乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量 前S2蛋白阳性率与慢性乙型肝炎患者肝纤四项指标的相关性分析

江丽慧

【摘要】目的    分析慢性乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）载量、前S2蛋白（Pre S2）阳性率与乙型肝炎患者肝纤4项指标的相关性。方法    选取上饶市第二人民医院2019年1月—2021年12月收治的68例乙肝患者为研究对象，测定其血清HBV-DNA载量、Pre S2阳性率及血清肝纤指标[层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）、Ⅳ型胶原（ⅣC）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢ）]水平，按照HBV-DNA载量与Pre S2检测结果，将患者分为低载量组、中载量组、高载量组及Pre S2阳性组与Pre S2阴性组，比较各组肝纤指标水平，并进行相关性分析。结果    高载量组血清LN、HA、PⅢ水平明显低于中载量组与低载量组，且中载量组明显低于低载量组（P<0.05），3组Ⅳ C水平比较差异无统计学意义（P>0.05）；高载量组Pre S2阳性率明显高于其余2组（P<0.05），中载量组明显高于低载量组（P<0.05）。Pre S2阳性组患者血清LN、HA及PⅢ水平明显低于Pre S2阴性组（P<0.05），2组Ⅳ C水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。相关性分析显示，HBV-DNA载量、Pre S2阳性率与LN、HA、PⅢ水平呈负相关（P<0.05）。结论    慢性乙型肝炎患者HBV-DNA载量、Pre S2阳性率与LN、HA、PⅢ密切相关。

【关键词】  乙型肝炎病毒； 脱氧核糖核酸； 前S2蛋白； 肝纤维化；相关性

中图分类号：R575.1        文献标识码：A

文章编号：1672-1721（2023）22-0115-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.22.038

乙型肝炎（乙肝）为乙型肝炎病毒（HBV）感染所致，是我国流行最广、临床发病率最高、传染性极强的病毒性肝炎[1]。HBV基因中前S2区域与编码形成的前S2蛋白（Pre S2）为当前乙型肝炎相关研究的主要课题，既往研究指出，Pre S2在HBV感染宿主之后肝细胞复制、机体对病毒的免疫清除等过程中发挥着重要作用[2]。有调查显示，全球因HBV感染发展为肝功能衰竭、肝硬化病变和因肝癌而死亡的病例数达100万例/年[3]。肝纤维化是肝组织受损后肝脏之中纤维结缔组织出现的异常增生现象，参与多种慢性肝病产生过程，属于肝硬化病变必经之路，同时贯穿肝硬化发展全过程。有报道称，我国肝硬化常见诱因为乙肝，由乙肝发展为肝纤维化的病例数约60万例/年，临床早期诊断并给予有效治疗对改善患者预后具有重要意义[4-5]。血清学检测属于肝纤维化评估主要辅助方式，相关标志物以层黏蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢ）、透明质酸（HA）与Ⅳ型胶原（Ⅳ C）为主，即肝纤4项。本研究探讨了HBV脱氧核糖核酸（HBV-DNA）載量、Pre S2阳性率与乙肝患者肝纤4项指标水平的相关性，希望为临床早期诊治乙肝提供一定指导依据。

1    资料与方法

1.1    临床资料    选取2019年1月—2021年12月上饶市第二人民医院收治的68例慢性乙型肝炎患者为研究对象。纳入标准：与《慢性乙型肝炎防治指南》[6]中相关诊断标准相符；具有乙肝病史或者乙肝表面抗原（HBsAg）阳性超过6个月；入院前6个月内无抗病毒治疗史与抗纤维化治疗史；临床资料完整。排除标准：肿瘤患者；患有其他病毒性肝炎，如甲型、丙型或丁型肝炎等；合并药物性肝损伤、酒精性肝病、失代偿期肝硬化或者自身免疫性肝病等；合并慢性肾功能衰竭或者结缔组织疾病等其他纤维化病变。按照HBV-DNA载量将62例乙肝患者分为3组，3组性别、年龄及其母亲HBV感染情况等一般资料差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

1.2    方法    采集患者空腹静脉血样本，室温静置0.5 h后离心处理，分离血清样本，-20 ℃环境之中保存待测。HBV-DNA检测，通过实时荧光定量（PCR-荧光探针）法测定HBV-DNA载量，相关试剂盒由广州中山大学达安基因有限公司提供，采用PCR定量检测仪（美国ABI公司，7300PLUS型）。按照HBV-DNA载量进行分组，1×103～1×105拷贝/mL为低载量组，1×105拷贝/mL～1×107拷贝/mL为中载量组，1×107拷贝/mL以上为高载量组。

Pre S2采取酶联免疫吸附法进行测定，相关试剂盒由上海科华实业有限公司提供。血清层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢ）、透明质酸（HA）以及Ⅳ型胶原（Ⅳ C）水平的检测采用全自动化学发光仪（MAGLUMI4000PIUS，深圳市新产业生物医学工程有限公司）与配套试剂。

1.3    统计学方法    使用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计数资料以百分比表示，采用χ2检验，计量资料以x±s表示，采用t检验和单因素方差分析，相关性检验使用Spearman分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2    结果

2.1    不同HBV-DNA载量组肝纤4项指标水平比较    高载量组血清LN、HA、PⅢ水平明显低于中载量组与低载量组，且中载量组明显低于低载量组（P<0.05）；3组Ⅳ C水平比较差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.2    不同HBV-DNA载量组Pre S2阳性率比较    高载量组Pre S2阳性率明显高于其他2组，中载量组明显高于低载量组（P<0.05），见表3。

2.3    Pre S2阳性组与阴性组肝纤4项指标水平比较    Pre S2阳性组患者血清LN、HA及PⅢ水平明显低于Pre S2阴性组（P<0.05），2组Ⅳ C水平比较差异无统计学意义（P>0.05），见表4。

2.4    相关性分析    HBV-DNA载量、Pre S2阳性率与LN、HA、PⅢ水平呈负相关（P<0.05），见表5。

3    讨论

既往研究指出，肝纤维化进程主要为肝细胞反复受损以及细胞外间质不断增加的过程[7]，其中，间质合成涉及肝间质以及肝实质细胞，主要包含有胶原蛋白（常见为Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅳ型，其中Ⅳ型为Ⅳ C）、蛋白聚糖（常见为HA）与非胶原蛋白（常见为LN等），PⅢ主要反映肝脏之中Ⅲ型胶原合成情况，均在肝纤维化病变产生与发展过程中发挥着重要作用[8]。LN水平可以及时反映机体基质胶原更新情况，LN和Ⅳ C水平综合反映了肝脏部位纤维化状态。本研究中，不同HBV-DNA载量组LN、HA、PⅢ水平差异有统计学意义（P<0.05），提示乙肝患者LN、HA、PⅢ水平可能与HBV-DNA载量有关。对于慢性乙肝患者而言，HBV-DNA载量能够评估HBV复制程度，病毒复制期间会刺激免疫系统，引起免疫病理反应，造成肝细胞损伤，从而引发肝纤维化病变。本研究发现，HBV-DNA载量与LN、HA、PⅢ水平呈负相关（P<0.05）。乙肝是一种免疫介导疾病，在人体感染HBV后会出现免疫应答，处于免疫耐受期时，机体病毒清除能力较弱，因此HBV-DNA复制活跃，一般表现为HBV-DNA载量高水平[9]。然而，随着肝纤维化病变逐渐加重，将会到达免疫清除期，血清HBV-DNA载量会在非特异性免疫清除作用加强的条件下呈现下降趋势。免疫清除过程中会对肝细胞造成反复免疫性损伤，加快细胞炎症坏死，进一步加重纤维化病变，因此在纤维化较重的时候，HBV-DNA载量反而较低。3组Ⅳ C水平比较，差异无统计学意义（P>0.05），可能因为Ⅳ C表达水平在肝脏纤维化早期不会产生较大改变，待发展至肝硬化阶段才呈现明显变化。

HBV蛋白S编码区组成包括Pre S1、Pre S2以及S基因，分别编码3种不同蛋白，依次为小分子蛋白（主要指S蛋白，具有产生保护性抗体作用）、中分子蛋白（主要指M蛋白，即Pre S2+S蛋白物质）、大分子蛋白（主要指L蛋白，组成为Pre S1、Pre S2以及S蛋白）。既往研究表明，Pre S2与人体肝体细胞表面分布着聚合蛋白受体（PHSA2R），故提出了聚合人血清白蛋白（PHSA）可以介导HBV附着并且侵袭肝细胞，引起HBV感染的观点[10]。Pre S2上存在PHSA2R结合部位，因此可能属于PHSA2R活性主要分子基础。有报道称，血清Pre S2不仅关系到PHSA2R活性，同时亦与乙肝e抗原（HBeAg）、HBV-DNA载量等病毒复制标志物具有平行关系[11]。本研究中，Pre S2阳性率高载量组>中載量组>低载量组，表明HBV-DNA载量越高的患者Pre S2阳性率越高。本研究中，当HBV-DNA载量处于高水平时，依然有部分患者检出Pre S2阴性，考虑可能由于HBV-DNA C区启动子或者C区基因突变，导致宿主免疫功能提高。Pre S2测定不仅可为乙肝早期诊断提供指导，同时在乙肝急性期对患者进行连续动态观察，有利于早期了解患者转归[12]。本研究结果显示，Pre S2阳性率与LN、HA、PⅢ水平呈负相关（P<0.05），肝纤维化程度越低，Pre S2阳性率越高。考虑与LN、HA、PⅢ水平越高，HBV-DNA载量越低有关。

综上所述，慢性乙型肝炎患者HBV-DNA载量、Pre S2阳性率与血清LN、HA、PⅢ密切相关，检测HBV-DNA载量、Pre S2阳性率可为肝纤维化的诊治提供指导。

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