降糖舒心方对糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬的影响

符显昭,陈佳俊,蒋晓凤,申亚亚,覃金艳,丘海先,闭红函

(右江民族医学院附属医院,广西 百色 533099)

慢性心力衰竭是心肌重构发展的结果,而心肌重构是多种心脏疾病慢性发展的病理变化。当心肌组织受缺氧缺血、衰老、血压升高等因素影响时,心肌细胞损伤、死亡丢失,而作为应激之后的反应和损伤修复,取而代之的则是心肌纤维化的发生,进而导致心室扩大及心力衰竭[1]。目前研究发现,细胞死亡丢失方式除了坏死和凋亡外,还存在一种因细胞过度自噬导致的死亡,即自噬性细胞死亡,也称Ⅱ型程序性死亡[2]。正常情况下,自噬可以降解变性的蛋白质和受损的细胞器,给心肌提供氨基酸及游离脂肪酸,保护心肌细胞,但自噬被过度激活则损伤心肌,产生负面影响,因此自噬在心脏疾病发展中具有双重作用,如自噬性细胞死亡增加,则心肌细胞减少,并且由于心肌细胞不能再生,最终引发心力衰竭[3]。自噬的适度激活与心肌内质网应激形成了机体内适应性、保护性的交互作用,而内质网应激过度激活可介导过度自噬,导致心肌细胞自噬性死亡增加[4]。糖尿病合并慢性心力衰竭发病隐匿,治疗预后差[5]。中医理论认为气阴两虚、瘀毒内蕴为糖尿病心肌病变的主要病机,前期临床研究发现具有滋阴益气、活血解毒作用的降糖舒心方能纠正糖脂代谢紊乱,减轻胰岛素抵抗,调节心肌能量代谢,抑制心力衰竭激活的肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RASS)对心脏的损害,缩小左室舒张期末容积,降低心室充盈压,改善心肌重构,提高糖尿病合并慢性心力衰竭患者心功能[6]。本研究通过建立糖尿病合并慢性心力衰竭大鼠模型,基于蛋白激酶样内质网应激酶-真核翻译启始因子2α-微管相关蛋白1轻链3(PERK-eIF2α-LC3)通路,探讨了降糖舒心方干预糖尿病合并慢性心力衰竭心肌重构的分子机制。

1 实验材料与方法

1.1动物 雄性SD大鼠100只,体重220～250 g,购于广西医科大学实验动物中心,合格证号:SCXK (桂)2020-003。大鼠饲养于右江民族医学院动物实验中心,饲养条件:室温20～23 ℃,相对湿度40%～50%,适应性普通饲料(江苏省协同生物工程有限公司)喂养7 d。本实验已通过右江民族医学院实验动物伦理委员会审查(2019030701)。

1.2药物 降糖舒心方,组方:人参10 g、黄芪15 g、麦冬15 g、生地15 g、山药15 g、山茱萸10 g、大黄5 g、黄连8 g、丹参10 g、五味子10 g,药材购自右江民族医学院附属医院,用不锈钢桶水煎,水煎液分别按高剂量浓缩至130%和低剂量浓缩至80%,冰箱贮存备用。格列喹酮(天津金世制药有限公司,国药准字H20084004),贝那普利(上海新亚药业闵行有限公司,国药准字H20044840)。

1.3主要仪器与试剂 SLAN-96S型荧光全自动定量PCR仪(北京栎海生物科技有限公司);YKT-6300型光学显微镜(上海永科光学仪器有限公司);E0972型全自动石蜡切片机(上海碧云天生物技术有限公司);5425R型高速低温离心机(南京贝登电子商务有限公司);ASP300型组织脱水机(德国徕卡公司);MLS-3750型高压蒸汽灭菌器(北京莱博瑞杰科技有限公司);IMS-40型制冰机(常熟市雪科电器有限公司);SW-CJ-1FD型超净工作台(浙江孚夏医疗科技有限公司);5DT-4型血糖仪(北京怡成生物电子技术有限公司);链脲佐菌素( STZ,货号:18883-66-4,北京酷来搏科技有限公司);糖化血红蛋白(HbA1c)试剂盒(货号:A097481,上海抚生实业有限公司)、同型半胱氨酸(Hcy)试剂盒( 货号:A099640,上海抚生实业有限公司)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)试剂盒(货号:A100687,上海抚生实业有限公司),Cathepsin D抗体(货号:ab2732,Abcam公司)、微管相关蛋白1轻链3蛋白Ⅰ抗体(LC3Ⅰ)(货号:ab210498,Abcam公司)、微管相关蛋白1轻链3蛋白Ⅱ抗体(LC3Ⅱ,货号:ab63817,Abcam公司)。

1.4实验方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组、降糖舒心低剂量组、降糖舒心高剂量组,每组20只。假手术组大鼠腹腔内注射柠檬酸缓冲液,普通饲料喂养。其余组大鼠单次性腹腔注射50 mg/kg STZ(用柠檬酸缓冲液配置为浓度10 mg/mL),72 h后尾静脉采血,用血糖试纸检测空腹血糖,连续2次空腹血糖≥16.7 mmol/L 认为糖尿病造模成功,随后高脂饲料(含普通饲料78.2%、猪油10%、胆固醇1.5%、蛋黄粉10%、猪胆盐0.3%,江苏省协同生物工程有限公司)喂养1个月。然后参考文献[7]采用腹主动脉缩窄方法对各糖尿病造模大鼠进行慢性心力衰竭造模:大鼠喂养1个月后,禁食8 h,腹腔注射10 %水合氯醛3 mL/kg麻醉后打开腹腔,于双侧肾动脉上方钝性分离腹主动脉,在腹主动脉旁置入7号针,用4-0丝线穿过分离出的腹主动脉和7号针,慢慢结扎后拔针,缩窄腹主动脉 60%～70%,缝合腹腔,术后抗感染治疗,继续高脂饲料饲养和饮水。假手术组大鼠对腹主动脉只穿线不结扎,普通喂养。术后28 d,麻醉备皮,大鼠取仰卧位,用Vevo 770高分辨率小动物超声系统进行心脏超声检测,依据美国超声心动学会制定的标准,大鼠射血分数(EF)≤45%为心力衰竭造模成功。降糖舒心低剂量组给予浓度为80%的降糖舒心方药液灌胃,降糖舒心高剂量组给予浓度为130%的降糖舒心方药液灌胃,西药组给予含格列喹酮9.80 mg/kg 和贝那普利3.30 mg/kg(按成人临床用药剂量的5.4倍计算)的蒸馏水稀释液灌胃,假手术组和模型组给予蒸馏水灌胃,灌胃量均为3 mL/100 g,均1次/d,连续灌胃2个月,灌胃期间各造模大鼠继续高脂饲料喂养。

1.5检测指标及方法

1.5.1心功能指标 灌药2个月后,采用2%异氟烷让大鼠吸入麻醉后,仰卧固定,用探头频率为17.5 MHz的Vevo-770小动物超声仪进行超声心动图检查,记录左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径 (LVESD)、短轴缩短率(FS)和EF,取3次平均值。

1.5.2HbA1c及血清 Hcy和AngⅡ水平 采用ELISA法测定,实验步骤按照试剂盒说明书进行。

1.5.3心肌组织Masson染色情况 处死大鼠,在冰上迅速取心脏,取一部分心肌组织用4%多聚甲醛固定,经石蜡包埋,切4 μm薄片,依次浸入二甲苯20 min→无水乙醇10 min→95%,90%,80%,70%梯度乙醇各5 min→蒸馏水洗;Weigert氏铁苏木素染5 min,自来水洗;1%的盐酸酒精分化,自来水冲洗返蓝;丽春红液染色5～10 min,蒸馏水漂洗;磷钼酸水溶液处理3～5 min后,用苯胺蓝液复染5 min;浸入1%冰醋酸1 min;依次经95%酒精Ⅰ5 min →95%酒精Ⅱ 5 min→无水乙醇Ⅰ5 min→无水乙醇Ⅱ5 min →二甲苯Ⅰ5 min→二甲苯Ⅱ5 min,脱水透明,晾干后中性树胶封片;在显微镜下,选取拍照5个不重叠视野,用Image-Pro Plus Version 6.0软件计算胶原纤维灰度值。

1.5.4心肌细胞自噬及超微结构 取经3%的戊二醛溶液处理的心肌组织,用1%锇酸溶液固定2 h,吸出固定液,用0.1 mol/L pH 7.0 PBS漂洗样品3次,每次15 min,然后用梯度浓度(50%,70%,80%,90%,95%)乙醇溶液对心肌组织样品进行脱水,纯丙酮处理20 min,用812环氧树脂包埋心肌组织,制成超薄切片(50～70 nm),用醋酸双氧铀和柠檬酸铅溶液双重染色15 min,透射电镜观察(加速电压60～80 kV,放大倍率30 000),调节物镜聚焦旋钮至图片清晰,拍照。

1.5.5心肌组织中PERK、eIF2α和C/EBP同源蛋白(CHOP) mRNA表达情况 采用RT-PCR法检测:从-80 ℃冰箱取出液氮冷冻心肌组织,加入Trizol裂解液裂解后,依次加入氯仿、异丙醇、75%乙醇、无水乙醇、DEPC水溶解RNA。然后根据反转录试剂盒说明书要求进行操作:42 ℃ 15 min,85 ℃ 5 min,反转录为cDNA,按照PCR试剂盒说明将cDNA扩增为目的基因,在Realtime PCR仪上进行PCR反应,反应条件:95 ℃ 10 min变性;95 ℃ 15 s;60 ℃ 60 s;40次循环。利用溶解曲线检测引物的特异性,记录达到所设定的阈值所经历的循环数,即CT值,采用2-△△CT计算表达量,以假手术组表达量为1,比值为相对表达量。内参基因和目的基因引物由康为世纪生物科技有限公司设计合成,目的基因:eIF2α的上游引物序列为5’-GACAGCCCTTCTCCAAGAACT-3’,下游引物序列为5’-ACCATGGGATTAACAGAC TTGCT-3’,扩增产物长度为218 bp;PERK的上游引物序列为5’-CTTTTGGACCTGGTCTGCTCT-3’,下游引物序列为5’-GGGAGAAGCCTCTTGAACGA-3’,扩增产物长度为163 bp;CHOP的上游引物序列为5’-TCACCATCACACAGACAGGC-3’,下游引物序列为5’-GCCCTTTCTGAGTACCCCAC-3’,扩增产物长度为148 bp。内参基因GAPDH上游引物序列为5’-GATGGTGAAGGTCGGTGTGA-3’,下游引物序列为5’-TGAACTTGCCGTGGGTAGAG-3’,扩增产物长度为114 bp。

1.5.6心肌组织中Cathepsin D、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况 采用Western blot法检测:从-80 ℃冰箱取出心肌组织,用剪刀剪碎,加入1 mL冷Lysis Buffer,在组织匀浆机中进行匀浆,冰上静置裂解15 min。将匀浆液放入离心管中,12 000 r/min离心5 min,取上清液,移至预冷的离心管,用BCA试剂盒检测其浓度。用SDS-PAGE电泳和转膜后,把PVDF膜放入孵育盒中,加入5%脱脂奶粉的封闭液,摇床振荡1.5 h;结束封闭后,用TBST洗膜3次;将膜放入含一抗稀释液(按抗体说明稀释)的孵育盒中,4 ℃摇床振荡,孵育过夜;第2天室温振荡30 min,吸弃一抗,TBST洗3次;用5%脱脂奶粉封闭液稀释二抗,室温摇床振荡1 h;反应结束后,回收二抗,然后用TBST洗膜3次。在PVDF膜滴加发光试剂混合液,充分接触反应3 min,使用ECL成像仪拍照,使用Image J软件测定灰度值。

2 结 果

2.1各组大鼠心功能指标比较 与假手术组比较,模型组大鼠 LVEDD、LVESD均明显增加(P均<0.05),FS和EF均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,各药物组大鼠 LVEDD、LVESD均明显缩短(P均<0.05),FS和EF均明显升高(P均<0.05),且降糖舒心高剂量组各指标变化更大,但各药物组间各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心功能指标比较

2.2各组大鼠HbA1c及血清Hcy、AngⅡ水平比较模型组大鼠HbA1c及血清Hcy、AngⅡ水平均明显高于假手术组(P均<0.05);各药物组大鼠HbA1c及血清Hcy、AngⅡ水平均明显低于模型组(P均<0.05);降糖舒心高剂量组大鼠HbA1c及血清Hcy、AngⅡ水平与降糖舒心低剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),但各指标均明显低于西药组(P均<0.05)。见表2。

表2 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠HbA1c及血清Hcy、AngⅡ水平比较

2.3各组大鼠心肌组织Masson染色情况及心肌胶原纤维IOD值比较 心肌胶原纤维被染成蓝色,心肌纤维被染成红色。假手术组大鼠心肌组织中无胶原纤维增生,心肌胶原纤维IOD值为351.43±17.26;模型组大鼠心肌胶原纤维大量分布在心肌纤维之间,呈扩散状态,心肌胶原纤维IOD值为9 118.67±215.86,明显高于假手术组(P<0.05);各药物组大鼠心肌胶原纤维增生较少,西药组、降糖舒心低剂量组、降糖舒心高剂量组大鼠心肌胶原纤维IOD值分别为4 934.83±202.45,4 131.67±183.54,3 726.33±139.56,均明显低于模型组(P均<0.05),且降糖舒心高剂量组和降糖舒心低剂量组均明显低于西药组(P均<0.05)。见图1。

图1 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌组织心肌纤维和胶原纤维Masson染色表现(×400)

2.4各组大鼠心肌细胞自噬及心肌组织超微结构假手术组大鼠心肌细胞形态、大小正常,细胞连接紧密、排列整齐,胞内可见含量不等的内质网和线粒体等细胞器,间质纤维无增生,细胞自噬小体较少;模型组大鼠心肌细胞排列紊乱,横纹不清晰,间质纤维增生严重,细胞自噬小体增多,细胞外形不规则,突向腔面或脱落,细胞间连接扩大,胞内有空泡,线粒体肿胀,呈空泡样改变;与模型组相比,各药物组大鼠心肌细胞自噬及纤维化程度减轻,其中降糖舒心高剂量组改善更明显。见图2。

图2 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌细胞自噬及心肌组织超微结构(×15 000,箭头为自噬体)

2.5各组大鼠心肌组织中PERK、eIF2α、CHOP mRNA 相对表达量比较 模型组大鼠心肌组织中PERK、eIF2α和CHOP mRNA相对表达量均明显高于假手术组(P均<0.05);各药物组大鼠心肌组织中PERK、eIF2α和CHOP mRNA相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05);降糖舒心高剂量组大鼠心肌组织中PERK、eIF2α和CHOP mRNA相对表达量与降糖舒心低剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),但各指标均明显低于西药组(P均<0.05)。见表3。

表3 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌组织中PERK、eIF2α和CHOP mRNA相对表达量比较

2.6各组大鼠心肌组织中Cathepsin D、LC3Ⅰ、LC3 Ⅱ蛋白表达情况及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值比较 模型组大鼠心肌组织中Cathepsin D、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均明显高于假手术组(P均<0.05);各药物组大鼠心肌组织中Cathepsin D、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均明显低于模型组(P均<0.05);降糖舒心低、高剂量组大鼠LC3Ⅱ蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均明显低于西药组(P均<0.05),降糖舒心低、高剂量组大鼠心肌组织中Cathepsin D、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见图3和表4。

图3 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌组织中Cathepsin D、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达电泳图

表4 假手术组和糖尿病合并慢性心力衰竭各组大鼠心肌组织中Cathepsin、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值比较

3 讨 论

自噬是由溶酶体介导的降解细胞内蛋白质和细胞器的过程,该过程可维持细胞中间代谢,清除细胞内受损的细胞或者细胞器,提高细胞的生存能力[8]。内质网是真核细胞中的一种细胞器,主要参与细胞内蛋白质折叠、运输和翻译后修饰,为新生多肽提供适宜的加工环境,通过分子伴侣和翻译后修饰引导多肽合成二硫键,最终形成稳定的三级结构,形成正确折叠的分泌蛋白[9]。当细胞内环境紊乱,影响内质网中蛋白质折叠的效率,导致错误折叠蛋白累积,就会引发内质网应激,诱发未折叠蛋白反应(UPR)[9]。正常情况下,积累的未折叠或错误折叠蛋白超过内质网处理能力时,自噬就会被诱导激活,作为次级反应降解累积的非折叠蛋白,以减轻内质网的负荷,但持久且过度发生内质网应激时,自噬的保护作用机制将逐渐转变为一种持续性、破坏性的作用[10]。内质网应激发生后,诱发UPR,上调葡萄糖调节蛋白78 (GRP78),激活下游PERK、活化转录因子6(ATF6)和肌醇需求酶1 (IRE-l)三条信号传导通路,以协助清除错误折叠蛋白,其中PERK是位于内质网膜上具有丝氨酸/苏氨酸结构域的Ⅰ型跨膜蛋白,是内质网应激中重要的信号因子,其下游的信号分子是eIF2α[11]。GRP78/PERK/eIF2α信号通路是内质网应激/UPR中一条特殊信号传导途径,也是介导内质网应激与自噬交互作用的重要调控因子,生理状态下,PERK与GRP78在内质网膜上形成稳定复合物,内质网应激负担过重时,GRP78与PERK解离,失去束缚的PERK则磷酸化下游信号分子eIF2α,磷酸化后eIF2α通过多种信号分子诱导自噬[12]。

糖尿病患者糖代谢正常途径受损,蛋白激酶C途径、晚期糖基化终末产物途径等过度激活,使活性氧簇蓄积,影响蛋白质的空间结构折叠,导致未折叠蛋白蓄积,诱发内质网应激,影响内质网的稳态[10]。心肌细胞是代谢旺盛的细胞,需要内质网(肌浆网)处理大量的能量物质和细胞成分,易受糖脂代谢紊乱影响;并且在心力衰竭发展过程中,激活了RAAS系统和交感神经系统,启动了神经-内分泌-免疫功能的代偿调节机制,产生各种神经递质、激素、炎症介质[13]。因此,糖尿病合并心力衰竭患者既受到心力衰竭激活的RAAS系统和交感神经系统受损的打击,又受到胰岛素抵抗导致的代谢紊乱的侵害,致使神经体液调节和内分泌代谢保持着一种致损性平衡。尽管糖尿病合并心力衰竭发病机制复杂,但糖尿病的病理状态下导致的高糖、高脂、氧化应激、炎症反应及免疫失衡等均参与内质网应激,作为多种应激源的共同通路,内质网应激将糖尿病状态下多种危险因素与心力衰竭发展相联系,对心肌细胞的内质网应激-自噬交互作用推波助澜,通过UPR与自噬进行交叉对话,产生持续性破坏作用,导致自噬水平持续增加和过度激活,甚至自噬性细胞死亡[14]。心肌细胞在成年后不具再生能力,因此心肌细胞死亡或凋亡,可导致心肌细胞数量绝对减少,而间质细胞代偿性增生,从而导致细胞外基质产生过多,形成心肌纤维化,最终导致心肌重构[15]。

溶酶体是自噬通路的最终降解场所,变性的蛋白质和受损的细胞器包裹于溶酶体中,Cathepsin D是自噬溶酶体中降解依赖的重要水解酶,其水平可反映自噬活性,心力衰竭时其表达上调[16]。定位于前自噬体表面的LC3是自噬标志性蛋白之一,在自噬体的延长及成熟中起重要作用,LC3的合成过程经由LC3Ⅰ的未成熟形成阶段,再经ATG7催化,LC3Ⅰ与膜磷脂磷脂酰乙醇胺作用,产生LC3Ⅱ(其相对量反映了自噬体的含量),LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值反映自噬活性[17]。在应激状态下,自噬参与各种急性心脏病变,在许多慢性心脏病变过程中也可以观测到自噬,如糖尿病合并心脏病等[18]。Li等[19]在小鼠主动脉缩窄术的心脏肥厚实验中发现,病变早期自噬水平下降,随后自噬被激活,并维持上调达9周,且与心力衰竭程度呈正相关。Kanamori等[20]研究发现,在心肌梗死7 d后,心肌自噬水平明显上升,表现为 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Cathepsin D、p62均增加。因此,Cathepsin D、LC3Ⅱ表达情况既可反映心肌细胞自噬的活跃程度,又可反映溶酶体活性,体现自噬小体累积情况。

高血压引起心脏负荷过重是心力衰竭的一个重要原因,心脏随高血压增加的压力后负荷,适应性地启动一系列代偿机制增强心肌收缩力,导致左心室扩张、肥厚,心肌纤维化等病理学改变,这种变化可适应性降低心室壁张力,维持心脏一定射血量以满足机体正常代谢需求,但通常伴随着交感神经和RASS系统的激活(AngⅡ水平升高),初期表现为一种代偿性机制反应,若持续活化,则会导致病理性的心室重构,成为心力衰竭进程中的重要环节。心脏超声是评价心脏结构和功能的一项客观检查手段,EF和FS是反映心脏功能的指标,二者降低提示左心室整体收缩功能不全;LVESD和LVEDD是反映心脏结构的指标,二者增加提示容量负荷过重,心脏变形能力降低,心肌重构严重。

本实验结果显示,造模后模型组大鼠LVEDD、LVESD增加,FS、EF降低,糖化血红蛋白及血清Hcy、AngⅡ水平升高(其中Hcy可与内质网内的蛋白质发生二硫键反应,扰乱内质网正常的蛋白折叠),提示心肌发生病理性重构。Masson染色和透射电镜观察模型组大鼠心肌胶原纤维增生,心肌组织肌原纤维模糊,线粒体增生且变形,心肌细胞自噬小体大量增加,细胞浆内充满肿胀的线粒体,且内质网应激信号分子PERK、eIF2a、CHOP mRNA表达量和自噬相关蛋白Cathepsin D、LC3Ⅱ蛋白表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均明显升高,提示慢性心力衰竭引起心肌细胞中的内质网应邀-自噬过度激活,内质网应激-自噬反应交互作用加强,导致自噬性细胞死亡,心肌细胞数量减少,心肌间质代偿性增多,产生心肌纤维化和心肌重构。

中医认为先天禀赋不足是糖尿病发生的重要内在因素,饮食不节、损伤脾胃是后发因素。在发病之初,阴虚燥热,迁延日久则致气阴两虚、燥热痰瘀,气为血之帅,气虚无力推动血液运行,则加重血瘀;内热则耗伤津液,津亏热结,致血脉瘀滞,久而成毒。因此糖尿病合并心力衰竭以气阴两虚为本,瘀毒内蕴为标,因此治疗以滋阴益气为基础,强调活血解毒。降糖舒心方中的山茱萸、山药、地黄是《景岳全书》治疗真阴不足的左归丸成分;人参、麦冬、五味子是李杲《内外伤辨惑论》中滋阴、益气、生津、养心的生脉散组方;加入黄连、大黄清热解毒,燥湿祛浊;加丹参活血化瘀,养心血;加黄芪益气扶正解毒。全方滋阴益气、活血解毒。前期实验研究结果表明,降糖舒心方能抑制糖尿病心肌内质网应激相关凋亡的通路,减轻氧化应激-内质网应激-细胞凋亡的耦联反应,可保护心肌组织结构及超微结构[21]。

本实验结果显示,与模型组比较,降糖舒心低、高剂量组大鼠 LVEDD、LVESD均明显缩短,FS和 EF均明显升高,糖化血红蛋白及血清Hcy、AngⅡ水平和心肌胶原纤维IOD值均明显降低;心肌胶原纤维减少,心肌细胞自噬及纤维化程度减轻;心肌组织中PERK、eIF2α、CHOP mRNA相对表达量和Cathepsin D、LC3Ⅱ蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均明显降低。提示降糖舒心方可通过调控PERK-eIF2α-LC3通路减轻自噬效应,抑制内质网应激-自噬的过度激活,进而减缓糖尿病合并慢性心力衰竭心肌重构的进展。

综上所述,心肌重构发生机制复杂,但本研究发现调控心肌细胞过度自噬能够有效抑制心肌纤维化,为中医药治疗糖尿病心肌重构提供了新的靶点和依据。

利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突。