灌洗液细胞蜡块在感染性疾病诊断中的应用

张润兰 王何生

【摘要】 目的 探讨灌洗液细胞蜡块在感染性疾病患者中的诊断价值。方法 选取2020年11月—2022年1月疑似肺结核患者97例为研究对象，采集入组病例灌洗液，分别采用灌洗液细胞蜡块技术和灌洗液细胞涂片进行抗酸染色，并在显微镜下找到抗酸杆菌为阳性。以罗氏固体培养结果作为“金标准”，比较灌洗液细胞蜡块技术、细胞涂片及二者联合在疑似肺结核患者抗酸杆菌中的检出率；计算并绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic，ROC），分析不同检查方法在感染性疾病中的诊断效能。结果 97例疑似肺结核患者经临床检查确诊72例，确診率为74.23%。灌洗液细胞蜡块技术检查确诊65例，检查准确度为82.47%（80/97）；灌洗液细胞涂片检查最终确诊60例，检查准确度为79.38%（77/97）；灌洗液细胞涂片和灌洗液细胞蜡块技术联合检查确诊肺结核70例，检查准确度为91.75%（89/97）；灌洗液细胞涂片和灌洗液细胞蜡块进技术联合检查在疑似肺结核患者中准确度、灵敏度、特异度、阳性及阴性预测值高于灌洗液细胞涂片和灌洗液细胞蜡块技术联合检查（P<0.05）。结论 灌洗液细胞蜡块技术和灌洗液细胞涂片用于疑似肺结核患者中均具有较高的检出率，且二者联合检查能提高诊断灵敏度与特异度，为临床诊疗提供参考依据。

【关键词】 灌洗液细胞蜡块技术；灌洗液细胞涂片；肺结核；诊断价值；感染性疾病

中图分类号：R363        文献标识码：A

文章编号：1672-1721（2023）34-0116-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.34.038

肺结核是一种由结核分枝杆菌感染引起的呼吸系统传染病，病灶主要发生在肺组织、气管、胸膜部位[1]。常鑫等[2]研究表明，结核分枝杆菌感染肺部能引起肺结核，但感染肺结核患者不一定具备传染性。同时，多数患者在结核分枝杆菌潜伏期无典型的临床表现，对于活动性肺结核临床多表现为咳嗽、咳痰、咯血和乏力等，导致临床诊疗难度较大。目前，临床对于肺结核的诊断主要依靠患者的症状、胸部影像学检查、灌洗液细胞涂片、罗氏固体培养等，但是由于患者症状及影像学检查缺乏特异性，罗氏固体培养耗时较长等，上述方法难以满足肺结核的早期、快速诊断要求[3]。灌洗液细胞蜡块是一种新型的辅助诊断方法，相比于传统图片制片技术更加有效；细胞蜡块技术在难以取得组织标本且原发灶不明患者中，借助细胞蜡块进行免疫组化染色并完成相应抗体的标记，有助于提高细胞学诊断准确性，但是该技术在感染性疾病中的诊断效能研究较少[4]。因此，本研究以疑似肺结核患者为对象，探讨灌洗液细胞蜡块在感染性疾病患者中的诊断价值，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2020年11月—2022年1月疑似肺结核患者97例为研究对象，其中男性56例，女性41例，年龄19～76岁，平均年龄（59.47±6.32）岁；体质量指数（body mass index，BMI）18～29 kg/m2，平均（22.57±3.41）kg/m2；临床表现，咳嗽35例，咳痰24例，咯血8例，乏力47例；合并症，高血压7例，糖尿病4例，高脂血症8例。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

纳入标准：参考WS 288—2017《肺结核诊断标准》[5]中有关肺结核相关标准；罗氏固体培养结果完整，能配合完成灌洗液细胞蜡块技术和灌洗液细胞涂片标本采集，患者均可耐受；病情稳定，能进行沟通和交流。

排除标准：血液系统疾病、既往结核病史或中途放弃诊断者；慢性咳嗽或严重肝肾功能异常者；器质性疾病、血液系统疾病或诊断前使用抗结核方案治疗者。

1.2 方法 罗氏固体培养检查。（1）检测方法。将送检的支气管灌洗液用相当于1～2倍样本体积的4%NaOH进行处理，罗氏固体培养基和对硝基苯甲酸（p-nitrobenzoic acid，PNB）培养基购自于珠海市银科医学工程有限公司，操作要严格遵循仪器与试剂盒说明书。（2）结果判定。连续培养8周无菌生长即报告培养阴性；培养8周后分离到菌株，根据参考检验规程完成PNB试验。如果菌株在PNB培养基上生长，则鉴定为非结核分枝杆菌（nontuberculosis mycobacteria，NTM），反之为结核分枝杆菌。

灌洗液细胞涂片检查。（1）细胞涂片抗酸染色。采集入组病例灌洗液进行灌洗液细胞涂片检查，抗酸染色试剂盒购自于珠海贝索生物技术有限公司，操作要严格遵循仪器与试剂盒说明书。（2）结果判定。连续观察300个不同视野，均未发现抗酸杆菌视为阴性；连续观察300个不同的视野，至少发现1条抗酸杆菌则为阳性。

灌洗液细胞蜡块检查。采用灌洗液细胞蜡块技术完成灌洗液检查，即将采集的灌洗液标本放置在常温环境中，静置30 min，除去上层清液，并将下层液体倒入2支离心管中，如液体为血性液体时，可向液体中加入醋酸乙醇，充分混合均匀；将最终获得的液体置入离心机中，连续完成10 min离心，操作完毕后，取出离心管并吸取上层清液。向离心管中加入质量分数为4%的甲醛溶液，充分混合均匀后，将其置于离心机中，连续进行10 min离心。离心完毕后，吸出上层清液，并滤出管中的沉淀物，经脱水处理后，常规进行石蜡包埋、染色及检验，检测完毕后根据免疫组化学技术完成类别诊断，并在显微镜下找到抗酸杆菌为阳性。

以罗氏固体培养结果作为“金标准”，比较灌洗液细胞蜡块技术、细胞涂片及二者联合在疑似肺结核患者抗酸杆菌中的检出率（检测准确度）；计算并绘制ROC曲线，分析不同检查方法在感染性疾病中的诊断效能（灵敏度、特异度、阳性及阴性预测值）。

1.3 统计分析 采用SPSS 24.0统计学软件处理数据，计数资料采用百分比表示，行χ2检验，计量资料采用x±s表示，行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 灌洗液细胞蜡块技术在疑似肺结核患者中的价值 经临床检查，97例疑似肺结核患者中确诊72例，确诊率为74.23%。灌洗液细胞蜡块技术检查确诊65例，检查准确度为82.47%（80/97），灵敏度为83.33%（60/72），特异度为80.00%（20/25），阳性预测值为92.31%（60/65），阴性预测值为62.50%（20/32），见表1。

2.2 灌洗液细胞涂片检查在疑似肺结核患者中的价值 灌洗液细胞涂片检查最终确诊肺结核60例，检查准确度为79.38%（77/97），灵敏度为77.78%（56/72），特异度为84.00%（21/25），阳性预测值为93.33%（56/60），阴性预测值为56.76%（21/37），见表2。

2.3 灌洗液细胞涂片和灌洗液细胞蜡块技术联合在疑似肺結核患者价值 灌洗液细胞涂片和灌洗液细胞蜡块技术联合检查确诊肺结核70例，检查准确度为91.75%（89/97），灵敏度为93.06%（67/72），特异度为88.00%（22/25）、阳性预测值为95.71%（67/70），阴性预测值为81.48%（22/27），见表3。

2.4 不同检查方法及二者联合在疑似肺结核患者中的效能比较 灌洗液细胞蜡块技术联合灌洗液细胞涂片检查用于疑似肺结核患者中，检查准确度、灵敏度、特异度、阳性及阴性预测值高于灌洗液细胞涂片和灌洗液细胞蜡块技术检查（P<0.05）。灌洗液细胞蜡块技术检查ROC曲线下与坐标轴围成的面积（area under curve，AUC）为0.783，灌洗液细胞涂片检查AUC值为0.791，灌洗液细胞蜡块技术联合灌洗液细胞涂片检查AUC值为0.902，不同检查方法AUC值比较差异具有统计意义（Z=6.492，P<0.05），见表4和图1。

3 讨论

肺结核是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，能侵及诸多脏器，并以肺部结核最为常见[6]。ZHONG H等[7]研究表明，肺结核具有较强的传染性，且排菌者为重要的传染源，但人体感染结核菌后不一定发病，当抵抗力降低或细胞介导的变态反应增高时才会发病。罗氏固体培养是疑似肺结核患者常用的诊断方法，并将其视为“金标准”，能帮助患者早期确诊[8]。本研究中，97例疑似肺结核患者经临床检查确诊72例，确诊率为74.23%。从本研究结果可以看出，罗氏固体培养能提高肺结核患者检查确诊率，能指导临床诊疗，但是该检查方法所需时间较长，对仪器设备要求较高。灌洗液细胞蜡块技术用于肺结核诊断中，由于操作简单在实验室中广泛开展。本研究中，灌洗液细胞涂片检查最终确诊肺结核60例，检查准确度为79.38%（77/97），说明灌洗液细胞涂片用于肺结核诊断中具有一定价值，但是该检查方法用于肺结核诊断中灵敏度和特异度不足，容易误诊或漏诊。

灌洗液细胞蜡块技术是一种新型的辅助诊断技术，采用离心固定切片的方式来聚集病原菌，病原菌的结构更加清晰，使得组织的结构与排列方式保持一致，避免细胞人为重叠，从而提高诊断准确性[9-10]。血性灌洗液细胞蜡块技术能通过溶解红细胞的方式清除对红细胞造成的制片干扰，获得的制片背景更加整洁、干净，进而保证病原菌的完整性和核的特异性，有助于提升检测的阳性检出率。本研究中，灌洗液细胞涂片和灌洗液细胞蜡块技术联合检查确诊肺结核70例，检查准确度为91.75%（89/97），由此可以看出灌洗液细胞蜡块技术和灌洗液细胞涂片能提高肺结核检查准确度。欧维正等[11]研究表明，运用细胞蜡块制片技术对肺结核患者进行诊断时，有助于提高诊断准确性，且该方法是目前最为有效的检测方法之一。细胞蜡块制片重复性好，能提供更多相似于组织学和细胞的形态特点，且与灌洗液细胞涂片相比更加有效、准确。同时，对于细胞蜡块制片技术难以取得组织标本和原发灶不明的患者，能进行免疫组织化学染色，对相应的抗体进行标记，有助于提升细胞学诊断准确性。临床上将灌洗液细胞蜡块技术和灌洗液细胞涂片用于疑似肺结核患者中，能发挥不同检查方法优势，弥补单一检查存在的不足，提高临床检查阳性率[12]。本研究中，灌洗液细胞蜡块技术和灌洗液细胞涂片联合检查在疑似肺结核患者中检查准确度、灵敏度、特异度、阳性及阴性预测值高于灌洗液细胞涂片和灌洗液细胞蜡块联合检查（P<0.05），且联合检查的AUC值大于各单独检查。从本研究结果中可以看出，灌洗液细胞蜡块技术和灌洗液细胞涂片二者联合检查用于肺结核患者中，能发挥不同检查方法的优势，有助于提高诊断效能。

综上所述，灌洗液细胞蜡块技术和灌洗液细胞涂片用于疑似肺结核患者中均具有较高的检出率，且二者联合检查能提高诊断灵敏度与特异度，为临床诊疗提供参考依据。

参考文献

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（收稿日期：2023-10-09）