Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者手术切除组织中MNAT1蛋白表达及意义

陈 琳,唐桂莹

南京市江宁医院病理科,江苏南京 210000

肺癌是我国发病率、死亡率最高的恶性肿瘤,相关资料显示,我国肺癌的年发病率约为35/10万人,严重威胁了人们的身体健康与生命安全[1]。据统计,全部肺癌病例类型中有将近80%为非小细胞肺癌(NSCLC)[2]。虽然目前临床已发现多种肺癌分子标志物,如细胞角蛋白-19、组织蛋白酶D、谷胱甘肽S-转移酶等在肺癌的发生、发展中具有重大影响,但是临床治疗疗效仍需提高,迫切需要寻找新的分子标志物。细胞周期蛋白依赖性激酶活化激酶(CAK)是细胞生长、增殖事件中级联反应的重要调节因子,可参与癌细胞形成。细胞周期蛋白依赖性激酶活化激酶组成因子1(MNAT1)对CAK起到“开关作用”[3-4]。已有研究表明,MNAT1可能参与了NSCLC的发生发展过程[5]。本研究探讨早期NSCLC组织中MNAT1表达及其与临床病理特征及患者预后的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 将南京市江宁医院2018年1月至2020年10月收治的96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者纳入研究,男59例,女37例;年龄31～77岁,平均(50.34±7.12);29例发生淋巴结转移;41例发生胸膜浸润;38例发生气道内扩散;肿瘤最大径1.1～6.8 cm,平均(3.68±0.53)cm。纳入标准:(1)经病理学检查确诊为NSCLC[6];(2)临床分期I～ⅡB期;(3)符合手术切除指征,且实施该术式;(4)随访至少2年。排除标准:(1)手术切除前接受放化疗等抗肿瘤治疗者;(2)复发NSCLC患者或其他部位恶性肿瘤转移至肺部者;(3)失访者;(4)随访期间意外死亡者;(5)有精神障碍或诊疗依从性差者;(6)临床资料不完整者。的临床资料进行回顾性分析,见表1。本研究经本院伦理委员会审批通过。

表1 入选患者的基本资料

1.2方法

1.2.1取材与处理 所有患者均于手术中切取病变及其周围组织,距癌组织边缘≥2 cm的组织为癌旁组织。

1.2.2MNAT1蛋白表达检测 采取免疫组化法对MNAT1蛋白表达检测。标本首先4%甲醛溶液固定,经石蜡包埋后切片,微波抗原修复,抗体均由Lecia Novocastra公司提供,严格按照试剂说明书进行操作。添加鼠抗人单克隆抗体,4 ℃孵育过夜,冲洗,滴加兔抗鼠多克隆抗体,室温孵育40 min,冲洗,滴入二氨基联苯胺(DAB)显色液(四川海诺威科技有限公司),复染、脱水、封片。MNAT1主要表达于细胞核,将淡棕色、棕色、棕褐色记为阳性染色,将阳性染色细胞≥20%记为蛋白阳性表达。

1.2.3随访 所有患者术后均随访2年。

1.3观察指标 观察癌组织MNAT1蛋白表达的变化,探讨MNAT1蛋白阳性表达与不同临床病理特征以及患者预后的关系。

2 结 果

2.1癌组织和癌旁组织中MNAT1蛋白阳性表达率的比较 癌组织MNAT1蛋白阳性表达率为51.04%(49/96),癌旁组织为10.42%(10/96),前者高于后者,差异有统计学意义(χ2=37.216,P<0.001,见图1。

注:A为癌组织MNAT1蛋白阳性表达;B为癌旁组织MNAT1蛋白阴性表达。

2.2MNAT1蛋白阳性表达与患者临床病理特征的关系 癌组织MNAT 蛋白阳性表达与临床分期、淋巴结转移、分化程度、胸膜浸润和气道内播散有关,而与患者性别、年龄、最大肿瘤直径、病理类型、生长类型无关(P>0.05),见表2。

表2 不同临床病理特征患者癌组织MNAT1蛋白阳性表达率对比结果[n(%)]

2.3癌组织MNAT1蛋白阳性表达与患者预后的关系 医院收治的96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者术后1年内有29例(30.21%)复发,2年内有76例(79.17%)复发。癌组织MNAT1蛋白阳性表达患者术后1年内和2年内复发率均高于癌组织MNAT1蛋白阴性表达患者(χ2=29.418、17.029,P<0.001)。

2.4癌组织MNAT1蛋白阳性表达与患者术后死亡的关系 96例患者中术后2年内共有11例死亡,病死率为11.46%。死亡患者癌组织MNAT1蛋白阳性表达率为100.00%(11/11),生存患者为44.71%(38/85),提示癌组织MNAT1蛋白阳性表达与患者术后2年生存有关(χ2=11.795,P=0.001),生存曲线见图3。

图3 癌组织MNAT1蛋白阳性与阴性表达患者Kaplan-Meier生存曲线

3 讨 论

MNAT1是CAK的组配因子,也是CAK的重要组成部分,对CAK的活性起到重要作用,CAK可通过磷酸化调控机体细胞周期进程[8-9]。故MNAT1对细胞周期进展具有重大作用,推测很可能能够影响恶性肿瘤的发生和发展。

本次研究旨在探讨早期NSCLC癌组织中MNAT1的表达及其临床意义,发现Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者手术切除的癌组织中存在MNAT1蛋白表达偏高。相关研究表明[10-11],CAK可通过磷酸化CDK上的残基,进而控制机体细胞周期进程,对细胞的增殖、代谢、存活、转录调控等生物过程具有重要作用,也与肿瘤细胞的生长、增殖紧密相关。siRNA沉默肺癌细胞株A549的MNAT1表达,发现其增殖、迁移活性均下降,且Akt/p21信号传导通路被抑制,推测MNAT1表达升高可能是通过激活Akt/p21通路促进肺癌的发展,增强肿瘤的浸润与转移能力的[12]。本研究中癌组织中MNAT1蛋白阳性表达率高,推测很可能是通过调控细胞生长、增殖等途径参与NSCLC的发生。

另外,本研究还发现,96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者术后1年复发率为30.21%、术后2年复发率为79.17%,证实Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者术后存在极大复发风险;Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者癌组织MNAT蛋白阳性表达与临床分期、淋巴结转移、分化程度、胸膜浸润、气道内播散均有关,可知该蛋白阳性表达很可能参与NSCLC病情进展。MNAT1 蛋白阳性表达可通过增强细胞的增殖能力促进恶性肿瘤的发生和发展,与恶性肿瘤的部分临床特征、预后紧密相关[13-14]。相关研究发现[9],在NSCLC患者的癌组织中MNAT1表达高于正常肺组织,MNAT1表达水平与淋巴结转移成正相关。此外,本研究中癌组织MNAT1蛋白阳性表达与Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者术后1年复发有关,提示该蛋白阳性表达很可能能够增加患者术后复发的风险。相关研究表明[15],低MNAT1表达可对细胞迁移产生抑制作用,高MNAT1表达可促进细胞的迁移,降低MNAT1表达可降低使癌细胞的增殖能力,使细胞周期处于G1期,高表达则出现相反情况,即MNAT1可通过对Akt磷酸化的促进,进而抑制p21表达,使细胞增殖加快,导致细胞周期进展加快,患者易复发。另外,本研究中癌组织MNAT1蛋白阳性表达与Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者术后2年生存有关,与上述分析一致,这也印证了癌组织MNAT1蛋白阳性表达与Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者预后有关的结论。

综上所述,在NSCLC癌组织中MNAT1蛋白阳性表达率高于癌旁组织,且癌组织MNAT1蛋白阳性表达与临床分期、淋巴结转移、分化程度、胸膜浸润、气道内播散、术后复发和术后2年生存均有关,与术后1年生存无关。MNAT1能否成为NSCLC防控的新靶点需要进一步研究。