酶标仪在艾滋病血液检验中的应用价值体会

张剑萍

艾滋病(acquired immune deficiency syndrome, AIDS)也被称为获得性免疫缺陷综合征, 是指因机体在被人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染后而导致的一种全身性疾病［1］。AIDS 的传播途径包括母婴传播、血液传播、性传播, 此类患者的伤口渗出液、阴道分泌物、血液、乳汁、精液等存在较多的HIV, 同时传染性非常强［2］。AIDS 存在非常强的隐匿性, 在发病前并没有任何症状, 存在长达10 年的潜伏期, 同时由于病毒会慢慢的破坏人体免疫系统, 发病后疾病会快速发展, 可累及其他器官系统, 使患者生命受到威胁［3］。发病后患者以肝脾肿大、持续性发热、皮肤感染、呼吸困难、黏膜感染等为常见症状。所以,此病早期检验并及时治疗可有效控制病情发展。截至目前, 医学领域并没有找到一种有效治愈AIDS 的药物和方法, 全球并没有预防HIV 的疫苗, 所以, 医学领域将AIDS 检验作为重点内容, 并利用检验结果积极控制疾病的传染、进展［4］。AIDS 检验的方法有很多, 如病毒培养、病毒抗体检测、血液分析仪等, 检验方法不同,其回收率、速度、精准度等存在一定差异［5］。有研究指出［6］, 酶标仪在AIDS 患者血液检验中价值较高, 其存在检测精准、简便、快速的特点, 同时患者认可度较高。所以, 本研究分析AIDS 患者利用酶标仪在艾滋病血液检验中的价值, 报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取疾病预防控制中心2020 年1 月～2022 年1 月确诊为AIDS 的60 例患者纳入研究, 其中男35 例, 女25 例；年龄21～56 岁, 平均年龄(29.66±8.78)岁。本研究经过伦理委员会审核并批准。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：符合AIDS 诊断标准, 病毒抗体阳性, 同时合并卡氏肺囊虫肺炎或近期持续发热体温≥38℃；患者和家属对本次研究内容知情,同时签署同意书。排除标准：患者依从性差；精神疾病者；伴有严重的心血管疾病者；妊娠期、哺乳期患者。

1.3 方法

1.3.1 血液分析仪检验 将检测试纸装入塑料卡座内, 利用双抗原夹心法检测, 小圆孔(s 区)是加样孔,需要将受检者的血液滴入此孔中后再实施检测, 结果可以在窄长凹形凹陷区查看, 其中, T 为检测线的位置,C 为对照线的位置。采血时所用物品为采血针、酒精、棉球, 均按照无菌要求操作, 在指尖或耳垂处采血, 酒精棉球对采血处消毒, 直接将血液滴在加样孔中, 或者利用无菌吸管吸取血液, 再滴入加样孔中实施检验。10～15 min 后, 观察试纸结果, 试纸上只出现一条红线(对照线C)为阴性结果；试纸上出现两条红线(对照线C 和检测线T)为阳性结果；试纸上未出现红线, 表示测试实验失败, 请另取卡重新检测。

1.3.2 酶标仪检验 ①配液：使用去离子水或蒸馏水按照1∶20 比例稀释浓缩洗涤液；②编号：样品对应微孔板按照顺序编号, 并设阴性对照组3 孔, 空白对照1 孔, 1 型、2 型、抗原阳性对照各1 孔；③加生物素试剂：将20 μl 生物素试剂置入孔中, 空白孔不加入；④加样：将待检测样本加入相应的孔中, 震荡摇匀；⑤温育：使用封板膜进行封板, 温育温度设置36～38℃, 时间29～31 min；⑥洗板：封板膜完全揭掉后, 用洗板机清洗5 遍, 扣干；⑦加酶：将100 μl 酶标试剂置入孔中, 空白孔不加入, 后再进行一次温育、洗板步骤；⑧显色：将50 μl 显色剂A、500 μl 显色剂B 加入孔中,震荡摇匀后, 在温度36～38℃温度中避光显色, 时间为29～31 min；⑨测定：将50 μl 终止液加入, 震荡摇匀后,10 min 内测定结果。酶标仪波长设定为450 nm, 在空白孔调零后对A 值进行测定。

1.4 观察指标 对比两种检验方法精密度, 分析线性范围；对比两种检验方法标本回收率, 分析稳定性。

1.5 统计学方法 采用SPSS18.0 统计学软件对数据进行处理。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检验方法精密度对比 对3 份血清进行批间、批内20 次的重复检测, 酶标仪检验的批内精密度、批间精密度均明显高于血液分析仪, 差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两种检验方法精密度对比(%)

2.2 线性范围 AIDS 血清的线性范围临界值是160 kU, 在AIDS 活性达到上述标准后, 可利用等渗盐水对其进行稀释, 同时将检测工作完成。

2.3 两种检验方法标本回收率对比 酶标仪检验的标本平均回收率是98.2%, 高于血液分析仪的94.4%, 差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两种检验方法标本回收率对比(%)

2.4 稳定性 在一份AIDS 血液标本添加NaOH, 浓度为0.4 mmol/L, 在显色后的不同时间实施比色, 结果指出, 10～90 min 显色比较稳定, 显色10 min 后比色情况良好。

3 讨论

HIV 感染患者从感染开始直到10 年左右, 其可以没有任何临床症状, 只能经过检验血液才可以确诊, 进而了解到患者是否出现HIV 抗体或病毒［7］。机体在被疾病威胁时会产生一种蛋白质, 即为抗体, 患者机体在被HIV 病毒感染后, 就会产生一种对此种病毒对抗的抗体［8］。调查指出［9］, 酶标仪是一种普遍应用在HIV病毒检验中的方法。

酶标仪即酶联免疫检测仪, 利用酶联免疫吸附试验对血液检验的一种仪器, 此种仪器以比色计为核心工作原理, 可通过比色法对抗体或者抗原的含量分析［10］。酶联免疫吸附法指的是一种标记技术, 其基础原理则是同位素免疫技术、荧光抗体技术, 进而实现高敏感性和高特异性检测方法, 快速达到自动化的检验方式［11］。此种检验方法的原理是让抗体结合酶胶联剂, 变为酶标抗体, 此酶标抗体会同固定载体上的抗体出现特异反应, 经过结合后会变成免疫复合物, 但是一直存在不同程度的活性, 将底物加入后, 酶会对其产生催化作用, 进而进行反应, 出现不同的颜色, 抗体的含量随着颜色的加深而增加。此种检验法以高效的酶催化剂、抗原-抗体反应为基础, 所以存在的灵敏性比较特殊, 该种方式属于免疫学试验技术中存在较强生命力的一种［12］。酶标仪检验工作原理：主要结构同光电比色相同, 经滤光片处理光源灯所发出的光波后会变成一束单色光, 随后进入微孔极中, 可对标本进行进一步的检测［13-16］。部分标本会将单色光吸收, 剩余的部分单色光会穿透标本照射到光电检测器上, 后转换待检测标本光信号为对应的电信号, 通过信号处理, 如模数转换等输送到微处理其中, 处理并将结果计算出来, 后实施打印。此外, 利于电路控制微处理器, 机械式驱动, 按照X 轴方向、Y 轴方向移动微孔板, 实施自动进样本检测。

本研究根据酶标仪相应的仪器软件以及严密的比色系统, 简单配置了对应的附件, 同时根据全国临床检验的有关检验项目程序、操作标准, 完成采血、检测、结果打印、超微量化学检验。在本研究中, 为了进行更加针对性的血液检测仪器测定, 试验中的病例为AIDS, 对3 份血清实施了批内和批间的20 次重复检测, 酶标仪检验的批内精密度、批间精密度均明显高于血液分析仪, 差异具有统计学意义(P<0.05)。并且本研究中的其他研究结果也证实酶标仪效果良好。

总之, 通过酶标仪测定AIDS 患者的血液存在快速、简便等优势, 效果理想, 成本低, 时间短, 值得推广。