胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4+CD25+Treg细胞比例的相关性及临床意义

李晓霞,高斌成△,郭 卉,孙 乐

1.西安长安医院肿瘤内科,陕西西安710016;2.西安交通大学第一附属医院肿瘤内科,陕西西安 710061

胃癌是临床常见的消化系统恶性肿瘤,其早期病情隐匿,确诊率低,大多数患者入院就诊时已发展至中晚期,患者术后5年远期生存率较低,尤其是进展期胃癌[1]。目前,胃癌的发生、发展机制尚不完全明确,但有研究发现,胃癌的发生、发展多伴随较高的转移率和预后不良发生率[2]。因此探讨胃癌发生、发展的分子机制,探寻与胃癌发展相关的生物学指标对其临床诊治及预测患者预后至关重要。糖类抗原72-4(CA72 -4)、癌胚抗原(CEA)及糖类抗原19-9(CA19-9) 是临床常用的肿瘤标志物,是包括胃癌在内的多种肿瘤诊断及术后复发监测和预后评估的重要指标[3]。CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞是发挥免疫抑制和免疫耐受功能的T淋巴细胞,有研究发现,CD4+CD25+Treg细胞在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用,与肿瘤的免疫功能密切相关,其水平升高能够抑制机体对肿瘤免疫应答,导致肿瘤免疫耐受,因此受到肿瘤研究学者的重视[4-5]。本研究分析了胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9与CD4+CD25+Treg细胞的相关性及临床意义,探讨了其与胃癌发生的关系,以期为胃癌的诊治提供借鉴。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2020年1月至2022年12月在西安长安医院(以下简称本院)就诊的胃癌患者68例作为胃癌组,另选取同期在本院体检的健康志愿者50例作为对照组。胃癌组男45例,女23例;平均年龄(55.4±7.8)岁;肿瘤最大径≥5 cm 39例,<5 cm 29例;TNM分期Ⅰ～Ⅱ期37例,Ⅲ～Ⅳ期31例;高～中分化41例,低分化27例;淋巴结转移30例。对照组男27例,女23例;平均年龄(56.3±10.5)岁。纳入标准:经胃镜检查及术后病理诊断证实为胃癌;检测前未接受放、化疗治疗或免疫治疗;临床资料完整。排除标准:合并其他恶性肿瘤;既往有胃癌手术史;合并重要脏器功能障碍、凝血功能异常、血液或免疫系统疾病;合并认知功能障碍。两组性别、年龄比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究所有患者均知情同意,且本研究获得本院医学伦理委员会批准(20190012)。

1.2方法

1.2.1检测血清CA72-4、CEA、CA19-9水平 采集所有研究对象清晨空腹静脉血5 mL,置于无抗凝剂的真空管中,静置30 min,1 200 r/min离心15 min,分离血清待测。采用电化学发光法检测血清CEA、CA72-4 、CA19-9水平。肿瘤标志物阳性界值:CA72-4>6.9 U/mL,CEA>5 ng/mL,CA19-9>37 U/mL。

1.2.2检测外周血CD4+CD25+Treg细胞的比例 采集所有研究对象清晨空腹静脉血5mL,采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,使用密度梯度法收集外周血单个核细胞,重新悬浮制成细胞悬液,调整密度为1×106/mL;取细胞悬液1 mL置于试管,1 500 r/min离心10 min,弃上清液。胃癌组分别加入CD4-FITC和CD25-PE抗体各20 μL,对照组加入IgG2a-FITC和IgG2a-PE抗体各20 μL,并将其置于4 ℃环境下孵育30 min,再次离心,采用磷酸盐缓冲液洗涤2次。采用流式细胞仪进行检测,在CD4-FITC/CD25-PE双参图上计算CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比。

2 结 果

2.1两组CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg细胞比例对比 胃癌组患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4+CD25+Treg细胞比例比对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg细胞比例对比

2.2胃癌组不同临床资料患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg细胞比例比较 胃癌组TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg细胞比例比Ⅰ～Ⅱ期患者高,高～中分化程度患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平比低分化程度患者低,淋巴结转移患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg细胞比例比淋巴结未转移患者高,差异均有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 胃癌组不同临床资料患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg细胞比例比较

2.3胃癌组CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4+CD25+Treg细胞比例的相关性分析 Pearson相关分析结果显示,胃癌组血清CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4+CD25+Treg细胞比例均呈正相关(r=0.587、0.678、0.696,P<0.05)。

3 讨 论

据我国癌症中心数据表明,胃癌发病率和病死率分别位于恶性肿瘤的第2位和第3位[6]。手术切除是根治胃癌的主要手段,但晚期患者病情进展快、转移率高,即使积极采取治疗措施,患者术后5年的远期生存率仍不足30%[1]。因此探讨胃癌早期诊断的肿瘤标志物及发生、发展分子机制,对提高胃癌患者的生存率具有显著意义。

肿瘤标志物是指特征性存在于恶性肿瘤细胞或由恶性肿瘤细胞异常增殖产生的物质,包括糖类抗原、激素、酶类等物质,其水平变化在一定程度上可以反映肿瘤负荷情况及恶性进展过程,对肿瘤的诊断、治疗及评估复发和转移具有指导作用[7]。CA72-4、CEA及CA19-9是胃肠道肿瘤监测的常用血清肿瘤标志物,已在胃癌诊治及转移检测和预后判断中被广泛应用。有研究发现,健康人血清中CEA水平极低,肿瘤患者血清中其水平明显升高,CEA是结直肠癌的特异性标志物[8]。机体内CA19-9水平与肿瘤大小、浸润及转移有关,随着癌细胞的恶性增殖,CEA、CA19-9等肿瘤相关抗原释放入血液中,使其在血清中的水平升高[9]。CA72-4与胃癌临床分期及淋巴结受累明显相关,术前血清CA72-4水平高预示着较高的致死风险,是胃癌中灵敏度和特异度较高的标志物[10]。本研究发现,胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。考虑肿瘤组织的异常分化导致血液中肿瘤组织相关抗原水平异常升高。胃癌组TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平比Ⅰ～Ⅱ期患者高,高～中分化程度患者CA72-4、CEA、CA19-9水平比低分化程度患者低,淋巴结转移患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平比淋巴结未转移患者高,差异均有统计学意义(P<0.05),这与钟兰等[10]研究报道一致。提示随着疾病的进展,CA72-4、CEA、CA19-9水平升高预示着肿瘤浸润、侵袭能力更强,患者体内肿瘤负荷增加。

有研究发现,肿瘤的发生与肿瘤细胞本身的免疫逃逸功能有关,肿瘤患者体内往往存在着免疫系统失常,“免疫逃逸机制”是肿瘤的特点之一[11-12]。越来越多的学者也将研究重心放在了肿瘤免疫机制和免疫治疗上,期望通过平衡机体免疫系统微环境,增强机体抗肿瘤免疫力,进而杀伤肿瘤细胞,提高肿瘤治疗效果。Treg细胞是重要的T淋巴细胞亚群,在机体抗肿瘤免疫中发挥重要作用[4]。CD4+CD25+Treg细胞是近年被人们所认识的一类免疫调节细胞,在机体中主要发挥免疫调节抑制作用,其不仅能够维持机体自身免疫耐受,还能阻止机体对肿瘤细胞的免疫应答,促进肿瘤细胞发生免疫逃逸,在肿瘤免疫反应及自身免疫性疾病中扮演重要角色[13]。大量研究表明,胃癌、卵巢癌、肺癌等多种肿瘤患者外周血、淋巴结及肿瘤浸润组织中均存在Treg细胞比例升高的现象[14-15],这提示肿瘤患者体内存在着不同程度的免疫抑制和免疫耐受,Treg细胞比例升高是肿瘤免疫耐受产生的重要机制。本研究结果发现,胃癌组TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的CD4+CD25+Treg细胞比例比Ⅰ～Ⅱ期患者高,淋巴结转移患者的CD4+CD25+Treg细胞比例比淋巴结未转移患者高,差异均有统计学意义(P<0.05),与上述研究报道结果一致。有研究表明,肿瘤分期越高的患者外周血Treg细胞比例越高,出现淋巴结转移者Treg细胞比例高于未转移者[14]。CD4+CD25+Treg细胞不仅与肿瘤免疫抑制有关,与肿瘤恶性程度也相关,其细胞数量增多往往预示着更高的疾病严重程度和较差的预后。提示CD4+CD25+Treg细胞与肿瘤侵袭及淋巴结转移有关,可在一定程度上作为检测疾病进展的免疫指标。分析原因可能是CD4+CD25+Treg细胞比例影响机体免疫系统对肿瘤抗原的应答,造成肿瘤细胞免疫逃逸,促进了癌症的进展,癌症晚期患者常出现淋巴结转移,肿瘤细胞增殖较快,机体免疫功能降低,因而Treg细胞比例升高[16]。

此外有研究表明,CD4+CD25+Treg细胞抑制抗肿瘤免疫可促进肿瘤细胞生长,与肿瘤标志物水平明显相关[17]。李滢等[18]研究报道,外周血Treg细胞比例与骨髓瘤患者肿瘤负荷及化疗疗效密切相关,接受化疗的初治骨髓瘤患者Treg细胞比例下降与肿瘤负荷减少及治疗反应有关。本研究结果显示,胃癌组血清CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4+CD25+Treg细胞比例均呈正相关(r=0.587、0.678、0.696,P<0.05),提示随着肿瘤浸润转移风险升高,CA72-4、CEA、CA19-9水平逐渐升高,机体免疫抑制作用越强,CD4+CD25+Treg细胞比例随着机体肿瘤负荷的增大而增高。因此,检测CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4+CD25+Treg细胞比例可为胃癌病情检测及免疫状态评估提供指导意义。

综上所述,胃癌组患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4+CD25+Treg细胞比例高于对照组,且存在正相关性,与胃癌的发生、发展及肿瘤浸润和转移密切相关。CD4+CD25+Treg细胞比例可随肿瘤负荷的变化而变化,对胃癌患者病情评估、监测机体免疫状态及判断预后具有一定临床价值。