小反刍兽疫活疫苗免疫简阳大耳羊抗体水平检测与分析

曾海燕 福建省宁化县动物疫病预防控制中心 福建宁化 365400

小反刍兽疫（PPR）又称羊瘟，是由小反刍兽疫病毒（PPRV）引起的一种急性高度接触性传染病，主要感染山羊、绵羊等小反刍动物，易感羊群发病率和病死率可高达100%，对养羊业造成严重影响，被我国列为一类动物疫病。 由于该病暂时没有特效的治疗方法，当前防控PPR 最有效的措施主要通过疫苗免疫，PPR 在福建省实行强制免疫，宁化县近年来政府采购实行强制免疫的疫苗是小反刍兽疫活疫苗（Clone 9 株）， 该疫苗说明书上注明PPR 活疫苗的免疫持续期为36 个月。简阳大耳羊是努比亚山羊杂交选育品种，该品种在宁化县养殖数量、比例较大，南方牧业和群益现代等规模较大的羊养殖企业所养殖品种均为简阳大耳羊。 2017 年，宁化县群益现代农业有限公司从四川简阳市引进的简阳大耳羊检测出PPR 抗体阳性羊，经调查了解调入羊在种羊场免疫过PPR 疫苗，群益现代从PPR 非免疫备案场转为免疫场。为了解小反刍兽疫活疫苗（Clone 9 株）免疫该品种羊的抗体水平， 结合宁化县春秋防和免疫抗体监测工作， 于2019-2022 年对该公司羊场开展PPR 活疫苗免疫简阳大耳羊抗体水平的检测， 为有效防控简阳大耳羊PPR 合理制定其疫苗免疫程序提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验地点 宁化县群益现代农业有限公司种羊场。

1.2 试验材料

1.2.1 试验动物 试验选取检测无母源抗体， 临床检查为体质健康、未免疫过疫苗、4 月龄左右的简阳大耳羊后备母羊50 只。

1.2.2 疫苗 小反刍兽疫活疫苗属于政府采购苗，天康生物股份有限公司生产， 规格50 头份/瓶，批号2019009-2，有效期至2021-01-25。

1.2.3 检测试剂 小反刍兽疫竞争ELISA 抗体检测试剂盒，兰州兽研生物科技有限公司生产。

1.3 试验方法

1.3.1 试验设计试验时间：2019 年9 月至2022 年10 月。 选择宁化县群益现代农业有限公司种羊场后备母羊群，全群采血检测其母源抗体，从中选择母源抗体检测阴性且临床健康的4 月龄左右后备母羊50 只。 将选取的后备母羊分为两组，试验组羊40 只，佩带区别于其他羊的黄色耳标；对照组羊10 只，佩带红色标识，两组羊分栏饲养。 指定动物防疫员对试验组羊接种小反刍兽疫活疫苗（Clone 9 株），对照组不接种该疫苗，且饲养方式不改变。 在试验组羊接种疫苗后第30、180、360、540、720、900、1 080 d 同时对两组羊颈静脉采集血液样本， 静置、离心分离血清，送往实验室进行血清学抗体检测。分析试验羊在疫苗免疫后不同时期的免疫抗体水平。

1.3.2 免疫方法 用灭菌生理盐水稀释小反刍兽疫活疫苗，每毫升含活疫苗1 头份，每只免疫羊颈部皮下注射1.0 mL。

1.3.3 血样采集和检测方法

1.3.3.1 血样采集与处理 对试验组羊接种疫苗后第30、180、360、540、720、900、1 080 d 按时进行颈静脉采血， 采集血液数量分别是38、30、35、30、33、32、32 份； 对照组羊在对应时间同时采集血样数量为10、9、8、7、8、7、8 份， 采集的血样必须无溶血、无污染，静置1 h 以上，4 000 r/min 离心3 min，分离血清，每管血清不少于1 mL，并放置-20 ℃以下冰箱中保存待检。

1.3.3.2 检测方法 依据 《小反刍兽疫诊断技术》GB/T 27982-2011，对所采集的血清样本严格按照小反刍兽疫竞争ELISA 抗体检测试剂盒说明书操作并进行结果判定。

2 结 果

试验组羊在免疫后30 d 检测抗体阳性率达100%； 免疫后180 d 抗体阳性率96.7%； 免疫后360 d 抗体阳性率91.4%；免疫后540 d 抗体阳性率80.0%； 免疫后720 d 抗体阳性率69.7%； 免疫后900 d 抗体阳性率65.6%；免疫后1 080 d 抗体阳性率为59.3%（见表1、图1）。对照组未检出阳性样品。

图1 羊小反刍兽疫免疫抗体阳性率

在排除各种人为因素（如不规范的免疫操作、检测失误）的情况下，简阳大耳羊按规定免疫程序接种小反刍兽疫活疫苗（Clone 9 株）后，羊群540 d 内免疫抗体合格率达到80%， 无需再接种该疫苗；而720 d 后免疫抗体合格率低于70%， 应适时加强免疫。

3 分析与讨论

3.1 不同品种的羊PPR 免疫抗体水平存在差异不同品种的羊其遗传基因、体质、生理机能等不同，机体免疫应答也会不同。 叶淑超等[1]对黄羊和湖羊等不同品种羊进行PPR 免疫抗体监测，结果表明不同品种的羊免疫PPR 疫苗后都能产生较好的免疫效果，但免疫抗体水平存在差异。考虑免疫效果的品种差异， 针对宁化县主要饲养品种简阳大耳羊开展本次试验。

3.2 母源抗体会干扰羔羊初免时免疫反应 赫飞等[2]研究表明，羔羊首免受小反刍兽疫母源抗体的干扰，大部分母源抗体持续期1～3 个月，个别湖羊场4 月龄母源抗体还呈现较高的水平。 本试验对照组检测结果全部阴性， 说明该场没有受到外来病毒的干扰。试验表明，简阳大耳羊在排除母源抗体影响和野毒抗体干扰的情况下，规范操作接种PPR 疫苗后，540 d 内免疫抗体合格率达到80%以上，免疫后720～1 080 d，免疫抗体合格率逐渐下降，虽然部分羊免疫抗体持续阳性期达36 个月（1 080 d），但群体免疫抗体阳性率已低于70%，免疫抗体合格率低于国家标准。为了保持羊群较高的免疫抗体水平，疫苗免疫720 d 前后应适时加强免疫。

3.3 不同企业生产的PPR 疫苗免疫抗体水平也存在差异 刘敏等[3]在小反刍兽疫专项监测评估中对新疆天康畜牧生物技术股份有限公司、 西藏自治区兽医生物药品制品厂、 扬州威克生物工程有限公司3 家企业生产的小反刍兽疫活疫苗（Clone9 株）进行了对比试验，结果3 家疫苗的免疫合格率均在73%以上，疫苗免疫原性较好，其中西藏自治区兽医生物药品制品厂的样品免疫个体合格率最高。 本试验所用疫苗是天康畜牧股份有限公司产品， 刘敏等对比试验说明天康畜牧生产的PPR 疫苗免疫后的抗体阳性率比西藏兽医疫苗更低。

3.4 不同场点类型的羊PPR 免疫抗体水平也存在差异 孙瑛瑛[4]研究表明，种畜场小反刍兽疫免疫效果较其他场点好，可能是种畜场环境条件、饲养管理水平较好的原因。 鉴于种畜场饲养管理的优越性及种羊饲养年限较长，本试验选择群益现代种羊场，通过对简阳大耳羊持续性地进行PPR 免疫抗体监测，掌握不同时间点的免疫抗体水平， 为宁化县简阳大耳羊养殖户制定合理的小反刍兽疫免疫程序提供参考依据。