红金消结胶囊小鼠口服给药急性毒性拆方研究

李雪梅,肖斯婷,高晓新,曹春然（北京市药品检验研究院（北京市疫苗检验中心）,国家药品监督管理局创新药物安全研究与评价重点实验室,中药成分分析与生物评价北京市重点实验室,北京 102206）

红金消结胶囊是彝药，组方由三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑蚂蚁、五香血藤、鸡矢藤、金荞麦、大红袍、柴胡十味药组成，在彝族传统医学中，其功能主治补知凯扎诺，且凯色土，哈息黑。依其处方，按中医理论解释，红金消结胶囊有舒肝理气、软坚散结、活血化瘀、消肿止痛的功效。可用于气滞血瘀所致的乳腺小叶增生、子宫肌瘤、卵巢囊肿。在文献检索中发现，该药疗效显著，但其中八角莲的毒性仍不可小觑，关于红金消结胶囊的急性毒性研究未见报道[1-6]，本研究将红金消结胶囊按其制备工艺进行拆方，分别灌胃，对其全方及其成分分别进行急性毒性试验，观察毒性反应，为临床安全用药提供依据[7-17]。

1 材料

1.1 动物 种属、品系：ICR小鼠；来源：北京维通利华实验动物技术有限公司；实验动物生产许可证编号：SCXK（京）2016-0006号；实验动物使用许可证编号：SYXK（京）2015-0033号；数量：100只；性别：雌性；体重：15.5-18g。

1.2 受试药物 名称：红金消结胶囊（T1），含鬼臼毒素2mg/g（相当于临床用量200倍），批号：181004，有效期：2020/10/05，规格：0.4g/粒，用法用量：口服，一次4粒，一日3次。生产厂家：A公司。

处方：三七75g，香附75g，八角莲45g，鼠妇虫30g，黑蚂蚁30g，五香血藤600g，鸡矢藤600g，金荞麦600g，大红袍600g，柴胡400g。

制法：以上十味药材中，取三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑蚂蚁粉碎成细粉，混匀，灭菌备用；其余五香血藤等五味药，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次1.5小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.28-1.35（50摄氏度）的稠膏，与上述粉末混合，干燥，粉碎，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

名称：鬼臼毒素对照品（T2），批号：111645-201803，生产单位：中国食品药品检定研究院。

名称：八角莲1（T3），含鬼臼毒素24mg/g（相当于临床用量200倍）。

名称：动物药：鼠妇虫、黑蚂蚁（T4）（相当于临床用量200倍）。

名称：三七、香附、八角莲1（含鬼臼毒素24mg/g）原粉（T5）（相当于临床用量200倍）。

名称：合并水煎液：五香血藤、鸡矢藤、金荞麦、大红袍、柴胡（T6）（相当于临床用量200倍）。

名称：八角莲2（T7），含鬼臼毒素81mg/g（相当于临床用量200倍）。

名称：八角莲1（T8），含鬼臼毒素24mg/g（相当于临床用量150倍）。

名称：三七、香附、八角莲1（含鬼臼毒素24mg/g）原粉（T9）（相当于临床用量150倍）。

1.3 仪器设备 电子天平，型号：PL-203、BSA2201。

2 方法

2.1 受试物配置方法 阴性对照N：称取羧甲基纤维素钠（以下简称CMC）1.001g加纯化水至200ml，放置一天溶解。

T1红金消结胶囊：称取红金消结胶囊8.030g，加5%CMC制成20ml（0.402g/ml）；T2鬼臼毒素对照品：称取鬼臼毒素0.036g，加0.5%CMC制成10ml（3.6mg/ml）；T3八角莲1（含鬼臼毒素24mg/g）：称取八角莲1 0.899g，加0.5%CMC制成20ml（0.045g/ml）；T4鼠妇虫、黑蚂蚁：称取鼠妇虫、黑蚂蚁1.215g，加0.5%CMC制成20ml（0.061g/ml）；T5三七、香附、八角莲1（含鬼臼毒素24mg/g）原粉：称取三七、香附、八角莲1原粉（按处方比例）3.907g，加0.5%CMC制成20ml（0.195g/ml）；T6合并水煎液：五香血藤、鸡矢藤、金荞麦、大红袍、柴胡：分别称取五香血藤12g、鸡矢藤12g、金荞麦12g、大红袍12g、柴胡8g，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次1.5小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至20ml的稠膏。T7八角莲2（含鬼臼毒素81mg/g）：称取八角莲2 0.627g，加0.5%CMC制成14ml（0.045g/ml）；T8八角莲1（相当于临床用量150倍）：称取八角莲1（低剂量）0.473g，加0.5%CMC制成14ml（0.0338g/ml）；T9三七、香附、八角莲1原粉（相当于临床用量150倍）：称取三七、香附、八角莲1原粉（按处方比例）1.756g，加0.5%CMC制成12ml（0.146g/ml）。

2.2 给药途径 小鼠灌胃给予受试物。

2.3 实验方法 取ICR品系小鼠100只，雌性，随机分成十组，即阴性对照组（同体积0.5%CMC）。T1（红金消结胶囊）、T2（鬼臼毒素对照品）、T3[八角莲1（鬼臼毒素含为24mg/g）]、T4（鼠妇虫+黑蚂蚁）、T5[三七、香附、八角莲1（鬼臼毒素含量为24mg/g）原粉]、T6（水煎部分）、T7[八角莲2（鬼臼毒素含量为81mg/g）]、T8[八角莲1（鬼臼毒素含量为24mg/g）]、T9[三七、香附、八角莲1（鬼臼毒素含量为24mg/g）原粉]。实验前禁食不禁水约14小时，受试物组每只小鼠以0.4ml/10gBW体积灌胃，一天内给药1次。阴性对照组给同体积0.5%CMC。给药剂量分别为T1：0.402g/ml（含鬼臼毒素32mg/kg）、T2：3.6mg/ml（含鬼臼毒素145.8mg/kg）、T3：0.045g/ml（含鬼臼毒素43.2mg/kg）、T4：0.061g/ml（不含鬼臼毒素）、T5：0.195g/ml（含鬼臼毒素43.2mg/kg）、T6：2.8g/ml（不含鬼臼毒素）、T7：0.045g/ml（含鬼臼毒素145.8mg/kg）、T8：0.0338g/ml（含鬼臼毒素32.4mg/kg）、T9：0.146g/ml（含鬼臼毒素32.4mg/kg）。T1、T3、T4、T5、T6、T7给药剂量分别相当于临床用量的200倍；T8、T9给药剂量相当于临床用量150倍。给受试物后即刻观察动物反应、动物外观、四肢活动、摄食、饮水、排泄等症状，并每天观察一次，连续观察14天，详细记录每只动物的反应情况。在试验第0天、1天、4天、7天、11天、14天对动物体重进行测定；在试验第1天、4天、7天、11天、14天对动物摄食量进行测定。

饲料加入方法：饲料加入量每次约为150g/笼，第0天给药0.5小时后每笼加入约50g饲料。

饲料加入日期：给药当天和给药后第1、4、7、11天。

测定方法：按饲料加入日期称量约150g饲料，加入在笼具的饲料盒内，在给药后第1、4、7、11、14天，收集饲料盒内的剩余饲料，用天平称重。给予量与剩余量之差即为本笼动物的饲料摄入量。计算动物每10g体重进食量。

24小时摄食量=[（饲料给予量-饲料剩余量）/笼内动物体重的总和]×10g；每日平均摄食量（g/10gBW）=[（饲料给予量-饲料剩余量）/（天数×笼内动物体重的总和）]×10g。

3 结果

本研究采用SPSS23.0进行统计学分析，在数据资料符合正态分布的情况下，采用均数±标准差表示，组间应用独立样本t检验统计分析，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

3.1 症状观察结果 使用八角莲药材与同等鬼臼毒素等剂量对照品相比，使用八角莲药材两天，小鼠全部死亡，而使用鬼臼毒素组则在给药第四天死亡数量最多，14天后仍有2只小鼠存活。八角莲药材低剂量与八角莲低剂量加三七、香附相比，单独使用低剂量八角莲药材14天给药后有8只小鼠存活，而加用三七和香附后小鼠全部存活。处方水提取部分和动物药部分（鼠妇虫、黑蚂蚁），小鼠连续观察14天，外观、四肢活动、体重、摄食、排泄未见异常。使用原处方灌胃的，小鼠连续观察14天，出现竖毛、腹泻症状，1-7天体重增长缓慢。详见表1。

表1 红金消结胶囊小鼠口服给药急性毒性试验观察症状

3.2 摄食量结果 给药0-14天，T4组动物摄食量与阴性对照组无显著差异，其余各组在给药后0-1天，动物摄食量均显著降低，其中T3给药组动物摄食量最低。给药后1-4天，除T2组动物摄食量未变外，其余存活动物摄食量均有所增长。在给药后的4-7天、7-11天、11-14天，存活动物摄食量基本恢复正常，详见表2。

表2 红金消结胶囊小鼠口服给药急性毒性试验摄食量结果

3.3 体重变化结果 试验期间，在第0天、1天、4天、7天、11天、14天对动物体重进行测定，可见除高剂量八角莲药材组外，其余各组体重均有所提高，详见表3。

表3 红金消结胶囊小鼠口服给药急性毒性试验动物体重(,g)

表3 红金消结胶囊小鼠口服给药急性毒性试验动物体重(,g)

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

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4 讨论

红金消结胶囊口服给药，给药剂量达到临床用量200倍时，小鼠出现竖毛、腹泻、体重增长缓慢、摄食量少等症状，但无动物死亡。提示红金消结胶囊总体上是安全的，但也存在一定风险。

经拆方给药研究，对比小鼠出现的毒性症状和死亡情况，可见红金消结胶囊中的主要毒性（或活性）药材是八角莲，八角莲含有的鬼臼毒素是主要毒性成分，但还有其他的毒性成分。因此应对八角莲进行质量控制（测定鬼臼毒素及其类似物的含量）。

同等给药剂量下，八角莲单味药的毒性明显，混合三七和香附或其他红金消结胶囊中的所有药味后，毒性明显减轻，说明组方合用具有明显的减毒作用。合用可能延缓了毒素的吸收，但动物在八角莲给药后达4-5天还有死亡情况，提示也可能还有其他的减毒作用机制，具体原因有待进一步的深入研究。