痰真菌涂片与培养阳性对诊断侵袭性肺部真菌感染的临床应用

桑慧（广东省东莞市樟木头医院,广东 东莞 523629）

侵袭性肺部真菌感染主要是指因真菌感染引发的支气管肺部感染疾病，若患者未能及时治疗，不仅会出现咳嗽、发热、呼吸困难等症状，还会引发气道黏膜炎症、肺部炎症肉芽肿、坏死性肺炎等并发症，进而危及其生命安全。对于侵袭性肺部真菌感染患者而言，因其缺乏典型的临床表现，误诊、漏诊的情况时有发生，容易致使其错过最佳的治疗时机，进而影响预后。因此，如何提高侵袭性肺部真菌感染的诊断准确率显得尤为重要。痰真菌涂片和痰真菌培养均是目前医学上较为常见的两种检查方法，其中，痰真菌涂片具有操作简单、诊断快速的优点，痰真菌培养具有较高的敏感性，二者在侵袭性肺部真菌感染诊断中各有优缺点[1-2]。因此，临床认为，将痰真菌涂片与痰真菌培养联合使用，或能更好地提高侵袭性肺部真菌感染的诊断准确性，为患者的后续治疗提供较为准确、可靠的医学依据[3]。基于此，本文选取了61例侵袭性肺部真菌感染患者进行回顾性分析，就其采用痰真菌涂片与培养阳性的诊断价值进行深入分析和探讨，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 在医院伦理委员会的批准下选取2021年10月-2023年10月期间收治的61例侵袭性肺部真菌感染患者作为观察对象，其中，男患者33例，女患者28例；年龄25-74岁，平均（56.88±10.23）岁；体重46-78kg，平均（60.74±2.15）kg；发病到住院时间1-15d，平均（6.74±1.12）d。纳入标准：①均符合侵袭性肺部真菌感染的临床诊断标准；②均存在不同程度的肺部感染；③均具备完整的临床资料。排除标准：①合并其他心脑血管疾病者；②合并肺癌等恶性肿瘤者；③合并肺结核等其他肺部疾病者；④合并中枢神经系统疾病者。

1.2 方法 痰真菌涂片检查方法如下：采用革兰氏染色作为检查方法。将患者清晨的痰液制作为痰涂片，待痰涂片自然干燥后，将其固定在染色架上进行加热处理。首次染色时间为5min，在染色过程中需确保染色液完全覆盖在痰膜上。染色结束后需进行水洗处理，将涂片上的水清理干净后，采用脱色剂进行1min的脱色处理，必要情况下，可以使用流动水将脱色液冲洗后再进行脱色处理，以痰膜无肉眼看到的红色为最佳。采用水将脱色液冲洗掉后，使用亚甲蓝复染液进行复染处理，复染时间为30s，复染结束后再次进行水洗，待玻片干燥后进行镜检。若肉眼观察玻片样本的痰膜为亮蓝色，且无红色斑块，则为合格玻片。在油镜下全面观察100个视野，详细记录菌丝、真菌孢子、可疑病原菌、正常菌群及细菌吞噬等情况。

痰真菌培养方法如下：把收集到的1-2ml痰液样本放入到处理管中，将螺旋盖拧紧。往处理管内加入1-2倍的4%的氢氧化钠溶液，随后将处理管放入涡旋振荡器中进行振荡处理，振荡时间为30s，以确保痰液样本可以与氢氧化钠溶液充分混合，随后将处理管放入生物安全柜中，在常规室内条件下静置15min。认真检查培养基中的凝固水，若凝固水较多，需沿着斜面去除部分凝固水。采用无菌吸管吸取适量的痰液样本放在培养基中，将培养基保持在斜面水平，随后接种哥伦比亚血琼脂、沙氏葡萄琼脂、念珠菌显色平板，接种后将其放在35℃、5%二氧化碳培养箱中进行培养，连续观察5d，若5d后无真菌生长，则为阴性。若5d后有真菌生长，则为阳性，需将真菌孢子挑出，在电子显微镜下对菌种进行鉴定。

痰真菌涂片与培养阳性方法：将痰真菌涂片检查方法和痰真菌培养方法结合，先通过痰真菌涂片的检查结果确定患者是否存在真菌感染的情况，随后针对可疑的痰涂片或存在明显真菌感染的痰涂片进行相应的痰真菌培养。

1.3 观察指标 ①对比3种检查方法在侵袭性肺部真菌感染诊断中的诊断准确率。②对比3种检查方法在不同真菌中的检出率，真菌种类主要包括白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、毛霉菌、曲霉菌。

1.4 统计学分析 本文的研究数据统一运用SPSS22.0统计学软件分析，以χ2检验计数资料[n(%)]，若P＜0.05，可视为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对比3种检查方法在侵袭性肺部真菌感染诊断中的诊断准确率 痰真菌涂片检查结果显示，有16例为阳性，有45例为阴性。痰真菌培养结果显示，有20例为阳性，有41例为阴性。痰真菌涂片与培养阳性结果显示，有61例为阳性，有0例为阴性。痰真菌涂片与培养阳性的诊断准确率均高于痰真菌涂片检查和痰真菌培养（P＜0.05），详情如表1所示。

表1 3种检查方法在侵袭性肺部真菌感染诊断中的诊断准确率对比

2.2 对比3种检查方法在侵袭性肺部真菌感染不同真菌中的检出率 痰真菌涂片与培养阳性在白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、毛霉菌、曲霉菌的检出率均高于痰真菌涂片检查和痰真菌培养（P＜0.05），详情如表2所示。

表2 3种检查方法在侵袭性肺部真菌感染不同真菌中的检出率对比[n(%)]

3 讨论

侵袭性肺部真菌感染通常继发于多种严重的原发病，其临床表现无特异性，需辅以其他检查方法才能更好地提高临床诊断的准确性，确保患者能及时得到有效治疗，进而改善预后[4-6]。痰真菌涂片和痰真菌培养均是目前医学上较为常见的两种微生物检验方法，近年来，二者均被广泛应用于呼吸道感染疾病的诊断中，与单一的痰真菌涂片与单一的痰真菌培养相比，二者联合使用能更好地提高呼吸道感染疾病的诊断效能。

本文的研究结果显示，采用痰真菌涂片与培养阳性的诊断准确率均高于痰真菌涂片检查和痰真菌培养，说明痰真菌涂片与培养阳性可以显著提高侵袭性肺部真菌感染的诊断准确性。分析原因为，痰真菌涂片可以通过染色、冲洗、烘干等操作程序制作成痰涂片，利用高倍显微镜观察痰液中的真菌生长情况，以此来判断侵袭性肺部真菌感染患者的实际感染情况和感染程度，但该检查方法会受到痰液标本采集时间、标本质量好坏等因素的影响，出现大量假阴性的情况，无法确保诊断准确性[7-8]。痰真菌培养是临床上准确率较高的一种病原学检查，其诊断结果不会受到痰液标本的影响，但真菌的生长速度相对较慢，需要较长的时间才能在固体培养基上完成生长过程，对于需要尽早诊断和治疗的患者而言存在一定的局限性。痰真菌涂片与培养阳性强调先通过痰真菌涂片的检查结果确定患者是否存在真菌感染的情况，随后针对可疑的痰涂片或存在明显真菌感染的痰涂片进行相应的痰真菌培养，这样既能减少不必要的检查操作和医疗资源浪费，又能缩短整体的检查时间，降低误诊率和漏诊率，提高诊断准确率[9]。本文的研究结果显示，痰真菌涂片与培养阳性在白色念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、毛霉菌、曲霉菌的检出率均高于痰真菌涂片检查和痰真菌培养，说明侵袭性肺部真菌感染采用痰真菌涂片与培养阳性可以显著提高不同真菌感染的检出率。分析原因为，不同真菌在肺部组织内的表现均存在一定的差异性，可表现为菌丝、孢子、球囊、内孢囊，痰真菌涂片相对较厚，真菌孢子菌丝容易混在标本内部，染色并不明显，无法准确辨别具体的真菌类型，且在油镜的观察下，孢子菌丝的形态并不明显，容易与细胞碎片、植物纤维混淆，无法做到整片浏览，故该检查方法在提高不同真菌感染检出率的效果上并不理想。痰真菌培养可以直接分离出真菌，随后利用电子显微镜对培养出来的真菌种类进行详细的鉴别，与痰真菌涂片联合使用，可以帮助临床医师更直观地观察患者痰液中的真菌形态和结构，快速发现不同真菌形态的改变，及时对真菌情况进行定性和定量的分析，从而提高不同真菌感染的检出率[10]。

综上所述，痰真菌涂片与培养阳性在侵袭性肺部真菌感染诊断中的应用价值较高，既可以有效提高该疾病的诊断准确率，又可以提升不同真菌种类的检出率。