小麦中呕吐毒素荧光定量免疫层析快速检测产品评价

唐亚娥，王 坛，米 山

（铜川市粮油产品质量监督检验站，陕西铜川 727000）

小麦是我国的主要粮食作物之一，我国2022年小麦产量13 772万t，占全国粮食总产量的20.06%。陕西省作为小麦的主产省之一，总产量约占全国小麦总产量的9%。真菌毒素是由真菌产生的小分子次级代谢产物，具有致癌、致畸和肝毒性的危害，可经过生物积累进入食物链。呕吐毒素是真菌毒素的一种，又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON），因其可以使动物产生呕吐症状而被称为呕吐毒素，是麦类中最常见的真菌毒素之一[1-2]。陕西人民饮食习惯以面食为主，因此小麦的质量安全显得尤为重要。

我国《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）规定小麦、小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇限量为1 000 μg·kg-1。小麦中呕吐毒素的检测方法有液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、时间分辨荧光免疫定量法、胶体金快速定量法和胶体金定性法等[3-4]。液相色谱-串联质谱、高效液相色谱等仪器检测方法具有准确度高、稳定性好、灵敏度高的优点，但仪器设备相对昂贵，对检测人员的要求高，需要在专业的实验室操作，不适合在小麦收储期间使用；免疫层析试纸条法因其快速、简便、成本低的特点而适合小麦收储现场[5]。《粮食质量安全监管办法》第二十七条中明确规定，粮食经营者收购验质检验以及县级以上粮食行政管理部门依法开展的粮食质量安全风险监测与抽查检验，可采用国家粮食行政管理部门认可的快速检验方法，快速检验结果可作为收购验质依据和质量安全风险监测与抽检筛查的依据。采用快速检验方法进行监测和抽查检验，发现测定结果为国家标准临界值时，应当按照国家标准规定的检验方法进行复核检验[6]。

目前，小麦中呕吐毒素快速检验方法的应用在实际粮食收购中已初具规模，主要为胶体金免疫层析方法，随着《粮油检验 谷物中黄曲霉毒素B1的测定时间分辨荧光免疫层析定量法》（LS/T 6143—2023）标准的发布，荧光免疫层析试纸条也开始进入市场，由于产品新进入市场且食品安全快速检测试剂生产厂家受到的监管与食品生产以及医疗器械生产均不同，导致各个厂家产品质量差异较大[7]，影响小麦质量安全的判断，甚至会造成一些严重的经济纠纷和损失。

为在基层检测中更加准确地检出小麦中的呕吐毒素，给予收储单位和贸易商有效的参考，本评价选取了在陕西市场知名度相对高的A、B、C、D共4家产品。评价了不同厂家产品在小麦基质上对于呕吐毒素的检测能力。这对于帮助用户了解现有快速检测产品质量并进行合适的选择、推动快速检测产品生产厂家改进产品质量具有非常重要的现实意义。

1 材料与方法

1.1 材料

小麦、小麦粉常规样品，来源于各收储单位日常送检；小麦粉有证标准物质，GBW(E)100382，证书编号TOXIN-JTBW1。

1.2 仪器与试剂

天平（RC-XY110-2C，北京睿诚永创科技有限公司），振荡器（HMG-WX，北京美正生物科技有限公司），离心机（Timi-10k，上海泰坦科技股份有限公司），4个厂家呕吐毒素荧光定量检测卡/试纸条及对应的荧光定量读数仪。

1.3 评价方法

1.3.1 评价样品的选择

根据小麦中DON的国家限量（1 000 μg·kg-1），使用低、中、高3个浓度水平的样品进行评价，样品均通过《食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》（GB 5009.111—2016）中第二法免疫亲和层析净化高效液相色谱法进行测定，且满足能力验证均匀性和稳定性要求，评价用样品中呕吐毒素含量如表1所示。

表1 样品中呕吐毒素含量

1.3.2 准确度评价

对上述小麦及小麦粉样品中DON含量进行检测，整个检测过程按照各个厂家说明书分别进行操作，每个样品分别平行测定两次取平均值进行结果统计。用每个样品的检测回收率来评价该厂家产品的准确度，回收率计算公式为

1.3.3 精密度评价

选取DON含量低、中、高3个浓度的小麦样品进行6平行检测，用每个样品的检测结果的相对标准偏差来评价该厂家产品的精密度，相对标准偏差计算公式为

1.3.4 其他指标评价

快速检测产品因具有操作便捷、检测效率高和检测成本低等特点，适合在基层使用。本评价也对各厂家呕吐毒素荧光定量检测卡/试纸条的操作便捷性、检测效率、检测成本进行比较。

2 结果与分析

2.1 准确度

4个厂家DON荧光定量检测卡/试纸条检测小麦及小麦粉样品中DON回收率结果如表2所示。A厂家产品对小麦和小麦粉基质中DON低浓度水平的回收率为66%～152%，中、高浓度水平的回收率为83%～103%，有证标准物质回收率为73%。B厂家产品对小麦和小麦粉基质中DON低浓度水平的回收率为71%～116%，中浓度水平的回收率为76%～102%，高浓度水平的回收率为85%～90%，有证标准物质回收率为92%。C厂家产品对小麦和小麦粉基质中DON低浓度水平的回收率为62%～104%，中浓度水平的回收率为83%～86%，高浓度水平的回收率为86%～119%，有证标准物质回收率为97%。D厂家产品对小麦和小麦粉基质中DON低浓度水平的回收率为84%～134%，中浓度水平的回收率为95%～117%，高浓度水平的回收率为98%～111%，有证标准物质回收率为118%。

表2 小麦及小麦粉样品中DON检测结果

2.2 精密度

4个厂家DON荧光定量检测卡/试纸条检测小麦中DON相对标准偏差结果如图1所示。A厂家产品检测小麦中DON仅有高浓度水平的相对标准偏差超过15%，中低浓度水平的相对标准偏差均小于15%。B、C、D厂家产品检测小麦中DON低中高浓度水平的相对标准偏差均小于15%，其中C厂家和D厂家低中高浓度水平的相对标准偏差均小于10%。

图1 不同厂家产品小麦中DON检测结果相对标准偏差

2.3 其他指标评价

由表3可知，对比4家免疫层析试纸条形式为一步法或者两步法，且提取液为去离子水或50%乙醇-水溶液操作和获取均较为便捷、环保，单个样本检测时间均能控制在10 min以内，检测成本均在25～36元。从这些指标上看均能满足现场快速检测的需求。

表3 不同厂家产品其他指标对比

3 结论

从基本指标对比来看，4个厂家的呕吐毒素荧光定量条的产品设计均能满足粮食收储现场快速检测的需求。不同厂家均有回收率超出80%～120%的结果。结合检测结果的精密度，A厂家高浓度水平检测结果相对标准偏差超出15%，偏差较大不符合粮食收储要求；B、C、D厂家检测结果精密度较好，但存在整体偏低或偏高的风险，整体偏低容易引起假阴性造成收储粮食的不安全性，而整体偏高容易引起假阳性，容易造成送粮商家的损失。本评价从使用者的角度对市场上知名度较高的荧光免疫层析产品性能进行了初步评价，仅涉及准确度、精密度两个主要性能指标，但是对检测限、定量限，特异性及基质效应未能进行进一步评价，具有一定的局限性。但本评价对于帮助用户了解现有快速检测产品质量并做出合适的选择、推动快速检测产品生产厂家改进产品质量具有非常重要的现实意义。