甲状腺乳头状癌组织中GCDFP15、Calponin的表达及临床意义

毛 玉,韩爱军,刘 勋,杨建均,胡恒辉,罗 阳

乐山市人民医院病理科,四川乐山 614000

甲状腺乳头状癌发病率占甲状腺癌的70%～90%[1],临床多发生于女性,虽预后较好、生存率高,但仍有部分患者的癌细胞因发生转移和扩散导致预后生存期不理想[2]。既往研究发现,甲状腺乳头状癌发生、发展及预后与多种分子蛋白相关[3]。巨囊性病液体蛋白15(GCDFP15)是人体大汗腺的标志物,目前研究多将其用于乳腺癌的诊断[4]。类肌钙蛋白(Calponin)是与肌钙蛋白相结合的蛋白质家族成员之一,与细胞骨架形成、肌肉收缩和细胞黏附等密切相关[5]。有研究显示,呈侵袭性生长的乳房外佩吉特病患者GCDFP15表达为强阳性或阳性,且其表达对于判断患者是否呈侵袭性生长有一定意义[6]。但目前关于上述指标在甲状腺乳头状癌中的作用鲜见报道。因此,本研究拟分析甲状腺乳头状癌组织中GCDFP15、Calponin的表达水平及临床意义,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年1月至2017年5月经本院确诊并行手术切除的102例甲状腺乳头状癌患者作为研究对象,年龄20～65岁、平均(35.36±6.66)岁;男28例,女74例。将经手术切除的甲状腺乳头状癌组织作为研究组,相对应的癌旁正常甲状腺组织作为正常组。本研究获得本院医学伦理委员会批准,患者及其家属签署知情同意书。纳入标准:符合甲状腺乳头状癌的相关诊断标准[7],并经病理检查已确诊。排除标准:(1)伴有免疫功能疾病、严重感染性疾病及其他恶性肿瘤者;(2)严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍者;(3)术前经放疗、化疗及生物等其他抗肿瘤手段者;(4)既往精神病史或存在语言、认知功能障碍者;(5)临床资料不全或无法完全配合本研究者。

1.2方法

1.2.1GCDFP15、Calponin的表达水平检测 标本经10%中性福尔马林固定,脱水石蜡包埋、4 μm连续切片、脱蜡、水化,应用柠檬酸盐缓冲液修复抗原,磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗3次(每次3 min),加入一抗(鼠抗人GCDFP15单克隆抗体、兔抗Calponin单克隆抗体,福州迈新生物技术开发有限公司)4 ℃孵育过夜,PBS漂洗再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗。37 ℃孵育30 min,PBS漂洗后使用DAB显色、苏木素复染、梯度乙醇脱水以及树脂胶封片,最后镜下观察,阴性对照组以PBS为一抗。严格按照SP法检测试剂盒说明书进行操作。

1.2.2结果判定[8]免疫结果由两位高年资的病理医师共同采用双盲法完成,GCDFP15、Calponin阳性表达分别定位于细胞质、细胞膜或细胞核中,并呈黄素或棕黄色颗粒状分布。每个切片随机选择10个视野,按照细胞染色强度与阳性细胞百分比得出免疫组织化学染色评分。阳性细胞染色强度评分:无色为0分、浅黄色为1分、棕色为2分、深褐色为3分。阳性细胞占总细胞百分比:<5%为0分、5%～25%为1分、>25%～50%为2分、>50%～75%为3分、>75%为4分。最终得分为阳性细胞百分比分数和染色强度平均分数的乘积,得分≥3分为阳性,<3分为阴性。

1.3随访 所有患者以术后出院为观察点,并采用电话、门诊复诊或上门等方式结合患者复诊病历随访5年,随访截止时间为2022年4月30日或患者发生肿瘤转移或死亡。

2 结 果

2.1两组GCDFP15、Calponin的表达情况比较 研究组GCDFP15阳性表达率(64.71%)明显高于对照组(29.41%),Calponin阳性表达率(39.22%)明显低于对照组(66.68%),差异均有统计学意义(P<0.05),见表1、图1。

注:A为GCDFP15阴性;B为GCDFP15阳性;C为Calponin阴性;D为Calponin阳性。

表1 两组GCDFP15、Calponin的表达情况比较[n(%)]

2.2GCDFP15、Calponin表达与甲状腺乳头状癌患者病理特征的关系 不同GCDFP15、Calponin表达甲状腺乳头状癌患者年龄、性别、肿瘤最大径差异无统计学意义(P>0.05),但TNM分期、侵犯被膜、淋巴结转移差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 GCDFP15、Calponin表达与甲状腺乳头状癌病理特征的关系

2.3生存情况 本研究102例患者5年生存率为49.02%(50/102)。其中GCDFP15阳性、阴性随访患者5年生存率分别为39.39%(26/66)、66.67%(24/36),Calponin阳性、阴性随访患者5年生存率分别为61.29%(38/62)、30.00%(12/40)。GCDFP15、Calponin阳性、阴性5年生存率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.4甲状腺乳头状癌预后的单因素分析 单因素分析结果显示,甲状腺乳头状癌5年生存率与TNM分期、侵犯被膜、淋巴结转移、GCDFP15阳性及Calponin阴性表达有关(P<0.05)。见表3。

表3 甲状腺乳头状癌预后的单因素分析[n(%)]

2.5甲状腺乳头状癌病预后的多因素COX分析 多因素COX比例风险回归模型分析得出,TNM T3～4期、淋巴结转移、侵犯被膜及GCDFP15阳性、Calponin阴性表达均为影响甲状腺乳头状癌病预后的独立危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 甲状腺乳头状癌病预后的多因素COX回归分析

3 讨 论

甲状腺乳头状癌是甲状腺癌最常见的病理类型,其恶性程度低,虽近年来临床疗效已得到较好改善,但仍存在复发、转移等预后问题[9-10]。为了提高治疗效果、降低复发率和病死率,探寻早期诊断甲状腺乳头状癌和影响预后的因子,本研究拟分析甲状腺乳头状癌组织中GCDFP15、Calponin表达水平及临床意义。

GCDFP15是一种在大汗腺、泌乳腺、涎腺中有均有表达的标志物。有研究显示,GCDFP15在鉴别及诊断乳腺癌方面具有较好的优势[11]。乳腺癌患者癌组织GCDFP15阳性表达率高于癌旁正常组织[12]。本研究结果显示,研究组GCDFP15阳性表达率明显高于对照组(P<0.05),提示甲状腺乳头状癌发生可能与GCDFP15有关。本研究还发现,GCDFP15表达在TNM分期、侵犯被膜、淋巴结转移之间差异有统计学意义(P<0.05),说明GCDFP15阳性表达在甲状腺乳头状癌发展中起促癌作用。GCDFP15阳性患者5年生存率低于阴性(P<0.05),说明GCDFP15阳性与预后密切相关。有研究显示,GCDFP15参与乳腺癌细胞恶性进展[13]。单因素及多因素COX回归分析结果显示,GCDFP15阳性表达为影响甲状腺乳头状癌病预后的独立危险因素(P<0.05),提示GCDFP15阳性表达能够影响甲状腺乳头状癌的发展及预后,可作为临床评估患者发生、发展及预后有效指标。由此推测,GCDFP15阳性可能与肿瘤细胞增殖有关,因此认为GCDFP15能够参与甲状腺乳头状癌恶性进展及复发。

Calponin属于细胞骨架类蛋白,不仅在平滑肌收缩、非肌细胞肌动蛋白骨架方面发挥重要作用,同时在细胞增殖、黏附、迁移、分化、吞噬和细胞融合中也有重要作用[14]。有研究显示,Calponin表达随着慢性乙型肝炎病变加重而增强[15]。同时有研究发现,Calponin在肿瘤发展过程中具备重要作用[16]。本研究结果显示,Calponin在研究组中阳性表达率明显低于对照组(P<0.05),提示Calponin在甲状腺乳头状癌组织中呈阴性表达,可能参与疾病发生。为了明确Calponin阳性表达与甲状腺乳头状癌与临床病理参数的关系,经过分析结果显示Calponin阳性表达与TNM分期、侵犯被膜、淋巴结转移有关(P<0.05),说明甲状腺乳头状癌发展进程可能与Calponin阳性表达有关。生存分析结果显示,Calponin表达与甲状腺乳头状癌5年生存率相关。经单因素、多因素COX回归分析结果显示,Calponin阴性表达为影响甲状腺乳头状癌病预后的独立危险因素(P<0.05),提示Calponin阴性表达与甲状腺乳头状癌发生、进展及预后有关。Calponin根据等电点不同可分为H1-Calponin、H2-Calponin、H3-Calponin 3种亚型。有研究显示,H2-Calponin表达下调能够导致多种肿瘤细胞增殖、转移[17]。Calponin阴性表达与老年乳腺癌患者术后复发转移有关,可为老年乳腺癌患者术后复发转移的风险预测指标[18]。由此说明,Calponin阴性可能会增加甲状腺乳头状癌复发、转移等不良预后风险。

综上所述,甲状腺乳头状癌组织中GCDFP15呈阳性表达,Calponin呈阴性表达,二者表达水平与甲状腺乳头状癌患者TNM分期、侵犯被膜、淋巴结转移有关,GCDFP15、Calponin有望作为评估甲状腺乳头状癌患者预后的指标。