化学发光微粒子免疫检测法和ELISA法检测乙型肝炎表面抗体的价值

白 羽

福建省泉州市第一医院检验科 362000

乙型肝炎表面抗体(HBsAb)由乙型肝炎表面抗原(HBsAg)诱导产生,是乙型肝炎免疫力的重要标志,检测该抗体水平对于评估疫苗反应至关重要[1-2]。在完成初次疫苗接种计划1～2个月后,抗体水平>10mIU/ml 被认为具有血清保护作用。随着时间和年龄的增长,已知抗体滴度明显降低,且部分个体可能对加强剂量反应更好[3]。因此,测量HBsAb水平在暴露后预防的决策制定中起着重要作用。化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)是两种常用测量HBsAb的方法[4]。但ELISA和CMIA基于不同的测试原理,ELISA是一种直接的抗体夹心酶测定法,利用天然HBsAg(亚型ad和ay)作为固相,利用偶联物和底物之间反应产生的颜色强度来测量存在的抗体量。CMIA则为化学发光测定技术与免疫反应相结合的方法。与血清中的抗HbsAg结合的重组HBsAg包被的顺磁性微粒和吖啶酯标记的HBsAb的包被粒子作为缀合物,HBsAb抗体浓度由抗原抗体反应发出的光决定,并使用相对光单位测量。研究报道,由于方法信号及方法学等方面的差异,CMIA及ELISA对HBsAb的测量数值可能存在不同[5]。基于此,本文对CMIA及ELISA检测HBsAb的价值进行分析。

1 资料与方法

1.1 样本来源 随机抽取我院2022年2—12月已按要求按时接种乙型肝炎疫苗接种的血液样本共180份。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂:仪器:全自动化学发光免疫分析仪(美国雅培公司,型号:Architect i2000SR)、全自动酶标仪(意大利 SEAC公司,型号:Alisei)。试剂:CMIA法试剂盒、ELISA 法试剂盒分别由美国雅培公司、北京万泰公司提供。

1.2.2 检测方法:ELISA法:按照全自动操作流程规范对收集的180份血清样本予以检测。仪器检测范围为2～1 000mIU/ml,若检测过程中某血清样本检测值超过仪器检测上限(>1 000mIU/ml)则需对血清样本进行稀释后再次予以检测。以HBsAb水平≥10mIU/ml为阳性判定标准。CMIA法:将血清样品加入96孔板相应孔中后,添加50μl酶标试剂,孵育60min;洗板显色,对待测样本抗体浓度予以定标曲线计算浓度。HBsAb水平≥10mIU/ml为阳性判定标准,以上严格按试剂盒说明书进行相关操作。检测前均进行精密度、正确度验证及线性评价。

1.3 观察指标 分别从定性检测和定量检测两个方面对比CMIA法和ELISA法检测HBsAb的价值。

2 结果

2.1 CMIA法和ELISA法定性检测HBsAb结果的一致性对比 180份血清样本中,CMIA法检测阳性170例,阴性10例,阳性率为94.44%, ELISA法检测阳性164例,阴性16例,阳性率为91.11%,两组阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05),且一致性检验显示Kappa值=0.752>0.75,提示上述方法定性检测HBsAb结果一致性好,见表1。

表1 CMIA法和 ELISA法定性检测结果一致性对比

2.2 CMIA法和ELISA法定量检测HBsAb结果对比 Bland-Altman图显示:两种方法平均差值为356.4mIU/ml>0,CMIA法和ELISA法定量检测结果一致性差,见图1。

图1 CMIA法和ELISA法检测HBsAb水平Bland-Altman图

2.3 CMIA法和ELISA法对不同浓度样本检查结果对比 随机选取CMIA法检测浓度>2 000mIU/ml的30例血清样本进行ELISA法检测,结果显示ELISA法检测值较CMIA法低;选取CMIA法检测浓度10～50mIU/ml样本20例予以ELISA法检测,结果显示ELISA法检测20例样本中有4份(20.00%)样本为阴性(<10mIU/ml)。见表2。

表2 CMIA法和 ELISA法对不同浓度样本检查结果对比

3 讨论

HBsAb可在自然感染或注射疫苗后产生,其能有效减少HBV的传播,降低乙型肝炎感染风险[6]。通常测量HBsAb可确定机体在接种疫苗后是否产生足够的免疫反应,评估是否具有保护效价,另外,动态检测HBsAb水平有助于为暴露后管理决策提供理论依据。虽然ELISA因成本低、操作简便、批量检测等优势成为临床广泛使用的检测方法,但临床实际工作检测中,多数ELISA试剂盒无法做到定量检测均为定性检测,即使能进行定量检测的科研用试剂盒在HBsAb低水平状态下,也存在一定的漏诊及误诊风险,因此无法准确判断处于较低HBsAb水平者是否需要加强免疫[7]。若出现溶血样本、黄疸样本等情况将会对结果造成干扰。近年来,化学发光免疫分析法技术的发展逐渐用于血清中的小分子物质、肿瘤标志物等检测中,CMIA作为化学发光免疫分析法技术中的一种方法,在电化学发光技术基础上增加了生物索—亲和素技术以及磁性微珠包被技术,有助于提高该检测方法的灵敏度[8]。本研究从定性和定量测量两个方面对比CMIA和ELISA方法检测HBsAb的价值。

本文结果显示,在定性检测方面,180份血清样本中,CMIA法检测阳性170例,阴性10例,阳性率为94.44%,ELISA法检测阳性164例,阴性16例,阳性率为91.11%,两组阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05),且一致性检验显示Kappa值为0.752>0.75,两种检测方法对HBsAb水平检测的一致性好,说明两种方法均能有效检测出HBsAb。HBsAb检测受内源性和外源性影响,类风湿因子、各种补体、特殊自身抗体、交叉反应物质等为ELISA检测的内源性干扰因素[9]。标本溶血、血清标本离心处理过程、试剂质量等为ELISA检测结果的外源性干扰因素[10]。相较于ELISA检测,CMIA法检测可有效保证标本离心分离效果,尽量避免外源性干扰因素,以提高对HBsAb的检测效能。

在定量检测方面,Bland-Altman图显示两种方法平均差值为356. 4mIU/ml>0,说明检测结果一致性较差。分析这两种定量检测结果较差的原因,一方面,ELISA法为全手工操作,容易受人为因素的干扰,且血清样本在加样、洗板、孵育温度和时间任一环节出现失误将影响HBsAb结果[11],而相较于ELISA法的手工操作,CMIA法全程自动化程度较高。另一方面,ELISA法定量检测范围仅为10～160mIU/ml[12],相对较窄。部分接种完乙型肝炎疫苗后,体内HBsAb水平在短时间内迅速上升,因此在检测时需对血液样本予以稀释,此过程可能会对结果造成影响。且ELISA法检测范围的下限正好为HBsAb判断阴性、阳性的界限,这一情况可导致对低样本灵敏度不足,对弱阳性样本错判为阴性,影响检测结果。而CMIA法可检测范围较ELISA法10～160mIU/ml范围广,为2 ～1 000mIU/ml,且CMIA法以“链霉亲和素—生物素”放大系统与三联吡啶钌相结合为检测原理,能在电场中持续获得电子发光,增强获得的信号强度,延长信号发光的持续时间,以提高检测结果的灵敏度和特异性。黄韬等[12]研究对比ELISA与CMIA法对HBsAb检测结果发现,相较于ELISA法,CMIA法诊断性能更高。另有研究显示,ELISA法对其他肝炎的抗原或者抗体中弱阳性样本检测结果重复性较差,易造成假阴性结果[13]。另外值得注意的是,由于本研究检测仪器仅择了Architect i2000SR型免疫分析仪和Alisei型酶标仪对血清中HBsAg的检测结果进行了比较和评估,是否存在检测仪器型号等其他差异则需要后期展开进一步探讨。

综上所述,HBsAb定性检测中CMIA法和ELISA法的一致性较高,在控制检测成本的情况下可选择ELISA法;CMIA法定量检测效能较ELISA法更高,且重复性更好,操作简便,但CMIA法成本相对较高,临床工作中建议结合临床实际和检验需求等因素综合考虑以选择合适的检测方法,有条件的实验室可以CMIA法检测为主,也可以先予以ELISA法检测,对于可疑结果再使用CMIA法复核其结果。