鸡法氏囊素注射液对猪T 淋巴细胞E 玫瑰花环结合率影响的试验

刘小龙 派生特（福州）生物科技有限公司 福州 350500

鸡法氏囊素（Bursin，BS）作为鸡法氏囊中具有免疫活性物质的重要成分， 其不仅对禽类具有重要的免疫调节作用， 且对哺乳动物也具有明显的免疫学及生理学活性[1-2]。

脱E 受体法是通过检测T 淋巴细胞活性从而反映机体细胞免疫水平的一种常用试验方法。 其原理是T 淋巴细胞的表面具有能与绵羊红细胞（Sheep red blood cell，SRBC）表面糖肽结合的E 受体；当两者混合后，E 受体与SRBC 结合粘附于T 细胞的表面，呈现出花环状。 若将T 淋巴细胞在45 ℃温浴中可脱去表面E 受体，大大降低了花环结合率。 鸡法氏囊素是鸡法氏囊组织中具有生物学活性的小分子物质，能促使脱E 受体的T 淋巴细胞重新合成E 受体，提高T 淋巴细胞E 玫瑰花环结合率。

本试验通过脱E 受体法检测鸡法氏囊素注射液对猪T 淋巴细胞活性的影响，以期了解本公司制备的鸡法氏囊素注射液的药理学活性。

1 材料和仪器

1.1 试验动物 健康成年公绵羊，由福建百桥湖羊养殖基地提供；健康育肥猪，由福建省福州市连江县敖江镇生猪屠宰场提供。

1.2 试剂 猪淋巴细胞分离液（购自天津灏洋生物制品科技有限责任公司）；戊二醛、甲醇（购自西陇化工股份有限公司）；氯化钾、姬姆萨染料、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、枸橼酸、碳酸氢钠、枸橼酸钠、葡萄糖（均购自国药集团化学试剂有限公司）。

1.3 仪器 TDZ5-WS 离心机 （购自湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）； 光学显微镜ECLIPSE E100（购自Nikon 公司）；HH-S2 水浴锅 （购自上海上登实验设备有限公司）。

1.4 制品 参考专利文献[3-4]制备鸡法氏囊素注射液，批号分别为：BS001 批、BS002 批及BS003 批，由派生特（福州）生物科技有限公司提供。

2 方 法

将BS001 批、BS002 批及BS003 批鸡法氏囊素注射液按国家食品药品监督管理总局发布的《转移因子溶液国家药品标准》 中的效力检验方法-脱E受体法进行检验[3-4]，其操作具体如下。

2.1 试验设计 试验分成5 组，分别为：试验组1、试验组2、试验组3、对照组及空白组。 其中，试验组1、2 和3 分别加入BPP20140606 批、BPP20140607批及BPP20140608 批鸡法氏囊素注射液待检样品0.1 mL， 再分别加入脱E 受体的T 细胞悬液0.2 mL； 对照组加入Hank′s 液0.1 mL 和脱E 受体的T 细胞悬液0.2 mL； 空白组加入Hank′s 液0.1 mL 和胸腺T 细胞悬液0.2 mL。 每组各做3 个重复管。37 ℃温浴1.0 h 后，各组加入绵羊红血球悬液0.2 mL，摇匀，以500 r/min 离心3 min，放入4 ℃冰箱，次日取出吸弃上清液，各加入固定液一滴于每管中，摇匀，静置10 min，再加2 滴染色液，摇匀后室温放置15 min 开始计数。

2.2 计数 分别统计计数板上64 个大方格的淋巴细胞总和(应不少于200 个)与玫瑰花环结的细胞数(不少于3 个绵羊红细胞结合的淋巴细胞)， 求出每组3 个平行管E 玫瑰花结合率平均值。

2.3 数据处理 所得数据用单因素方差分析和最小显著性差异法（LSD）分析，P＜0.05 为差异显著。

3 结 果

3.1 温浴脱E 受体对花环结合率的影响 结果显示（见表1），空白组E 玫瑰花环结合率为59.4%，显著高于对照组的31.0%（P＜0.05）， 比对照组提高了28.4%，说明45 ℃温浴对猪T 细胞膜E 受体有脱落作用。

表1 温浴脱E 受体对花环结合率影响的结果/%

3.2 鸡法氏囊素注射液对E 玫瑰花环结合率的影响 结果显示（见表2），各试验组E 玫瑰花环结合率分别为43.3% 、42.6%和43.5%，均显著高于对照组的31.0%（P＜0.05）， 分别提高了12.2%、11.6%和12.5%， 说明鸡法氏囊素注射液可使脱E 受体后的猪T 淋巴细胞恢复其E 受体功能。

表2 鸡法氏囊素注射液对E 玫瑰花环结合率的影响 /%

4 讨 论

本次试验各试验组猪T 淋巴细胞E 玫瑰花环结合率均显著高于对照组（P＜0.05），分别比对照组提高了12.2%、11.6%和12.5%。 说明本公司制备的鸡法氏囊素注射液可使脱E 受体后的猪T 淋巴细胞恢复其E 受体功能，提高猪T 淋巴细胞E 玫瑰花环结合率，具有增强猪细胞免疫调节的功能。

鸡法氏囊素（BS）作为一种新型的免疫增强剂，其生物学活性在多项试验中得到证明，BS 具有提高机体免疫功能、增强疫苗免疫的效果，对病毒感染也有一定的预防作用，能使杂交瘤细胞凋亡[5-9]。 鸡法氏囊素具有非常广阔的市场前景， 关于鸡法氏囊素的研究还在继续， 希望在不久的将来研发出该类新药。