慢性心力衰竭患者外周血lncRNA SOX2-OT和miR-2355-3p表达水平及意义

臧九高, 王梅香, 沙翔

泰州市人民医院心血管内科,江苏泰州 225300

慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是多种心血管疾病的终末阶段,其发病人数逐年增长[1-2],目前临床上缺乏早期评估CHF病情及预后的标志物,无法为其预后不良高危患者的干预及个体化诊疗提供依据。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在心血管系统中的作用正受到越来越多关注,lncRNA参与多种心血管疾病的病理生理过程,可作为诊断疾病、评估病情及预后的标志物[3]。本课题组前期研究发现,沉默lncRNA SOX2-OT通过增加miR-2355-3p表达改善CHF大鼠心功能,减轻炎症反应[4]。因此本文拟将外周血lncRNA SOX2-OT和miR-2355-3p作为标志物,分析CHF患者外周血lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p水平及其对预后的意义。

1 资料和方法

1.1 研究对象

选择本院2018年1月—2021年1月收治的CHF患者90例(CHF组),男59例,女31例,年龄(63.95±9.95)岁,体质指数(23.31±6.41)kg/m2;合并高血压79例,糖尿病46例。CHF组按心功能分级分亚组。另选择同期体检健康志愿者100例(对照组),男62例,女38例,年龄(60.77±11.35)岁,体质指数(22.93±5.68)kg/m2;合并高血压71例,糖尿病39例。两组间一般资料比较差异无显著性(P>0.05)。CHF纳入标准:①符合指南CHF诊断标准[5];②符合美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级Ⅱ～Ⅳ级[5];③临床资料完整。排除标准:①合并急慢性感染、自身免疫性疾病、恶性肿瘤;②住院期间死亡。对照组均进行超声检查排除心脏结构性及功能性异常。本研究经本院医学伦理委员会批准,患者或家属均知情同意。

1.2 外周血lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p的检测

入组时采集空腹外周静脉血3～5 mL,提取RNA,反转录合成cDNA,进行荧光定量PCR。反应体系参照试剂盒说明书配置,引物由上海生工公司合成,以GAPDH为内参。引物序列lncRNA SOX2-OT上游5′-TGCTAGGTCAGGGCTTTAG-3′,下游5′-CTAATGGCTAGCTAGCTAC-3′。miR-2355-3p上游5′-TGCAGTATGCTGAGCGATC-3′,下游试剂盒内通用序列。GAPDH上游5′-GTAGCTGACGATCGAGCTA-3′,下游5′-TGACTGATCAGACTGACGA-3′。反应条件:95 ℃ 3 min,95 ℃ 15 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,重复40个循环。根据公式2-ΔΔCt计算lncRNA SOX2-OT和miR-2355-3p水平。

1.3 观察指标

CHF患者入组时全自动生化分析仪检测超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、N末端B型脑钠肽前体(N-terminal B-type brain natriuretic peptide precursor,NT-proBNP)水平。HP5500型彩色多普勒超声测定左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)水平。CHF患者出院后门诊、电话等随访1年,终点事件为出院后1年内发生主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE),MACE包括心力衰竭再入院、恶性心律失常、心源性死亡及全因死亡。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 各组lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p水平的比较

与对照组比较,CHF组lncRNA SOX2-OT升高,miR-2355-3p降低,且NYHA分级越高,上述变化越明显(P<0.05;表1)。

表1 各组lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p水平的比较

2.2 不同心功能分级CHF患者hs-CRP、NT-proBNP、LVEF水平的比较

CHF组患者NYHA分级越高,hs-CRP、NT-proBNP水平越高,LVEF水平越低(P<0.05;表2)。

表2 不同心功能分级CHF患者hs-CRP、NT-proBNP、LVEF水平的比较

2.3 CHF组各指标的相关性分析结果

CHF组lncRNA SOX2-OT与miR-2355-3p、LVEF呈负相关,与hs-CRP、NT-proBNP呈正相关;miR-2355-3p与hs-CRP、NT-proBNP呈负相关,与LVEF呈正相关(P<0.05;图1)。

图1 CHF组各指标的相关性分析结果

2.4 lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p对CHF预后的预测价值

以CHF组lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p中位数为界,将患者分为高表达者和低表达者,随访1年,CHF患者MACE发生率lncRNA SOX2-OT高表达者高于低表达者,miR-2355-3p低表达者高于高表达者(P<0.05;图2)。ROC曲线分析发现,外周血lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p预测MACE曲线下面积分别为0.870(95%CI 0.794～0.946)和0.710(95%CI 0.596～0.824),lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p对CHF患者MACE具有良好的预测价值(图3)。

图2 不同lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p水平CHF患者预后的K-M曲线

图3 lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p预测CHF患者预后的ROC曲线

3 讨 论

早期评估CHF的病情及预后,筛选预后不良的高危CHF患者,有助于为患者制定个体化治疗方案,以改善其预后。近些年lncRNA及miRNA在心血管疾病中的作用受到越来越多关注。在CHF、心肌梗死、心肌炎等疾病的发病过程中,多种lncRNAs及miRNAs表达的变化不仅在局部心肌组织中发挥生物学作用,还能在血液循环中异常表达并作为评估病情的标志物[6-8]。lncRNA SOX2-OT在心力衰竭模型中表达增加,过表达lncRNA SOX2-OT加重心肌损害,沉默lncRNA SOX2-OT减轻心肌损害[3,9]。本研究在CHF患者外周血中检测到lncRNA SOX2-OT表达增加,且随NYHA心功能分级增加呈增加趋势,表明在CHF的发生及发展过程中存在lncRNA SOX2-OT表达增加,高表达的lncRNA SOX2-OT可能以加剧心肌细胞损害的方式参与CHF的发生及发展。

在CHF动物模型中,沉默lncRNA SOX2-OT通过增加miR-2355-3p表达改善心功能,抑制心肌损害及炎症反应[3]。本研究在CHF患者中观察了lncRNA SOX2-OT/miR-2355-3p轴的变化及意义。CHF患者外周血miR-2355-3p表达水平低于对照组,且随着心功能分级增加呈降低趋势,且lncRNASOX2-OT与miR-2355-3p呈负相关,提示CHF发病过程中可能存在lncRNA SOX2-OT与miR-2355-3p的靶向调控作用。上述两种非编码RNA与心功能指标NT-proBNP、LVEF及炎症指标hs-CRP均具有相关性,表明lncRNA SOX2-OT/miR-2355-3p轴的变化在CHF的发病过程中加重心功能损害,促进炎症反应激活。

炎症反应在CHF的发生发展中起重要作用,多项炎症标志物对CHF患者的预后具有预测价值[10-11]。MACE是目前临床研究中评估CHF预后常用的终点事件,CHF患者累积MACE发生率为20%～40%[12-13]。本研究中CHF患者出院后进行了1年随访,进一步分析lncRNA SOX2-OT/miR-2355-3p轴与预后的关系,经K-M曲线及ROC曲线验证发现,lncRNA SOX2-OT表达增加者、miR-2355-3p表达降低者MACE发生率增加,lncRNA SOX2-OT和miR-2355-3p对MACE具有预测价值。

综上所述,CHF患者外周血lncRNA SOX2-OT表达增加,miR-2355-3p表达降低,lncRNA SOX2-OT、miR-2355-3p表达的变化与心功能损害的加重、炎症反应的激活具有相关性,且两者对出院后1年内发生MACE具有预测价值。以上结果为今后发现CHF新的预后评估标志物提供了新思路,也为深入认识lncRNA SOX2-OT/miR-2355-3p轴在CHF中的作用及机制提供了依据。