血清miR-195在宫颈鳞状细胞癌诊断中的临床意义

闫丹丹，高涵，王宁

1.中山大学附属第七医院妇产科，广东深圳 518000；2.内蒙古民族大学附属医院妇产科，内蒙古通辽 028000；3.大连医科大学附属第二医院妇科，辽宁大连 116000

MicroRNA（miRNAs）可干扰mRNA的转录、翻译，并具有促进RNA降解的作用，在调节蛋白表达上具有重要作用[1-2]。miRNAs在细胞的凋亡、坏死，以及肿瘤细胞的增殖过程中具有显著活性[3]。既往研究证实miR-195多种恶性肿瘤，如乳腺癌、消化系统肿瘤、泌尿系统肿瘤等均存在异常表达[4-5]，且在此类患者的的组织液中可检测出稳定表达的miRNA。故miR-195的异常表达已经认为是多种肿瘤活化的标志物而应用于临床[6-8]。本研究收集2016年9—11月中国医科大学附属盛京医院中21例确诊且初诊为早期（Ⅰa1～Ⅱa2期）宫颈鳞状细胞癌的患者血清标本为观察组，同期健康志愿者22名为对照组，比较该病患者与正常人群血清miR-195水平的差异，以明确其是否可作为宫颈鳞状细胞癌诊断的潜在标志物。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集21例于本院确诊且初诊为早期（Ⅰa1～Ⅱa2期）宫颈鳞状细胞癌的患者血清标本为观察组，年龄41～68岁，平均（52.2±3.6）岁，宫颈癌临床分期为Ⅰa期7例、Ⅰb期8例、Ⅱa期6例[临床分期采用2009年国际妇产科联盟（The International Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO）的分期标准]。对照组为同期健康志愿者22名，年龄40～65岁，平均（51.9±2.7）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经过本院医学伦理委员会批准（伦理编号201608011），入组前患者或家属签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：精神状况正常；预计生存时间＞6个月；于本院规律就诊；临床资料完整。

排除标准：严重肝肾功能障碍者；肿瘤卡氏评分＜60分者；未明确诊断宫颈癌者；精神状况异常者。

1.3 方法

取靶标志物血清RNA 10 µl，严格按照反转录试剂盒说明进行反转录，并在37℃ 60 min，85℃ 5 min条件下生成cDNA液。应用miR-195正向引物与管家基因（U6）（均由上海生工提供），同时配置等计量灭菌用水为空白对照组，随后进行PCR扩增反应，反应体系剂量为25 µl，共计40个循环，设定每个实验批次均有空白对照

1.4 观察指标

比较两组研究对象的血清miR-195的表达水平，测定方法采用实时荧光定量PCR法，分析血清miR-195在宫颈鳞状细胞癌中的诊断效能。

1.5 统计方法

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据处理，符合正态分布的计量资料以（）表示，组间差异比较采用t检验；通过ROC曲线判断血清miR-195在宫颈鳞状细胞癌的诊断效能。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象miR-195表达水平比较

观察组血清miR-195表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.001）。见表1。

表1 两组研究对象miR-195表达水平比较()

表1 两组研究对象miR-195表达水平比较()

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2.2 血清miR-195在宫颈鳞状细胞癌中的诊断效能分析

血清miR-195诊断宫颈鳞状细胞癌的ROC曲线下面积为0.675（95%CI：0.569～0.781，P=0.001），截断值为29.86时的敏感性和特异性分别为71.43%、60.71%，见图1。

图1 血清miR-195在宫颈鳞状细胞癌中的诊断效能分析

3 讨论

宫颈癌具有多种发病机制，且属于多基因联合作用结果，其中预后最理想的为早期宫颈癌，其五年生存率超过90%[9-11]。随着近年肿瘤学研究的深入，针对恶性肿瘤发生发展的基因与遗传学研究成为目前研究的重点和热点，其中非编码区miRNA越来越受到广大学者的关注。研究提示miRNA在恶性肿瘤细胞的增殖、分化过程中均具有非常关键的调控意义，另外其还影响到恶性肿瘤的转移、复发，同时致病微生物感染过程中亦具有明显作用[12-14]。

本团队前期研究证实了miR-195参与了宫颈鳞状细胞癌的发生，其在宫颈癌组织中表达下调，而且高表达的miR-195抑制Hela和SiHa细胞的增殖，提示miR-195可能是宫颈鳞癌相关的敏感性肿瘤标志物。本研究结果提示观察组血清miR-195表达水平高于对照组（P＜0.05）。另外ROC曲线分析结果提示：血清miR-195诊断的曲线下面积为0.675，其敏感性接近60%，而特异性则超过60.0%，以上结果亦提示miR-195可能是宫颈鳞癌相关的敏感性肿瘤标志物。此结果与申晨歌[15]研究提示血清miR-195诊断宫颈鳞状细胞癌的曲线下面积达到0.716的结果相近。虽然本研究结果提示miR-195作为肿瘤标志物诊断宫颈鳞状细胞癌的ROC曲线下面积相对较低，但其敏感性和特异度具有一定临床价值，究其原因可能是本研究所纳入对象样本量有限，产生一定偏倚有关。本研究因缺乏宫颈上皮内瘤变患者、宫颈腺癌以及晚期宫颈癌者，导致无法从多角度综合探讨血清miR-195对宫颈相关病变的诊断价值，此为本研究不足。本研究结果与曾晶晶等[16]研究提示宫颈癌miR-195相对表达量为（0.38±0.09），血清miR-195诊断宫颈鳞状细胞癌的曲线下面积是0.715，敏感性和特异性均在60%左右的结论相一致。

综上所述，miR-195是一种潜在的诊断宫颈鳞状细胞癌的肿瘤标志物，对临床早期诊断与筛查宫颈鳞癌变有一定指导意义，同时可为术后随访提供指导。