变形杆菌属中抗菌药物亚胺培南稀释法和纸片法的对比研究

伍萃欣，廖志玲，黄顺娇，吴洁英

广东省英德市人民医院检验科，广东英德 513000

变形杆菌属广泛存在于泥土和污水及人、畜粪便中，为条件致病菌，可引起尿路感染、呼吸道感染、腹膜炎、胃肠炎等[1-2]，也可产生超广谱β 内酰胺酶，产酶株对青霉素、第一代、第二代、第三代头孢素及单酰胺抗生素均产生耐药[3-4]。该菌属具有多重耐药和交叉耐药的特性，给临床的治疗和医院感染的控制带来了严峻的挑战，而亚胺培南是碳青霉烯类抗菌药物，是临床重要抗菌药物[5]，对治疗感染疾病非常重要，掌握亚胺培南的药物敏感性对指导临床用药十分重要[6-7]。如今，由于时代的进步，大型实验仪器的投入使用，使得临床上获知感染源和相应抗菌药物信息的速度迅速加快，同时也需保证仪器性能的准确性。仪器稀释法的药敏试验属于微型的肉汤试验，通过应用光电比浊原理得到最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration, MIC）值，而纸片扩散法，是将浸有抗菌药的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板上，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈，抑菌圈直径的大小与待检菌的MIC 呈负相关，抑菌圈越大，MIC 越小[8]。本研究选取广东省英德市人民医院2021 年5 月—2023 年8 月临床标本分离出的208株变形杆菌属进行两种方法学的药物敏感试验，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集本院各科室门诊及住院患者各临床标本，包括痰液、尿液、分泌物、脓液、血液等送检标本208 份。

1.2 仪器与试剂

VITEK2 全自动细菌鉴定药敏分析仪、分析仪所配套的革兰阴性菌鉴定卡和药敏卡片、血琼脂培养基，含万古霉素的巧克力琼脂培养基、无菌盐水、一次性无菌塑料管、VITEK2 DensiCHEK 比浊仪、标准比浊管、无菌棉拭、水解酪蛋白琼脂培养基（mueller-hinton agar medium plate, M-H）平板、亚胺培南药物纸片、游标卡尺、标准菌株大肠埃希菌（ATCC25922）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）等。

1.3 方法

仪器稀释法:使用新鲜菌，用经过校准的VITEK2 DensiCHEK 制备相当于麦氏浊度0.50～0.63的均质悬液，选取VITEK2 COMPACT（法国生物梅里埃）全自动细菌鉴定药敏分析仪配套的革兰阴性菌鉴定卡和药敏卡进行细菌鉴定和药敏试验，仪器进行6～18 h 的测试后根据其工作原理分析得出MIC 值。

K-B 纸片扩散法（Kirby-Bauer method, K-B）:挑选新鲜菌制备成0.5 麦氏单位浓度的菌悬液，用无菌棉拭蘸取菌液均匀涂布整个MH 平板表面，用无菌镊子取药敏纸片贴于平板中心表面，置35℃孵育18～24 h 后观察结果。

1.4 观察指标

仪器稀释法应用光电比浊原理得到MIC 值，MIC 值≤1:判读敏感，MIC 值≥4:判读耐药MIC 值=2:判读中介。纸片扩散法:用所测抑菌圈的大小报告敏感（S）、中介（I）、耐药（R），抑菌环≥23:敏感，抑菌环20～22:中介，抑菌环≤19:耐药。以上两种方法学的药敏结果判断标准均是依照2023 年版的CLSI 判读标准执行，标准菌株大肠埃希菌（ATCC25922）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）由广东省临检中心提供，药敏质控流程参照《临床微生物检验标准化操作》完成。实验研究所有变形杆菌属菌株数中，使用仪器稀释法与使用手工K-B 进行亚胺培南药敏试验达到的判读结果保持两者一致性作为这两种方法学结果的相符性，以及两者药物敏感试验结果的吻合程度作为其结果的相符率。

1.5 统计方法

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析，计数资料用例数（n）和率（%）表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 208 株变形杆菌属比例

据统计，208 株变形杆菌属中，以普通变形杆菌占比为2.40%（5/208），奇异变形杆菌占比为87.98%（183/208），豪泽变形杆菌占比为9.62%（20/208）见表1。

表1 208 株变形杆菌属比例

2.2 两种方法相符率分析

208 株变形杆菌属亚胺培南仪器稀释法与纸片扩散法药敏结果相符比例，见表2。

表2 两种方法相符比例

3 讨论

分离出的变形杆菌属208 株中，奇异变形杆菌达到183 株，占总菌株数的87.98%，其余包括有普通变形杆菌和豪泽变形杆菌，分别是5 株和20 株，占比分别为2.40%和9.62%。数据可见，3 种变形杆菌的亚胺培南药敏结果均为耐药或中介时两种试验方法的相符率在50%～65%之间，药敏结果均为敏感时相符率可达到90%以上。纸片扩散法是药敏试验中常用的一种试验方法，其方法操作简单，效果明显，可观察度高，是适合国情的药敏试验方法，我国已经统一操作规程[9-11]，仪器稀释法则使用自动化检测，计算机管理，能快速得出试验结果，但是对于诱导型细菌可能产生错误，细菌生长情况亦不可查，存在其局限性[12]，根据《2023 年最新版本CLSIM-100 抗微生物药物敏感试验执行标准》机构治疗指南，感染预防程序或流行病学调查表示可能需要识别产碳青霉烯酶的肠杆菌科，包括变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根摩根菌属等，对于碳青霉烯类药物MIC 升高（中介或耐药）时，对其药敏结果提出不一定报告建议，指南指出亚胺培南对变形杆菌属的MICs 趋向性更高（即MICS 处于中介或耐药范围），这些菌株可能存在非产碳青霉烯酶机制而导致亚胺培南MICs 升高[13-14]。以上试验数据亦显示仪器稀释法检测亚胺培南药物敏感性呈现耐药或中介时，纸片扩散法对此呈现低相符性，造成这种情况的原因可能是这些菌株存在非产青霉烯酶机制或者其他诱导因素[15]，导致仪器对MIC 分析得出过高判读结果，结论现象与指南论述一致，这属于仪器稀释法针对变形杆菌属对亚胺培南抗菌药物药敏检测的局限性，而K-B 可以对其药敏试验进行补充试验验证，从而能够适当地对仪器药敏结果予以纠正，降低假耐药性。

综上所述，推进抗菌药物的合理使用需要多学科的相互协作，保证各科室工作质量，实验室务必准确提供检测结果，从而帮助临床正确使用抗菌药物，提高疗效，遏制耐药蔓延，为患者的安全合理用药保驾护航。