急性脑梗死患者血清hs-CRP、CaM、miR-365的变化及临床意义

徐炽天, 胡文霞, 陈生, 梁正玲

1.六安市人民医院 安徽医科大学附属六安医院神经内科,安徽六安 237006;2.上海市公共卫生临床中心,上海 200093

急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)是临床常见脑血管疾病,以中老年患者多见,发病率较高,严重者可危及患者生命安全[1]。ACI时脑血管内皮细胞损伤,分泌炎症因子,这些炎症因子可反映ACI病情变化。超敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)是一种炎症敏感性指标,其含量升高是ACI的独立危险因素[2]。钙超载在ACI的发病中有着重要作用,钙调蛋白(calmodulin,CaM)可调节钙离子生理功能,与细胞死亡关系密切[3]。miR-365属神经特异表达的miRNA[4],有研究发现,miRNA与脑血管疾病的发生发展有关[5],miR-365是ACI的危险因素,在ACI患者血清中表达升高[6],但miR-365与ACI的预后关系尚不清楚。因此,本文对ACI患者血清hs-CRP、CaM、miR-365的变化及临床意义进行探讨,现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取本院2020年2月—2022年2月收治的ACI患者100例(ACI组),男61例,女39例,年龄(62.51±3.62)岁,体质指数(21.56±2.64)kg/m2;吸烟史35例,饮酒史43例,高血压史37例,糖尿病史31例。另选择同期体检健康者50例为对照组,男30例,女20例,年龄(62.45±3.57)岁,体质指数(21.48±2.61)kg/m2;吸烟史18例,饮酒史20例,高血压史17例,糖尿病史15例。两组一般资料比较差异无显著性(P>0.05),具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会批准。ACI组根据神经缺损严重程度、预后分为轻中度组和重度组、预后不良组和预后良好组。ACI纳入标准:①参照《中国脑梗死中西医结合诊治指南(2017)》[7]诊断标准,有短暂性脑缺血发作史,有偏瘫、失语、吞咽困难等症状,查体有锥体束征,头颅CT显示低密度影;②发病前1个月内无外科手术史,发病24 h内入院;③患者或者家属知晓并同意本研究。排除标准:①脑部及其他恶性肿瘤;②严重精神类疾病、肝肾疾病;③近期存在感染、凝血功能障碍。

1.2 神经缺损严重程度的判定

采用美国国立卫生研究院脑卒中量表[8]评分,对ACI患者神经缺损严重程度进行评估,≤15分为轻中度组,>15分为重度组。

1.3 血清hs-CRP和CaM的检测

ACI患者入院后立即采静脉血5 mL,以3 000 r/min离心10 min,取上清,-80 ℃保存待测。采用人hs-CRP ELISA试剂盒(上海初态生物科技有限公司)检测血清hs-CRP,采用人CaM ELISA试剂盒(上海心语生物科技有限公司)检测血清CaM,均根据试剂盒步骤说明操作。

1.4 血清miR-365的检测

采用美国Invitrogen公司TRIzol reagent RNA提取试剂盒提取总RNA,实时qRT-PCR法检测血清miR-365相对表达量。以U6为内参,RNA催化合成采用cDNA PrimerScriptTMRT试剂盒,RNA扩增采用SYBR Premix Ex TaqTMqRT-PCR试剂盒。引物miR-365正向:5′-UAAUGCCCCUAAAAAUCCUUAU-3′,反向:5′-AAGGAUUUUUAGGGGCAUUAUU-3′;U6正向:5′-GTCCTGGCAGATATACACTAAACAT-3′,反向:5′-CTCACGCTTGAATTCATGCGGCTT-3′。反应条件95 ℃ 10 s预变性,95 ℃ 5 s变性,60 ℃ 20 s退火,72 ℃ 30 s延伸,进行40个循环。采用2-ΔΔCt法计算血清miR-365相对表达量。

1.5 预后的评估

患者入院后给予氧气吸入,保持呼吸道通畅,采取抗血小板、他汀类药物等基础治疗。对ACI患者进行3个月随访,采用改良Barthel指数[9]评估患者预后,60～100分为预后良好组,0～59分为预后不良组。

1.6 统计学分析

2 结 果

2.1 各组hs-CRP、CaM、miR-365水平的比较

100例ACI患者中,轻中度神经缺损55例(55.00%),重度神经缺损45例(45.00%),预后良好59例(59.00%),预后不良41例(41.00%)。hs-CRP、CaM、miR-365水平ACI组高于对照组;重度组高于轻中度组;预后不良组高于预后良好组(P<0.05;表1)。

表1 各组hs-CRP、CaM、miR-365水平的比较

2.2 血清hs-CRP、CaM、miR-365水平与神经缺损严重程度的相关性

Pearson相关分析结果显示,血清hs-CRP、CaM、miR-365与神经缺损严重程度呈正相关(r分别为0.523、0.479、0.498,P分别为0.003、0.010、0.009)。

2.3 hs-CRP、CaM、miR-365对ACI预后的预测效能

hs-CRP、CaM、miR-365联合预测ACI预后的诊断效能高于单独预测(P<0.05;表2和图1)。

图1 hs-CRP、CaM、miR-365预测ACI预后的ROC曲线

表2 hs-CRP、CaM、miR-365对ACI预后的预测效能

3 讨 论

ACI男性发病略高于女性,症状多变,对ACI病情、预后评估是ACI治疗的重要程序,对改善其预后具有重要意义。影像学检查可直接观察ACI病灶,但需移动患者,可能会延误最佳治疗时机,影响恢复。hs-CRP是提示机体发生心血管危险事件较敏感的指标之一。本研究中,ACI患者hs-CRP水平显著高于健康体检者,且与神经缺损严重程度呈正相关,预后不良患者hs-CRP水平较高,hs-CRP预测预后的灵敏度、特异度较高,提示hs-CRP可反映ACI病情变化和神经损伤程度,也可预测ACI患者预后。高水平hs-CRP能加剧中性粒细胞对脑组织神经元浸润使其凋亡,导致神经功能障碍,李崇祎等[10]研究显示,hs-CRP在ACI患者血清中的含量高低与神经功能预后有关,是ACI患者神经功能损伤的独立危险因素,与本研究结果相符。因此hs-CRP不仅能反映ACI患者机体炎症情况,还能评估患者神经功能损伤程度,高水平hs-CRP提示预后不良,对ACI患者预后具有预测价值,可作为ACI患者早期病情判断和预后的一个客观指标。

ACI的发病机制较为复杂,钙超载是神经细胞缺血缺氧后继发性损伤的重要环节。CaM又称钙调素,属多功能蛋白质,能与钙离子结合,本身无活性,对钙具有绝对依赖性,参与细胞内多种信号转导途径,是动态钙离子传感器,对调节细胞内钙离子稳定具有重要作用。本研究中,ACI患者CaM水平显著高于健康体检者,且与神经缺损严重程度呈正相关,预后不良患者CaM水平较高,CaM预测预后的灵敏度、特异度较高,提示CaM与ACI患者脑缺血后钙超载有关,可反映病情变化和神经损伤程度,也可预测预后。ACI患者钙离子与CaM结合后可激活下游一系列信号通路,加重脑组织损伤,而CaM拮抗剂可能是治疗脑血管疾病的有效药。ACI应激可增加谷氨酸受体表达,促进钙离子内流,激活多种信号通路,导致神经细胞死亡,钙超载是ACI病情加重的重要危险因素,钙超载和钙离子平衡紊乱可引起CaM含量增加。李楠等[11]研究显示,CaM与ACI患者神经功能损伤程度呈正相关,可用于评估ACI严重程度;沈青[12]研究显示,CaM在ACI患者中水平升高,预后较差患者水平高于预后良好患者,CaM水平能预测ACI严重程度和预后,与本研究结果一致。

微小RNA在心脑血管疾病的发生、发展中起重要作用,miR-365在不同肿瘤中存在异常表达,与肿瘤的发生发展以及预后存在密切联系。MO等[13]在脑缺血大鼠研究中发现,miR-365在脑缺血组织中表达较高,注射miR-365拮抗剂能增加星形胶质细胞新生成熟神经元的数量,减少神经功能缺损,提示miR-365异常升高与脑缺血有关。本研究中,ACI患者miR-365含量显著高于健康体检者,且与神经缺损严重程度呈正相关,预后不良患者miR-365水平较高,miR-365预测预后的灵敏度、特异度较高,提示miR-365可反映病情变化和神经损伤程度,也可预测预后。张许平等[14]研究显示,miR-365与梗死面积、神经缺损程度有关,是影响ACI发生的危险因素,对其预后具有一定预测价值,与本研究结果相符。

本研究发现,hs-CRP、CaM、miR-365联合预测ACI预后的诊断效能高于单独预测,但本研究存在一定局限性,未对ACI不同时间点的hs-CRP、hs-CRP、miR-365进行检测,需临床进一步深入研究。综上所述,血清hs-CRP、CaM、miR-365在ACI患者中高表达,对ACI患者预后具有一定预测价值。