血清sTREM-1、sTim3、cullin4A与肺结核患者肺部受累情况的相关性

唐 莹,唐 钊

1.武汉市金银潭医院检验科,湖北武汉 430000;2.赤壁市人民医院感染科,湖北赤壁 437300

肺结核是我国重点防治的疾病之一,有效消除传染源、控制结核病是改善患者生命质量、提高国民健康水平的关键。目前,HRZE方案[异烟肼(H)+(R)+吡嗪酰胺(Z)+乙胺丁醇(E)]是治疗肺结核的主要化疗方案,但该方案化疗时间长,不良反应多,部分患者难以耐受[1-2]。4MRZE方案[莫西沙星(M)+利福平(R)+吡嗪酰胺(Z)+乙胺丁醇(E)化疗,疗程4个月]是超短程化疗方案,与传统化疗方案相比,疗程更短,不良反应更少[3]。血清可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)是反映细菌感染的敏感指标[4],可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(sTim-3)能诱导性表达于活化T细胞表面,其表达水平与活动性肺结核病情呈正相关[5]。泛素连接酶4A(cullin4A)是一类E3泛素连接酶,具有调控细胞周期、维持基因组稳定性等功能。有研究发现,肺结核患者体内cullin4A水平下调,提示其可能参与肺结核的发生与发展[6]。但关于血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平与肺结核患者4MRZE治疗效果之间的关系并不明确。本研究对肺结核患者4MRZE、2HRZE/4HR及2H3R3Z3E3/4H3R3标准四联疗法方案治疗前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平进行监测,初步探讨上述指标在肺结核患者治疗过程中的变化,现结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2018年1月至2021年1月武汉市金银潭医院及赤壁市人民医院收治的265例肺结核患者作为研究对象,根据化疗方案的不同分为2H3R3Z3E3/4H3R3标准四联疗法方案治疗的对照组(n=97)、4MRZE超短程化疗方案治疗的4MRZE组(n=88)和2HRZE/4HR方案治疗的2HRZE/4HR组(n=80)。纳入标准:符合《中国结核病病理学诊断专家共识》中相关诊断标准;初治肺结核;痰涂片或痰培养阳性;年龄18～60岁。排除标准:糖尿病、心脏病、肝肾疾病、免疫系统疾病、血液系统疾病合并恶性肿瘤者;存在精神障碍不能配合研究者。4MRZE组男50例,女38例;年龄20～56岁,平均(39.41±14.62)岁;2HRZE/4HR组男47例,女33例;年龄21～56岁,平均(39.57±14.33)岁;对照组男56例,女41例;年龄19～55岁,平均(38.18±15.82)岁。3组患者一般资料对比,差异均无统计学意义(P<0.05)。本研究经医院伦理委员会批准,所有参与者均知情同意,并签署书面知情同意文件。

1.2方法

1.2.1治疗方法 4MRZE组患者采用4MRZE方案治疗:莫西沙星(广东阳光药业有限公司,国药准字H20183246)每次0.4 g,每天1次,利福平(成都锦华药业有限责任公司,国药准字H51020786)每次 0.45 g,每天1次,吡嗪酰胺(沈阳红旗制药有限公司,国药准字H21022354)每次0.5 g,每天1次,乙胺丁醇(杭州民生药业有限公司,国药准字H33021602)每次0.5 g,每天1次;疗程4个月。2HRZE/4HR组患者采用2HRZE/4HR方案治疗:异烟肼(广东华南药业集团有限公司,国药准字H44020699)每次0.3 g,每天1次,利福平(广东华南药业集团有限公司,国药准字H44020771)每次0.45 g,每天1次,吡嗪酰胺(广东华南药业集团有限公司,国药准字H44020761)每次0.5 g,每天2次,每周3 d,乙胺丁醇(广东华南药业集团有限公司,国药准字H44020758)每次0.5 g,每天2次,每周3 d;疗程6个月(2个月强化期+4个月巩固期)。对照组患者采用2H3R3Z3E3/4H3R3标准四联疗法方案治疗:异烟肼(广东华南药业集团有限公司,国药准字H44020699)每次0.3 g,隔日1次,利福平(成都锦华药业有限责任公司,国药准字H51020786)每次0.45 g,隔日1次,吡嗪酰胺(沈阳红旗制药有限公司,国药准字H21022354)每次 0.5 g,隔日1次,乙胺丁醇(杭州民生药业有限公司,国药准字H33021602)每次 0.5 g,隔日1次;疗程2个月;随后,异烟肼(广东华南药业集团有限公司,国药准字H44020699)每次 0.3 g,隔日1次,利福平(成都锦华药业有限责任公司,国药准字H51020786)每次0.45 g,隔日1次;疗程4个月。

1.2.2疗效评价 分别在治疗2、4个月时,统计3组患者痰菌转阴情况及胸部X线病灶吸收情况。痰菌转阴标准:连续2次痰液分离培养阴性,且之后痰菌检查均为阴性。显吸:X线片显示病灶缩小≥50%,空洞闭合;吸收:X线片显示病灶缩小<50%,但空洞变小;不变(未吸收):X线片显示病灶无明显变化;恶化:X线片显示病灶播散或增大。有效吸收=显吸+吸收。

1.3检测方法 (1)分别于治疗前及治疗2、4个月后,采集3组患者外周静脉血5 mL,3 000 r/min离心,分离上层血清,置于-80 ℃冰箱内保存待用。(2)采用酶联免疫吸附试验检测血清sTREM-1及sTim3水平,试剂盒均购自美国R&D公司。严格按照试剂盒相关标准进行实验操作。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清cullin4A mRNA表达水平。采用Trizol法提取总RNA,Nanodrop2000c超微量分光光度计检测RNA浓度。cullin4A正向引物为5′-CTACTGGCCAACATACACGC-3′,反向引物为5′-AAGCCATCTCCCTCGTTGCC-3′。内参GAPDH正向引物为5′-AACTCCATCATGAAGTGTGA-3′,反向引物为5′-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3′。RT-qPCR反应体系:SYBR Rremix ExTaq Ⅱ(2×)10 μL,cDNA 2 μL,正、反向引物各0.8 μL,ROX Reference Dye(50×)0.4 μL,双蒸水6 μL。反应条件:95 ℃预变性2 min,95 ℃变性15 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,循环40次。以GAPDH为内参,采用2-ΔΔCt法计算cullin4A mRNA相对表达量。

1.4观察指标 (1)3组患者临床疗效。(2)3组患者治疗前后患者血清sTREM-1、sTim3水平及血清cullin4A mRNA表达情况。(3)血清sTREM-1、sTim3、cullin4A与痰菌转阴的关系。(4)血清sTREM-1、sTim3、cullin4A与肺结核患者病灶吸收情况的关系。

2 结 果

2.13组患者临床疗效比较 4MRZE组、2HRZE/4HR组在治疗2、4个月时的痰菌转阴率及病灶有效吸收率均显著高于对照组,且4MRZE组高于2HRZE/4HR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。疗程完成后,3组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组患者临床疗效[n(%)]

2.23组肺结核患者治疗前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平比较 3组患者治疗后血清sTREM-1、sTim3呈下降趋势,而cullin4A mRNA呈上升趋势,4MRZE组患者治疗2、4个月时血清sTREM-1、sTim3显著低于2HRZE/4HR组、对照组,而cullin4A mRNA显著高于2HRZE/4HR组、对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但疗程结束后3组血清sTREM-1、sTim3水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 3组肺结核患者治疗前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平比较

2.3血清sTREM-1、sTim3、cullin4A与痰菌转阴的关系 治疗4个月,4MRZE组共81例患者痰菌转阴,2HRZE/4HR共69例患者痰菌转阴,对照组共83例患者痰菌转阴。痰菌转阴及未转阴在治疗前及治疗2、4个月时,血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趋势,cullin4A mRNA均呈依次上升趋势,组内不同时间点差异有统计学意义(P<0.05)。但痰菌转阴者治疗前及治疗2、4个月时,血清sTREM-1、sTim3水平均显著低于痰菌未转阴者,血清cullin4A mRNA显著高于痰菌未转阴者(P<0.05)。见表3。

表3 血清sTREM-1、sTim3、cullin4A与痰菌转阴的关系

2.4血清sTREM-1、sTim3、cullin4A与肺结核患者病灶吸收情况的关系 治疗4个月时,4MRZE组80例患者病灶有效吸收,2HRZE/4HR共65例患者病灶有效吸收,对照组共79例患者病灶有效吸收;病灶有效吸收者及病灶未吸收或恶化者在治疗前及治疗2、4个月时,血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趋势,cullin4A mRNA均呈依次上升趋势,组内不同时间点差异均有统计学意义(P<0.05)。但病灶有效吸收者治疗前及治疗2、4个月时,血清sTREM-1、sTim3水平均显著低于病灶未吸收或恶化者,血清cullin4A mRNA显著高于痰菌未转阴者病灶未吸收或恶化者,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 血清sTREM-1、sTim3、cullin4A与肺结核患者病灶吸收情况的关系

3 讨 论

肺结核主要由结核分枝杆菌引起的慢性传染性疾病,结核分枝杆菌主要寄存于巨噬细胞内,通过降低患者机体免疫力促进肺结核的发生与发展[7-9]。HRZE是目前治疗肺结核最常见的化疗方案,其中异烟肼是合成抗菌药物,能有效抑制烯酰基载体蛋白还原酶,杀灭细菌,并降低超氧化物歧化酶活性,抑制结核分枝杆菌增殖;吡嗪酰胺是一线抗结核药物,利福平为广谱抗生素,能与结核分枝杆菌转录酶的β亚基单位牢固结合,阻断其DNA复制,有效中止蛋白合成;乙胺丁醇能干扰其RNA合成,抑制其增殖。但传统HRZE化疗方案治疗时间长,不良反应多。4MRZE将异烟肼更换为莫西沙星,莫西沙星对多重耐药菌株均具有良好的体外抗菌活性,能缩短治疗疗程,降低药物不良反应。本研究中4MRZE组患者治疗2、4个月的痰菌转阴率分别为62.50%、87.50%,病灶有效吸收率分别为55.68%、80.68%,痰菌转阴率及病灶有效吸收率均显著高于2HRZE/4HR组(P<0.05),而3组治疗完成后最终疗效差异无统计学意义(P>0.05),表明4MRZE的最终治疗效果与2HRZE/4HR及经典方案相近,但是所需的治疗时间明显缩短。这与蔡青山等[10]、冯雄等[11]研究结果相近。

血清sTREM是髓样细胞触发受体(TREM)的可溶性形式,sTREM-1是其超家族中的重要成员,其在中性粒白细胞、CD14+单核-巨噬细胞、肺巨噬细胞等单核细胞源性上皮样细胞上呈高表达,在触发、扩大炎症反应中发挥重要的功效[12]。朱俊等[13]研究发现,血清sTREM-1水平升高将增加肺结核患者病情控制不良风险,并在预测患者预后方面也具有一定的作用,提示血清sTREM-1在提示肺结核病情中具有一定的价值。sTim-3表达于活化的T细胞表面,能抑制抗γ-干扰素等细胞因子分泌,降低巨噬细胞吞噬能力,并诱导T细胞免疫耐受[14-15]。cullin4A属于泛素蛋白酶体系,可介导蛋白质降解,调节细胞周期,维护基因组稳定性等。闫书娜等[6]研究发现,与健康者及潜伏肺结核患者相比,肺结核患者血清cullin4A水平明显下降,并与miR-194-5p呈负相关,推测cullin4A可能参与肺结核的发生及发展。

本研究结果发现,3种化疗方案治疗2、4个月及疗程结束后,肺结核患者血清sTREM-1、sTim3水平呈依次下降趋势,血清cullin4A mRNA水平呈依次上升趋势,提示血清sTREM-1、sTim3、cullin4A在反映肺结核患者治疗效果中具有一定价值。进一步分析4MRZE方案治疗4个月后痰菌转阴者与未转阴者、病灶有效吸收及未吸收患者血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平发现81例患者痰菌转阴者及7例未转阴者在治疗前、治疗2个月及4个月时,血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趋势,cullin4A mRNA均呈依次上升趋势,组内不同时间点内差异显著,但痰菌转阴者治疗前、治疗2个月及4个月时,血清sTREM-1、sTim3水平均显著低于痰菌未转阴者,血清cullin4A mRNA显著高于痰菌未转阴者,且病灶有效吸收与未吸收者血清sTREM-1、sTim3、cullin4A RNA也呈现一致的规律。这提示血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平可反映肺结核患者病情及疗效。

综上所述,4MRZE化疗方案在治疗肺结核中具有良好的效果,随着治疗的进行,患者血清sTREM-1、sTim3水平呈下降趋势,cullin4A水平呈上升趋势,三者在反映痰菌转阴及病灶有效吸收中也具有良好的价值。