急性冠脉综合征病人血清LCN-2、hs-CRP水平及miR-150-5p表达与危险分层的关系

王 娟,颜永进,陆 齐

急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)是临床常见的以动脉粥样硬化斑块破裂为主要临床特征的冠脉综合征类型,包括急性ST段抬高型心肌梗死及非ST段抬高型心肌梗死、不稳定型心绞痛等[1]。ACS为严重的心血管系统疾病,常见于男性、老年人、绝经后女性、高血脂人群、糖尿病病人、腹型肥胖或有冠心病家族病史者[2]。一般情况下,ACS常表现为胸闷、胸痛等临床症状,严重者可出现心力衰竭、心律失常甚至死亡,因此,及时评估ACS病人的危险分层具有重要的临床指导意义[3]。近年来,全球急性冠状动脉事件注册(Global Registry of Acute Coronary Event,GRACE)评分系统作为临床用于评估ACS病人预后的新工具,其将病人的病情风险评估结果与救治措施关联,针对性给予病人急救干预,能有效预防风险因素,从而降低相关心血管事件的发生风险[4]。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,LCN2)与动脉粥样硬化斑块稳定性相关,在不同类型冠心病病人的血液循环中,心肌梗死病人的LCN2水平明显增高且与冠状动脉病变程度呈正相关[5]。超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)直接参与冠状动脉粥样硬化斑块炎症的发生、发展过程,与ACS发病有关[6-7]。miR-150-5p是一种血清中的miRNA,生物信息学网站Targetscan(www.targetscan.org/vert_72)的查询结果表明,其与LCN2 mRNA的3′-UTR结合,调控靶基因LCN2的表达,在动脉粥样硬化斑块形成中发挥重要作用。本研究拟分析LCN2、hs-CRP和miR-150-5p与ACS病人危险分层的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年7月—2019年10月我院收治的经冠状动脉造影满足ACS相关诊断标准的病人163例作为ACS组,其中,男99例,女64例,年龄(59.40±8.20)岁,急性ST段抬高型心肌梗死32例,急性非ST段抬高型心肌梗死16例,不稳定型心绞痛115例。根据GRACE评分系统将163例ACS病人分为低危组(≤108分,76例)、中危组(109～140分,54例)、高危组(>140分,33例)。选取同期于我院体检的200名健康人群作为对照组,其中,男134名,女66名,年龄(59.32±7.88)岁。本研究经医院生物医学伦理委员会审查通过(伦理审查批件号:NTDXYXY00125-26574),所有入选者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准:因胸闷或胸痛急诊入院,发病时间<2 h;参照2002年美国心脏病学会(ACC)/美国心脏协会(AHA)指南标准[8],经冠状动脉造影检查确诊为ACS。排除标准:出现短暂脑缺血;严重贫血,心力衰竭,恶性肿瘤,免疫系统疾病或肝、肾功能不全者;心脏瓣膜病或心肌痛;血浆清蛋白异常;主动申请退出本研究者。

1.3 方法

1.3.1 GRACE评分

采用GRACE评分系统于病人入院后24 h内评价病人的体征指标、临床症状、一般资料、影像学检查表现及实验室指标情况。GRACE评分标准为:依据病人心率、年龄、收缩压、肌酐、心肌梗死严重程度(Killip分级)、心肌标志物水平、心电图ST段改变、是否有已知的心脏事件(心搏骤停)8项进行分级评估,该评分系统总分为372分。本研究中,低危组为(68.70±15.34)分,中危组为(118.23±15.34)分,高危组(158.23±15.74)分。

1.3.2 血清LCN2、hs-CRP、miR-150-5p水平检测

采集ACS病人入院即刻静脉血,健康者采集体检当日空腹静脉血,使用抗凝管室温静置2 h,离心收集血清并置于-80 ℃冰箱中保存待检。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清LCN2、hs-CRP水平;采用定量逆转录聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-150-5p的表达情况。提取血清样本中的总RNA,检测浓度和纯度后将其反转录成cDNA,以cDNA为模板,配制10 μL反应体系,在qRT-PCR仪上进行扩增反应,条件为:94 ℃预热14 min,94 ℃变性15 s,55 ℃退火30 s,70 ℃延伸30 s,共40个循环。以U6来为内参。qRT-PCR引物序列:miR-150-5p正向引物5′-CGCTCTCTCCCAACCCTTGTACC-3′,反向引物5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′;U6正向引物5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAA-3′T,反向引物 5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。用2-ΔΔCt计算基因的相对表达量,每个Ct值为相应样品重复测量3次后所得均值。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 不同ACS危险分层病人一般资料比较

不同ACS危险分层病人一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 不同ACS危险分层病人一般资料比较

2.2 ACS组与对照组病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表达比较

ACS组病人血清LCN2、hs-CRP水平高于对照组,miR-150-5p表达低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 ACS组与对照组病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表达比较(±s)

2.3 不同ACS危险分层病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表达比较

与低危组比较,中危组、高危组LCN2、hs-CRP水平升高,miR-150-5p表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与中危组比较,高危组LCN2、hs-CRP表达升高,miR-150-5p表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

表3 不同ACS危险分层病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表达比较(±s)

2.4 LCN2、hs-CRP和miR-150-5p与ACS危险分层的相关性分析

将LCN2、hs-CRP和miR-150-5p与ACS危险分层进行Spearman秩相关分析,结果显示,血清LCN2、hs-CRP水平与ACS危险分层呈正相关(rs=0.61,P<0.05;rs=0.64,P<0.05),miR-150-5p表达与ACS危险分层呈负相关(rs=-0.58,P<0.05)。

2.5 ACS危险因素的多因素Logistic回归分析

以是否诊断ACS为因变量,以血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表达、血脂异常、吸烟史等为自变量,在调整年龄、性别等因素后,血清LCN2每上升1 mg/mL,ACS发病的风险增加2.921倍;血清hs-CRP每增加1 mg/mL,ACS发病的风险增加2.733倍;miR-150-5p每增加1个相对值,ACS发病的风险增加3.672倍;血脂异常相对于血脂正常,ACS发病的风险增加2.623倍;有吸烟史相对于无吸烟史,ACS发病的风险增加1.081倍。详见表4。

表4 ACS危险因素的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

ACS是临床中较为常见的以动脉粥样硬化斑块发生破裂为主要临床特征的冠脉综合征。研究表明,评估ACS病人的危险分层对临床治疗策略的选择、再发急性冠状动脉缺血的预测具有重要意义[9]。现阶段临床中多采用GRACE评分、心肌梗死溶栓治疗(thrombolysis in myocardial infarction,TIMI)危险评分等方式对ACS进行危险分层的分析和评估[10]。GRACE评分系统是近年来临床中广泛应用的全球急性冠脉综合征病情状态评分量表,多用于评估病人住院期间或出院后再发ACS或死亡的风险,对ACS的预后判断具有重要的临床价值,是评估ACS病人冠状动脉狭窄程度的重要指标[11]。

LCN2属于脂质运载蛋白超家族,通过与基质金属肽酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP-9)形成复合物,抑制MMP-9水解,延长MMP-9蛋白水解活性,增加冠状动脉粥样斑块的不稳定性[12],另外,LCN2作为促炎因子,在炎症状态下能诱导炎症介质的释放,促进免疫细胞极化,进一步加重斑块的不稳定性。LCN2基因中包含可以结合转录因子的位点,转录因子包括肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor alpha-like,TNF-α)、干扰素-γ(interferon gamma,IFN-γ)等,转录因子通过与位点结合可上调LCN2的表达,而LCN2又可通过核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)途径诱导多种炎性因子表达,这种正反馈机制使得炎症效应进一步放大,斑块稳定性逐渐下降,血管破裂,进而导致心肌缺血、坏死[13-14]。研究表明,LCN2是中性粒细胞发生免疫反应时基因表达的核心模块,LCN2表达增加会导致hs-CRP表达升高[15]。本研究结果显示,ACS组病人血清LCN2、hs-CRP水平较对照组升高(P<0.05),血清LCN2、hs-CRP水平与GRACE危险分层呈正相关(P<0.05),进一步表明血清LCN2、hs-CRP水平与冠状动脉斑块的不稳定性及ACS病情进展相关。

miRNA为非编码RNA,通过与靶基因mRNA的3′-UTR不完全或完全互补配对,进而在转录水平或转录后水平调控靶基因的表达,参与人类生长发育的调控。研究显示,miR-150-5p表达上调,具有减缓心肌凋亡、保护心脏血管的作用[15];体外实验表明,敲低FOXD3-AS1基因可上调 miR-150-5p的表达,进一步增加细胞存活率、抑制细胞凋亡,从而保护心肌细胞免受缺氧诱导的损伤[16]。另外,miR-150-5p还直接影响心肌梗死的病程发展,体外动物实验表明,小鼠的骨髓干细胞外泌体通过上调miR-150-5p的表达,靶向减弱心肌细胞的凋亡并有效提升心脏功能[17]。本研究结果表明,ACS组miR-150-5p表达低于对照组,进一步分析发现,高危组miR-150-5p水平最低,miR-150-5p水平与GRACE危险分层呈负相关(P<0.05),对ACS病情评估有一定预测价值。

LCN2、hs-CRP和miR-150-5p对ACS的风险评估与GRACE评分分级具有良好的一致性,可增加临床医师对ACS风险评估预测的准确性,有利于临床医师对心血管疾病的快速诊断和预后分析。LCN2、hs-CRP和miR-150-5p之间关系紧密,之后的研究可在心肌细胞水平进行功能验证,分析其可能的调控机制,为ACS的靶向治疗提供新思路和方法。

综上所述,ACS病人血清高LCN2、高hs-CRP水平和低miR-150-5P表达是ACS的危险因素,对预测ACS危险分层有较高的临床价值。