C-3), 119.7 (C-4), 171.1 (C-5), 68.7 (C-6), 41.5 (C-7), 34.2 (C-8), 53.8(C-9), 39.0 (C-10), 21.1 (C-11), 39.5 (C-12), 42.5 (C-13), 55.6 (C-14), 24.2 (C-15), 28.2 (C-16), 56.0 (C-17),12.1 (C-18), 18.8 (C-19), 36.2 (C-20), 18.4 (C-21), 33.9(C-22), 26.1 (C-23), 45.8 (C-24), 29.1 (C-25), 19.9 (C-26), 19.0 (C-27), 23.1 (C-28), 12.1 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[6]，故鉴定化合物11 为6α-羟基豆甾-4-烯-3-酮。

化合物12：白色粉末（氯仿），C29H52O2。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 3.57 (1H, m, H-3), 3.42(1H, dt,J= 11.0 Hz, 4.0 Hz, H-6), 1.96 (1H, m,H-5),1.80 (1H, m, H-4a), 1.78 (1H, m, H-12a), 1.70 (1H, m,H-7a), 1.68 (1H, m, H-16a), 1.65 (2H, m, H-2), 1.64(1H, m, H-8), 1.63 (1H, m, H-4b), 1.62 (1H, m, H-25),1.59 (1H, m, H-16b), 1.58 (1H, m, H-7b), 1.46 (2H, m,H-1), 1.44 (1H, m, H-15a), 1.41 (2H, m, H-11), 1.40(1H, m, H-12b), 1.40 (1H, m, H-20), 1.39 (1H, m, H-17), 1.35 (1H, m, H-22a), 1.27 (1H, m, H-23a), 1.24(2H, m, H-28), 1.23 (1H, m, H-23b), 1.23 (1H, m, H-15b), 1.17 (1H, m, H-22b), 1.12 (1H, m, H-14), 1.06(1H, m, H-24), 0.91 (1H, m, H-9), 0.90 (3H, d,J= 6.3 Hz, H-21), 0.79～0.85 (12H, overlapped, H-19, 26, 27,29), 0.64 (3H, s, H-18)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 37.3 (C-1), 31.1 (C-2), 71.3 (C-3), 32.3 (C-4), 51.7(C-5), 69.6 (C-6), 41.7 (C-7), 34.3 (C-8), 53.8 (C-9),36.3 (C-10), 21.2 (C-11), 39.9 (C-12), 42.6 (C-13), 56.2(C-14), 24.3 (C-15), 28.3 (C-16), 56.1 (C-17), 12.1 (C-18), 13.5 (C-19), 36.2 (C-20), 18.8 (C-21), 33.9 (C-22),26.1 (C-23), 45.8 (C-24), 29.2 (C-25), 19.9 (C-26), 19.3(C-27), 23.1 (C-28), 12.1 (C-29)。以上数据与文献报道基本一致[13]，故鉴定化合物12 为豆甾烷-3,6-二醇。

化合物13：白色粉末（氯仿），C22H46O。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 3.63 (2H, t,J= 6.6 Hz, H-1), 1.55 (2H, m, H-2), 1.24 (38H, brs, H-3～21), 0.87(3H, t,J= 6.8 Hz, H-22)。EI-MSm/z: 325 (M-H), 308(M-H2O), 280 (M-H2O-CH2=CH2)，以后出现的系列质量数递减14 (CH2) 的碎片峰，其裂解规律完全符合高级直链脂肪醇的特征。以上数据与文献报道基本一致[14]，故鉴定化合物13 为正二十二烷醇。

化合物14：白色粉末（氯仿），C24H50O。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 3.63 (2H, t,J= 6.7 Hz, H-1), 1.55 (2H, m , H-2), 1.24 (42H, brs, H-3～23), 0.87(3H, t,J= 6.7 Hz, H-24)。EI-MSm/z: 336 (M-H2O),308 (M-H2O-CH2=CH2)，以后出现的系列质量数递减14 (CH2) 的碎片峰，其裂解规律完全符合高级直链脂肪醇的特征。以上数据与文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物14 为二十四烷醇。

化合物15：油状液体（氯仿），C15H18O2。1HNMR (400 MHz, CDCl3)δ: 6.20 (1H, d,J= 3.3 Hz, H-13a), 5.48 (1H, d,J= 3.3 Hz, H-13b), 5.25 (1H, d,J=2.3 Hz, H-15a), 5.05 (1H, d,J= 2.3 Hz, H-15b), 4.88(1H, s, H-14a), 4.79 (1H, s, H-14b), 3.95 (1H, t,J=9.2Hz, H-6), 2.82～2.93 (3H, m, H-1, 5, 7), 2.44～2.54(3H, m, H-3a, 3b, 9a), 2.10～2.27 (2H, m, H-8a, 9b),1.81～1.97 (2H, m, H-2a, H-2b), 1.34～1.45 (1H, m,H-8b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 45.1 (C-1), 32.6(C-2), 30.3 (C-3), 151.4 (C-4), 52.0 (C-5), 85.4 (C-6),47.6 (C-7), 31.0 (C-8), 36.4 (C-9), 149.3 (C-10),139.7(C-11), 170.4 (C-12), 120.3 (C-13), 109.6 (C-14),112.6 (C-15)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物15 为去氢木香内酯。

4 生物活性研究

利用本课题组资源，对分离得到的化合物进行抗疟活性筛选。采用SYBR Green I 法[17]，筛选化合物的抗疟活性。样品均用DMSO 配制为10 mmol/L储备液，最终检测体系中疟原虫感染率为1%，红细胞压积2%。实验设置空白组（配制的无虫血和1%DMSO 溶液），阳性对照组（配制的含虫血和阳性药氯喹二磷酸盐溶液），阴性对照组（配制的含虫血和1% DMSO 溶液）及样品组（配制的含虫血和样品溶液），各组中所需母液按1∶1 加入96 孔板，各给药组均设50、5 µmol/L 2 个检测浓度，每个浓度做3 次技术重复。铺板完成后在CO2孵育箱孵育72 h，孵育结束后按照SYBR Green I 法测定荧光，计算抑制率。通过初步筛选，发现化合物15 在50 µmol/L下对恶性疟原虫3D7 株有一定抑制作用，抑制率达（65.24±13.21）%，而在5 µmol/L 浓度下对恶性疟原虫3D7 株无抑制作用 [阳性对照药氯喹二磷酸盐在0.5 µmol/L 下对恶性疟原虫3D7 株抑制率为（95.12±0.37）%]。

5 讨论

本实验采用多种柱色谱分离手段以及单体化合物鉴定方法，从长鞭红景天干燥全株的醇提物中分离鉴定出15 个脂肪族类化合物，其中包含2 个三萜类成分（化合物1 和2）、1 个倍半萜类化合物（化合物15）、10 个甾体类化合物（化合物3～12）以及2 个脂肪醇（化合物13 和14），其中以甾体类成分居多。倍半萜类化合物15 在50 µmol/L 浓度下表现出较好的抗疟活性。根据文献[18-20]报道，一些甾体和萜类化合物具有优异的抗菌、抗炎、抗癌、抗疟和免疫抑制等生物活性，包括本实验分离得到的化合物β-香树脂醇乙酸酯（2）具有高抗炎活性[21]、β-谷甾醇（5）具有抗真菌和抗菌活性[22]。因此，本实验对长鞭红景天物质基础的研究使得对该植物中脂肪族类化学成分和抗疟活性物质有了基本的认识，同时在一定程度上揭示了长鞭红景天在传统用药中具有治疗气管炎、口臭和创伤等的物质来源，进一步为该植物的深入研究与开发利用创造了条件。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突