EB 病毒感染儿童外周血Th1/Th2 型细胞标志物表达水平及临床意义

张莎莎，冯翔，高健

河南省儿童医院（郑州儿童医院）检验科，河南郑州 450000

爱普斯坦-巴尔病毒（epstein-barr virus, EBV）感染是一种常见的病毒感染，特别是在儿童和青少年中[1]。虽然大多数感染者无明显症状且通常在数周或数月内自行康复，但少数患儿会出现严重的干扰素综合症、传染性单核细胞增多症和淋巴增殖性疾病等。这些严重的并发症会对患儿造成严重负面影响，可能会导致机体免疫系统的失控和免疫反应异常，例如淋巴增殖性疾病与传染性单核细胞增多症导致的肝脾肿大[2-3]。辅助性T 细胞（helper T cell, Th）1 与Th2 型细胞是机体免疫系统中至关重要的两个亚群，分别以产生干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）和白细胞介素-4（interleukin-4, IL-4）为代表。在EB 病毒感染过程中，机体内Th1/Th2 型细胞的平衡可能发生改变，从而导致免疫反应的不同类型和强度[4]。基于此，本研究选取2022 年1 月—2023 年1 月河南省儿童医院（郑州儿童医院）收治的EBV 感染患儿64 例作为研究对象，通过检测不同病毒载量的EBV 感染患儿的Th1/Th2 型细胞标志物表达水平变化，分析EBV 感染与Th1/Th2 平衡的关系，为深入探究EBV 感染的免疫学机制、评估感染严重程度提供参考依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院收治的EBV 感染患儿64 例，并纳入EBV 组，另外纳入64 例健康儿童作为健康组。EBV组年龄1～7 岁，平均（4.63±1.30）岁；男38 例，女26例。健康组年龄1～6 岁，平均（4.58±1.07）岁；男36例，女28 例。统计EBV 组患儿EBV-DNA 载量，根据中位水平（8.23×103拷贝）将EBV 组分为高EBV组（n=31）和低EBV 组（n=33），其中高EBV 组年龄（4.45±1.50）岁；男18 例，女13 例。低EBV 组年龄（4.77±1.05）岁；男20 例，女13 例。EBV 组与健康组、高EBV 组与低EBV 组间的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已通过本院医学伦理委员会批准（20210123 号）。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①符合临床中对于EBV 感染的诊断标准[5]患儿；②入组前未接受相关免疫调节治疗患儿；③患儿家属均签署知情同意书。排除标准：①合并恶性肿瘤者；②EBV-DNA＜1×103拷贝/mL 者；③合并心脏、肝脏、肾脏等器官严重功能不全者。

1.3 方法

①EBV-DNA 定量检测：患儿入院时，采集静脉血3 mL，3 000 r/min 离心10 min，取50 μL 血浆，加入50 μL 核酸提取液，振荡混匀15 s，干浴10 min后，以12.5 cm 的离心半径1 500 r/min 离心10 min，取上清液，并置于枸橼酸钠抗凝管中，采用荧光实时定量聚合酶链式反应技术检测EBV-DNA 载量；BamH1-W 正向引物：5-GCCAGAGGTAAGTGGACTTT-3，反向引物：5-TACCACCTCCTCTTCTTGCT-3，长度389 bp；荧光探针序列：5-CACACCCAGGCACACACTACACAT-3，严格根据试剂盒说明书进行操作，以≥1×103拷贝为阳性。②Th1 与Th2 型细胞检测：采用酶联免疫吸附法对上清液中的IFN-γ、白细胞介素-2（interleukin-2, IL-2）、IL-4、白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6）进行检测，严格根据试剂盒说明书进行操作。③Th1/Th2：通过流式细胞术测量Th1 细胞和Th2 细胞的数量，并计算Th1/Th2比值。

1.4 观察指标

比较两组的Th1/Th2 型细胞标志物（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6）表达水平和Th1/Th2 比值差异；分析EBV-DNA 病毒载量与Th1/Th2 型细胞标志物水平的相关性。

1.5 统计方法

应用SPSS 23.0 统计学软件分析数据，计量资料进行正态性检验，确认服从正态分布，表示为（±s），根据方差齐性检验的结果，应用t检验或Welcht检验；采用Spearson 相关性分析法分析EBV-DNA 病毒载量与Th1/Th2 型细胞标志物水平的相关性。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EBV 组和健康组Th1/Th2 型细胞标志物、Th1/Th2 比值比较

EBV 组的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、Th1/Th2 均高于健康组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 EBV 组和健康组Th1/Th2 型细胞标志物、Th1/Th2 比值比较(±s)

表1 EBV 组和健康组Th1/Th2 型细胞标志物、Th1/Th2 比值比较(±s)

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2.2 高EBV 组和低EBV 组Th1/Th2 型细胞标志物、Th1/Th2 比值比较

高EBV 组的IFN-γ、IL-2、Th1/Th2 均低于低EBV 组，IL-4、IL-6 水平均高于低EBV 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 高EBV 组和低EBV 组Th1/Th2 型细胞标志物、Th1/Th2 比值比较(±s)

表2 高EBV 组和低EBV 组Th1/Th2 型细胞标志物、Th1/Th2 比值比较(±s)

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2.3 EBV-DNA 病毒载量与Th1/Th2 型细胞标志物的相关性分析

Spearson 分析结果显示，EBV-DNA 病毒载量与IFN-γ、IL-2、Th1/Th2 呈负相关性（P＜0.05），与IL-4、IL-6 呈正相关性（P＜0.05）。见表3。

表3 EBV-DNA 病毒载量与Th1/Th2 型细胞标志物的相关性分析

3 讨论

EBV 感染可引发多种疾病，累及全身多个器官，是一种常见的人类疱疹病毒，并与免疫系统相关性疾病密切相关。大部分儿童在早期生命阶段感染EBV，在1～2 岁时出现EBV 抗体血清转换，此时大部分感染案例并不复杂，甚至容易被忽视。对于绝大多数感染者而言，潜伏感染似乎不会影响总体健康；然而，潜伏期的失调或无法控制的裂解性感染可能导致淋巴组织增殖性疾病和免疫系统相关性疾病的进展[6]。

本研究结果显示，EBV 组的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、Th1/Th2 均高于健康组（P＜0.05）。这表示EBV感染患儿的Th1/Th2 型细胞标志物水平显著升高。既往Yang D 等[7]的研究中，其传染性单核细胞增多症患儿的IFN-γ、IL-6 等水平均高于对照组（P＜0.05），本研究与既往研究结果一致。这可能是因为EBV 进入B 淋巴细胞后不断复制，激活T 淋巴细胞，导致T 淋巴细胞大量活化扩增。有研究显示，EB 病毒感染的主要细胞类型是上皮细胞和B 细胞[8]。这可能是因为在EBV 病毒的结构中，除宿主细胞衍生的膜蛋白外，还包埋若干病毒蛋白，病毒包膜蛋白是糖蛋白（glycoprotein, GP），EBV 病毒的趋向性由包膜GP 决定，而GP 又因宿主细胞的不同而存在差异[9]。EBV 感染的主要细胞类型是上皮细胞和B 细胞。因为EBV 的传播方式是通过唾液传播给受体，上皮细胞是第一个被感染的细胞类型。当EBV 从口咽上皮释放后进入下层组织时，B 细胞被感染[10]。由于包膜GP 的组成，上皮细胞释放的EBV 病毒粒子优先于B 细胞，而B 细胞释放的EBV病毒粒子优先于上皮细胞[11]。

本研究结果显示，高EBV 组的IFN-γ、IL-2、Th1/Th2 均低于低EBV 组，IL-4、IL-6 水平均高于低EBV 组（P＜0.05）；Spearson 分析结果显示，EBVDNA 病毒载量与IFN-γ、IL-2、Th1/Th2 呈负相关性，与IL-4、IL-6 呈正相关性（P＜0.05）。这提示伴随EBV 病毒载量的升高，Th1/Th2 失衡加重。沈燕等[12]研究中显示，EBV-DNA 病毒载量与IFN-γ 呈负相关性（r=-0.519，P＜0.001），与IL-4 呈正相关性（r=0.607，P＜0.001），本研究与既往研究结果相似。EB 病毒感染后，机体免疫系统会被激活以应对病毒。这涉及T 细胞的免疫应答，其中包括Th1 和Th2 细胞的调节。Th1 细胞主要产生IFN-γ、IL-2 等细胞因子对抗病毒感染。Th1细胞的免疫应答有助于清除被EB 病毒感染的细胞，并抑制病毒的复制[13]。Th2 细胞主要产生IL-4、IL-6 和IL-13 等细胞因子，参与调节体液免疫应答。在EB 病毒感染中，Th2 细胞可能对炎症反应起到一定的调节作用[14]。而根据研究显示，EBV病毒载量的高低与Th1 和Th2 细胞的调节密切相关[15]。高EBV-DNA 病毒载量的患儿往往伴随着免疫系统的强烈反应。在高EBV-DNA 病毒载量情况下，机体的免疫系统往往会出现Th1/Th2 失衡，即Th2 细胞活化和分泌增加，而Th1 细胞活化和分泌减少。这可能是由于EBV 感染抑制了Th1细胞的功能，同时促进了Th2 细胞的发育和功能[16]。而不平衡的Th1/Th2 比例可能会影响EBV感染结果[17]。例如，如果Th1 免疫应答过弱而相对Th2 免疫应答过强，则可能导致病毒的持续感染和病情的恶化。同时，低EBV-DNA 病毒载量的患儿则表现出较低程度的病毒复制活动和免疫系统反应。

综上所述，EBV 感染患儿Th1/Th2 型细胞标志物水平呈现出明显变化，并且随着EBV 病毒载量的升高，IFN-γ、IL-2 水平升高，而IL-4、IL-6 水平降低，Th1/Th2 失衡加重。这能够为深入探究EBV 感染的免疫学机制、评估感染严重程度从而制定适宜的临床策略提供参考。